GB/T 42114-2022
基本信息
标准号： GB/T 42114-2022
中文名称：木薯叶片中黄酮醇的测定 高效液相色谱法
标准类别：国家标准(GB)
英文名称：Determination of flavonol in cassava leaves—High-performance liquid chromatography
标准状态：现行
发布日期：2022-12-30
实施日期：2023-07-01
出版语种：简体中文
下载格式：.pdf .zip
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：12页
标准价格：29.0
相关单位信息
起草人：王琴飞、张振文、陆柏益、杨丽、孙彩霞、张彦军、林立铭、余厚美、陆小静、韦卓文、李开绵
起草单位：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、浙江省农业科学院、中国标准化研究院、浙江大学、中国热带农业科学院香料饮料研究所
归口单位：中国标准化研究院
提出单位：中国标准化研究院
发布部门：国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会
标准简介
本文件描述了木薯（?Manihot esculenta? Crantz，Cassava)叶中4种黄酮醇化合物的高效液相色谱测定方法。本文件适用于木薯鲜叶和木薯干叶中杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷4种黄酮醇含量的测定。
标准图片预览
标准内容
ICS 67.050bzxz.net
CCS X 04
中华人民共和国国家标准
GB/T42114—2022
木薯叶片中黄酮醇的测定
高效液相色谱法
Determination of flavonol in cassava leaves-High-performance liquid chromatography2022-12-30 发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2023-07-01实施
GB/T42114—2022
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则厂第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国标准化研究院提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、浙江省农业科学院、中国标准化研究院、浙江大学、中国热带农业科学院香料饮料研究所。本文件主要起草人：王琴飞、张振文、陆柏益、杨丽、孙彩霞、张彦军、林立铭、余厚美、陆小静、韦卓文、李开绵。
1范围
木薯叶片中黄酮醇的测定
高效液相色谱法
GB/T 42114—2022
本文件描述了木薯（ManihotesculentaCrantz，Cassava）叶中4种黄酮醇化合物的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于木薯鲜叶和木薯干叶中杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷4种黄酮醇含量的测定规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682
3术语和定义
分析实验室用水规格和试验方法本文件没有需要界定的术语和定义4原理
木薯叶片试样中加人50%乙醇水溶液，经超声波辅助提取，高效液相色谱仪分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，根据保留时间定性和外标法定量。5试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，以及符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂
甲醇（CH：OH,CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.1
5.1.2无水乙醇（CHCH2OH,CAS号：64-17-5）：色谱纯。5.1.3磷酸（H:PO4,CAS号：7664-38-2)。5.2试剂配制
5.2.150%乙醇水溶液（体积分数）：取500mL无水乙醇（5.1.2），加人500mL水，混匀5.2.20.2%磷酸水溶液（体积分数）：取2.0mL磷酸（5.1.3），置于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。
5.3标准品
5.3.1杨梅苷（myricetin-3-O-rutinoside，C2HsoO17，CAS号：41093-68-9）：纯度≥98.0%。1
GB/T42114—2022
5.3.2芦丁（quercetin3-O-rutinoside，C2H3oO16，CAS号：153-18-4）：纯度≥98.0%5.3.3烟花苷（kaempferol-3-O-rutinoside，C27HaoO15，CAS号：17650-84-9）：纯度≥98.0%。5.3.4水仙苷（isorhamnetin-3-O-rutinoside，C2sH32O16，CAS号：604-80-8）：纯度≥98.0%。5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备溶液
称取杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷标准品分别为100.0mg、600.0mg、300.0mg和100.0mg，加甲醇（5.1.1）溶解并定容至100mL，配成质量浓度分别为1.0mg/mL、6.0mg/mL、3.0mg/mL和1.0mg/mlL标准储备液，于一18℃密封避光保存。保存期6个月。5.4.2标准中间工作溶液
分别移取1.0mL的杨梅苷、芦丁、烟花苷、水仙苷标准储备溶液（5.4.1）于10mL棕色容量瓶中，用50%乙醇水溶液（5.2.1）定容，获得4种黄酮醇标准品质量浓度分别为100.0μg/mL、600.0ug/mL、300.0μg/mL、100.0ug/mL标准中间工作溶液，现配现用。5.4.3系列混合标准工作液
准确移取一定体积的标准中间工作溶液（5.4.2），用50%乙醇水溶液（5.2.1）逐级稀释，配制成杨梅苷质量浓度分别为0.25μg/mL、0.5μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL，芦丁质量浓度分别为0.15μg/mL、3.0μg/mL、15.0μg/mL、30.0μg/mL、150.0μg/mL、300.0μg/mL、600.0μg/mL，烟花苷质量浓度分别为0.15μg/mL、1.5μg/mL、7.5μg/mL、15.0μg/mL、75.0μg/mL、150.0μg/mL、300.0μg/mL，水仙苷质量浓度分别为0.15μg/mL0.5μg/mL、2.5μg/mL、5.0ug/mL、25.0μg/mL、50.0uμg/mL、100.0μg/mL的系列混合标准工作液，现配现用。6仪器与设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器6.2天平：感量0.1mg和0.01g。
超声波清洗器：功率≥500W。
离心机：转速≥4200r/min，配15mL转子或适配器。6.5电热恒温干燥箱。
6.6植物组织研磨仪。
6.7旋涡混合器。
离心管：15mL和50mL。
6.9容量瓶：10mL和1000mL。
移液管：0.1mL、0.2mL、0.5mL和1.0mL。6.11PTFE亲水微孔滤膜或相当性能的滤膜：孔径0.22μm。7试样制备与保存
7.1木薯鲜叶
取适量木薯新鲜叶片（不带叶柄），擦拭干净表面尘土或水分，用液氮速冻后研磨至粉末，装入洁净的离心管中。试样制备后于一18℃以下密封避光保存。保存期1年。2
7.2木薯干叶
GB/T42114—2022
取适量的木薯干叶（不带叶柄），用植物组织研磨仪研磨至粉末，过0.2mm的筛，混匀，装人洁净的密封袋中。试样制备后于8℃以下密封避光保存。保存期1年。8测定步骤
8.1提取
准确称取木薯鲜叶或木薯干叶粉末0.2g（土0.0002g）于15mL离心管中，加人50%乙醇水溶液（5.2.1）5.0mL，旋涡振荡混匀，超声提取60min（50℃，500W），离心10min（4200r/min，25℃），上清液转移至10mL容量瓶中，残渣再加人50%乙醇水溶液（5.2.1）5.0mL，旋涡振荡混匀，离心5min（10000r/min，25℃），合并两次离心的上清液，加人50%乙醇水溶液（5.2.1）定容至10mL，旋涡振荡混匀，即待测样品溶液。取1.0mL待测样品溶液，通过0.22μm微孔滤膜（6.11），供高效液相色谱仪检测。
8.2测定
色谱参考条件
高效液相色谱仪（6.1)的色谱参考条件如下：C1s柱（250mmX4.6mm，5μm）或性能相当的色谱柱；a）
流动相：甲醇和0.2%磷酸水溶液，按表1的规定进行梯度洗脱；流速：0.8mL/min;
检测波长：360nm；
进样量：10uL；
柱温：40℃。
表1梯度洗脱表
8.2.2标准曲线的制作
0.2%磷酸水溶液
取适量标准中间工作溶液（5.4.2），用50%乙醇稀释成系列混合标准工作液（5.4.3），杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷质量浓度范围分别为：0.25mg/L~100.0mg/L、0.15mg/L～600.0mg/L、0.15mg/L~300.0mg/L和0.15mg/L～100.0mg/L。按照8.2.1规定的色谱条件测定，以标准溶液质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线。4种黄酮醇标准溶液色谱图见附录A。3
GB/T 42114—2022
8.2.3试样溶液的测定
按照8.2.1规定的色谱条件，将待测样品溶液（8.1)注入高效液相色谱仪（6.1）中进行测试，根据标准溶液色谱峰的保留时间进行定性。试样溶液中4种黄酮醇的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围应稀释后再进行分析，外标法定量。9结果计算与表述
9.1木薯叶片中黄酮醇各组分含量试样中木薯叶黄酮醇各组分含量，按式(1)计算。X; =p: ×V×1 000
mX1000
式中：
试样中某一黄酮醇组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；.（1）
从标准工作曲线得到的试样溶液中各组分的质量浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；试样提取液定容体积，单位为毫升（mL）；)——单位换算系数；
试样质量，单位为克（g）；
稀释倍数。
9.2木薯叶黄酮醇总含量
试样中黄酮醇总含量为各组分之和，按式（2)计算。X=ZX
式中：
X—-试样中黄酮醇总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；X：-试样中某一黄酮醇组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。注：本文件中4种黄酮醇已包括木薯叶片中黄酮醇的绝大部分含量，可视为木薯叶片中黄酮醇总含量。9.3结果表示
（2）
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留至小数点后一位。10精密度
10.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的10%再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的15%。11
检出限和定量限
本方法测定黄酮醇的检出限和定量限见表2。4
化合物名称
杨梅苷
烟花苔
水仙苔
黄酮醇化合物检出限与定量限
检出限
GB/T42114—2022
单位为毫克每千克
定量限
GB/T42114—2022
（资料性）
4种黄酮醇混合标准溶液色谱图
4种黄酮醇混合标准溶液色谱图见图A.1。800 3
杨梅苷
烟花苷
水仙香
保留时间/min
注：杨梅苷、芦丁、烟花苷、水仙苷质量浓度分别为：50.0mg/L、300.0mg/L、150.0mg/L、50.0mg/L。图A.1
4种黄酮醇混合标准溶液高效液相色谱图
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CCS X 04
中华人民共和国国家标准
GB/T42114—2022
木薯叶片中黄酮醇的测定
高效液相色谱法
Determination of flavonol in cassava leaves-High-performance liquid chromatography2022-12-30 发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2023-07-01实施
GB/T42114—2022
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则厂第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国标准化研究院提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、浙江省农业科学院、中国标准化研究院、浙江大学、中国热带农业科学院香料饮料研究所。本文件主要起草人：王琴飞、张振文、陆柏益、杨丽、孙彩霞、张彦军、林立铭、余厚美、陆小静、韦卓文、李开绵。
1范围
木薯叶片中黄酮醇的测定
高效液相色谱法
GB/T 42114—2022
本文件描述了木薯（ManihotesculentaCrantz，Cassava）叶中4种黄酮醇化合物的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于木薯鲜叶和木薯干叶中杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷4种黄酮醇含量的测定规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682
3术语和定义
分析实验室用水规格和试验方法本文件没有需要界定的术语和定义4原理
木薯叶片试样中加人50%乙醇水溶液，经超声波辅助提取，高效液相色谱仪分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，根据保留时间定性和外标法定量。5试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，以及符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂
甲醇（CH：OH,CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.1
5.1.2无水乙醇（CHCH2OH,CAS号：64-17-5）：色谱纯。5.1.3磷酸（H:PO4,CAS号：7664-38-2)。5.2试剂配制
5.2.150%乙醇水溶液（体积分数）：取500mL无水乙醇（5.1.2），加人500mL水，混匀5.2.20.2%磷酸水溶液（体积分数）：取2.0mL磷酸（5.1.3），置于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。
5.3标准品
5.3.1杨梅苷（myricetin-3-O-rutinoside，C2HsoO17，CAS号：41093-68-9）：纯度≥98.0%。1
GB/T42114—2022
5.3.2芦丁（quercetin3-O-rutinoside，C2H3oO16，CAS号：153-18-4）：纯度≥98.0%5.3.3烟花苷（kaempferol-3-O-rutinoside，C27HaoO15，CAS号：17650-84-9）：纯度≥98.0%。5.3.4水仙苷（isorhamnetin-3-O-rutinoside，C2sH32O16，CAS号：604-80-8）：纯度≥98.0%。5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备溶液
称取杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷标准品分别为100.0mg、600.0mg、300.0mg和100.0mg，加甲醇（5.1.1）溶解并定容至100mL，配成质量浓度分别为1.0mg/mL、6.0mg/mL、3.0mg/mL和1.0mg/mlL标准储备液，于一18℃密封避光保存。保存期6个月。5.4.2标准中间工作溶液
分别移取1.0mL的杨梅苷、芦丁、烟花苷、水仙苷标准储备溶液（5.4.1）于10mL棕色容量瓶中，用50%乙醇水溶液（5.2.1）定容，获得4种黄酮醇标准品质量浓度分别为100.0μg/mL、600.0ug/mL、300.0μg/mL、100.0ug/mL标准中间工作溶液，现配现用。5.4.3系列混合标准工作液
准确移取一定体积的标准中间工作溶液（5.4.2），用50%乙醇水溶液（5.2.1）逐级稀释，配制成杨梅苷质量浓度分别为0.25μg/mL、0.5μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL，芦丁质量浓度分别为0.15μg/mL、3.0μg/mL、15.0μg/mL、30.0μg/mL、150.0μg/mL、300.0μg/mL、600.0μg/mL，烟花苷质量浓度分别为0.15μg/mL、1.5μg/mL、7.5μg/mL、15.0μg/mL、75.0μg/mL、150.0μg/mL、300.0μg/mL，水仙苷质量浓度分别为0.15μg/mL0.5μg/mL、2.5μg/mL、5.0ug/mL、25.0μg/mL、50.0uμg/mL、100.0μg/mL的系列混合标准工作液，现配现用。6仪器与设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器6.2天平：感量0.1mg和0.01g。
超声波清洗器：功率≥500W。
离心机：转速≥4200r/min，配15mL转子或适配器。6.5电热恒温干燥箱。
6.6植物组织研磨仪。
6.7旋涡混合器。
离心管：15mL和50mL。
6.9容量瓶：10mL和1000mL。
移液管：0.1mL、0.2mL、0.5mL和1.0mL。6.11PTFE亲水微孔滤膜或相当性能的滤膜：孔径0.22μm。7试样制备与保存
7.1木薯鲜叶
取适量木薯新鲜叶片（不带叶柄），擦拭干净表面尘土或水分，用液氮速冻后研磨至粉末，装入洁净的离心管中。试样制备后于一18℃以下密封避光保存。保存期1年。2
7.2木薯干叶
GB/T42114—2022
取适量的木薯干叶（不带叶柄），用植物组织研磨仪研磨至粉末，过0.2mm的筛，混匀，装人洁净的密封袋中。试样制备后于8℃以下密封避光保存。保存期1年。8测定步骤
8.1提取
准确称取木薯鲜叶或木薯干叶粉末0.2g（土0.0002g）于15mL离心管中，加人50%乙醇水溶液（5.2.1）5.0mL，旋涡振荡混匀，超声提取60min（50℃，500W），离心10min（4200r/min，25℃），上清液转移至10mL容量瓶中，残渣再加人50%乙醇水溶液（5.2.1）5.0mL，旋涡振荡混匀，离心5min（10000r/min，25℃），合并两次离心的上清液，加人50%乙醇水溶液（5.2.1）定容至10mL，旋涡振荡混匀，即待测样品溶液。取1.0mL待测样品溶液，通过0.22μm微孔滤膜（6.11），供高效液相色谱仪检测。
8.2测定
色谱参考条件
高效液相色谱仪（6.1)的色谱参考条件如下：C1s柱（250mmX4.6mm，5μm）或性能相当的色谱柱；a）
流动相：甲醇和0.2%磷酸水溶液，按表1的规定进行梯度洗脱；流速：0.8mL/min;
检测波长：360nm；
进样量：10uL；
柱温：40℃。
表1梯度洗脱表
8.2.2标准曲线的制作
0.2%磷酸水溶液
取适量标准中间工作溶液（5.4.2），用50%乙醇稀释成系列混合标准工作液（5.4.3），杨梅苷、芦丁、烟花苷和水仙苷质量浓度范围分别为：0.25mg/L~100.0mg/L、0.15mg/L～600.0mg/L、0.15mg/L~300.0mg/L和0.15mg/L～100.0mg/L。按照8.2.1规定的色谱条件测定，以标准溶液质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线。4种黄酮醇标准溶液色谱图见附录A。3
GB/T 42114—2022
8.2.3试样溶液的测定
按照8.2.1规定的色谱条件，将待测样品溶液（8.1)注入高效液相色谱仪（6.1）中进行测试，根据标准溶液色谱峰的保留时间进行定性。试样溶液中4种黄酮醇的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围应稀释后再进行分析，外标法定量。9结果计算与表述
9.1木薯叶片中黄酮醇各组分含量试样中木薯叶黄酮醇各组分含量，按式(1)计算。X; =p: ×V×1 000
mX1000
式中：
试样中某一黄酮醇组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；.（1）
从标准工作曲线得到的试样溶液中各组分的质量浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；试样提取液定容体积，单位为毫升（mL）；)——单位换算系数；
试样质量，单位为克（g）；
稀释倍数。
9.2木薯叶黄酮醇总含量
试样中黄酮醇总含量为各组分之和，按式（2)计算。X=ZX
式中：
X—-试样中黄酮醇总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；X：-试样中某一黄酮醇组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。注：本文件中4种黄酮醇已包括木薯叶片中黄酮醇的绝大部分含量，可视为木薯叶片中黄酮醇总含量。9.3结果表示
（2）
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留至小数点后一位。10精密度
10.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的10%再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的15%。11
检出限和定量限
本方法测定黄酮醇的检出限和定量限见表2。4
化合物名称
杨梅苷
烟花苔
水仙苔
黄酮醇化合物检出限与定量限
检出限
GB/T42114—2022
单位为毫克每千克
定量限
GB/T42114—2022
（资料性）
4种黄酮醇混合标准溶液色谱图
4种黄酮醇混合标准溶液色谱图见图A.1。800 3
杨梅苷
烟花苷
水仙香
保留时间/min
注：杨梅苷、芦丁、烟花苷、水仙苷质量浓度分别为：50.0mg/L、300.0mg/L、150.0mg/L、50.0mg/L。图A.1
4种黄酮醇混合标准溶液高效液相色谱图
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