GB/T 35951-2018.Determination of eight macrolide antibiotics such as spiramycin in cosmetics-LC MS/MS.
GB/T 35951规定了化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素含量的液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、允许差等内容。
GB/T 35951适用于膏霜乳液、水剂类化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素含量的测定。
GB/T 35951方法检出限与定量限参见附录A中的表A.1。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注8期的引用文件,仅注8期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3试验方法
3.1 原理
样品经提取液超声提取、离心后,经固相萃取小柱净化,用液相色谱串联质谱法测定和确证,外标法定量。
3.2试剂和材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.2.1甲 醇:色谱纯。
3.2.2乙腈 :色谱纯。
3.2.3甲 酸:色谱纯。
3.2.4正已烷:色谱纯。
3.2.5氢 氧化钠。
3.2.6磷酸二氢钠。
3.2.7 0.1 mol/L氢氧化钠溶液:称取4.0 g氢氧化钠,并用水稀释至1 L。
3.2.8甲醇水溶液(3+7):量取30 mL甲醇(3.2.1)与70 mL水混合。
3.2.9乙 腈水溶液(2+8):量取20 mL乙腈(3.2.2)与80 mL水混合。
3.2.10磷酸盐 缓冲溶液(0.1 mol/L) :溶解12.2 g磷酸二氢钠于950 mL水中,用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0,最后用水稀释至1 L。

ICS71.100.70
中华人民共和国国家标准
GB/T35951—2018
化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of eight macrolide antibiotics such asspiramycinincosmeticsLC-MS/MS2018-02-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-09-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口。GB/T35951—2018
本标准起草单位：苏州世谱检测技术有限公司、广东华鑫检测技术有限公司、江苏隆力奇生物科技股份有限公司、上海市日用化学工业研究所、完美（中国）有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、苏州质量检测科学研究院、河北省食品检验研究院、江苏省食品药品监督检验研究院、江苏省产品质量监督检验研究院、苏州大学、苏州赛分科技有限公司。本标准主要起草人：车文军、杨洋、沈敏、代丹、周建青、张丽华、李晓敏、陆小宇、杨安全、范素芳方萍、袁利文、刘园、李海、廖华勇、康薇、王小丹、张征、张岩、武中平、卢剑、李建祥、黄学英、GB/T35951—2018
本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用物质。禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，应进行安全性风险评估，确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。目前我国尚规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。KAoNiKAca
1范围
化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T35951—2018
本标准规定了化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素含量的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、允许差等内容。
本标准适用于膏霜乳液、水剂类化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素含量的测定。本标准方法检出限与定量限参见附录A中的表A.1。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试验方法
3.1原理
样品经提取液超声提取、离心后，经固相萃取小柱净化，用液相色谱串联质谱法测定和确证，外标法定量。
3.2试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.2.1甲醇：色谱纯。
乙：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
正已烷：色谱纯。
氢氧化钠。
磷酸二氢钠
0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，并用水稀释至1L。甲醇水溶液（3+7)：量取30mL甲醇（3.2.1)与70mL水混合。乙腈水溶液（2+8）：量取20mL乙睛（3.2.2）与80mL水混合。3.2.10磷酸盐缓冲溶液（0.1mol/L)：溶解12.2g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，最后用水稀释至1L。3.2.118种大环内酯抗生素标准样品/物质：纯度均不小于96%。螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素的药物名称、英文名称、CAS登录号、分了式、相对分子1
rKAOiKAca
GB/T35951——2018
质量及结构式参见附录B中的表B,1。3.2.12标准储备溶液：准确称取适量各标准物质（3.2.11）分别置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为500mg/L的储备液，冷藏避光保存，有效期为一个月。3.2.13混合标准储备溶液：分别准确移取阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉素、罗红霉素标准储备溶液（3.2.12)0.2mL和螺旋霉素、替米考星标准储备溶液（3.2.12)6.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素浓度为1mg/L，螺旋霉素、替米考星浓度为30mg/L的混合标准储备溶液，临用前现配。3.2.14OasisHLB固相苯取柱或相当者：200mg，3mL。使用前依次用5mL甲醇，5mL水活化。3.2.15微孔滤膜：0.22um，有机相。3.3
仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）电子天平：感量为0.0001g和0.01g。离心机：转速不低6000r/min。
超声波清洗机
固相萃取装
氮气吹干仪
涡旋混合器。
具塞塑料离心管：15
试样制备
膏霜乳液类化妆品水包油）
称取试祥约02g（精确至0.0091g）工15m具寒塑料离心管中准确加入）10ml甲醇（3.2.1)，
涡旋分散均匀后，超声提取15mm以6000mm离10mim移取5.0mL上清液，加15mL磷酸盐缓冲溶液（3.2.10）混匀后，待净化。3.4.1.2
膏霜乳液类化妆品（油包水）
称取试样约0.2g（精确至0.0001g）于15mL具塞塑料离心管中，加人2mL正已烷（3.2.4）分散均匀后，准确加入10mL磷酸扑缓冲浴液（3.2.10).超声规取15min，以6000r/min离心10min，弃去上层正己烷后，移取5.0mL下层清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液（3.2.10）混勾后，待净化。3.4.1.3水剂类化妆品
称取试样约0.2g（精确至0.0001g）于15mL具塞塑料离心管中，用磷酸盐缓冲溶液（3.2.10）定容至10mL，混勾，以6000r/min离心5min，移取5.0mL上清液，待净化。3.4.2净化
将试样提取液转移至固相萃取小柱（3.2.14）中，依次用5mL水，5mL中醇水溶液（3.2.8）淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇（3.2.1）洗脱，收集洗脱液。在40C水浴中用氮气吹至近干，加入1.0mL乙睛水溶液（3.2.9），在涡旋混合器上混合1min后，过微孔滤膜（3.2.15）后滤液待测。2
-TiKAoNiKAca
3.5液相色谱-串联质谱测定
3.5.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Cla柱，100mm×2.1mm（i.d.），5um，或相当者；a)：
流动相：A：乙，B:0.2%甲酸溶液，梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1；b)
柱温：30℃；
进样量：10uL。
表1梯度洗脱程序表
时间/min
串联质谱参考条件
串联质谱参考条件如下：
电离方式：电喷雾电离，正离子模式；喷雾电压：3.0kV；
雾化温度：300℃；
毛细管温度：350℃；
鞘气压力：50Arb(1Arb=1psi)；辅助气压力：20Arb(1Arb=0.3L/min)；碰撞气、鞘气和辅助气：氩气（99.999%）；B
GB/T35951—2018
流速/(mL/min）
扫措模式：多反应监测（MRM）模式，8种大环内酯类抗生素的质谱参数见表2。表2质谱参数
药物名称
螺旋霖素
Spiramycin
阿奇霉素
Azithromycin
替米考星
Tilicosin
母离子
Parent ion
子离子
Daughter ion
碰撞能
Collision energy
透镜电压
TubeLens
-TKAONiIKAca
GB/T35951—2018
药物名称
竹桃霉素
Oleandomycin
红霉素
Erythromycin
泰乐菌素
Tylosin
克拉霉
Clarity
ramyci
罗红霉素
Roxithtomyci
*定量离子（Quantitative
母离子
Parention
3.5.3混合标准工作溶液的制备
表2（续）
子离子
Daughter ion
碰撞能
Collision energy
透镜电压
Tube Lens
用乙晴水溶液（3.2.9将混食标准储备洛液（3.2.13）级稀释得到阿奇等素、竹桃霉素红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素浓度为/L、10#/L、25/L、50100pg/L及螺旋带素、替米考星浓度为150mg/L.300μg/50g
到高进行检测，以定量离子峰面积对质量表度作图3.5.4测定步骤
1的系列混合标准工作落液，浓度由低做出标准曲线同的好方程
样品待测液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范国内，超过线性范围则应稀释后再进样测定。3.5.5定性判定
在相同条件测定样品落液和标准潜液，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的某种组分峰的保留时间一致（变化范围在士2.5%），并且所选择的两对子离了的质荷比一致，样品溶液中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作落液中定性离子的相对丰度进行比较时，相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在该组分。8种人环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图参见附录C中的图C.1。表3定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
3.6空白试验
>20%~50%
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行4
>10%~20%
≤10%
rKAoNrKAca
结果计算
结果按式（1)计算，计算结果保留至小数点后两位。X,_C.XVxK
式中：
样品中待测组分含量，单位为微克每千克（ug/kg)；GB/T35951—2018
由标准曲线得出的测试液中某种组分的浓度，单位为徽克每升（ug/L)；定容体积，单位为毫升（mL）
稀释倍数；
样品质量，单位为克（g）
回收率与精密度
阿奇霉素
及螺旋霉素、
竹桃霍素、红雷素、泰乐茵素
ug/L范围内
克拉霉素罗红霍素在添加浓度5ugL～25米考星在添加浓度为150吨1101范国内间收率在85%～710%之间，相对标10%。
准偏差小于
6允许差
在重复性条件下获得的两次独，测定结果的绝对差值不得超过算未平均值的10%rrKAoNiKAca
GB/T35951—2018
附录A
（资料性附录）
8种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限8种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限参见表A.1。表A.1
化合物
螺旋霉素
阿奇薇素
替米考星
竹桃霉素
红霉素
泰乐菌素
克拉霉素
罗红霉素
8种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限检出限/（μg/g）
注：检出限与定量限以取样量0.2g，定容体积1mL，进样量10μL计6
定量限/（μg/g）
-TrKAoNrKAca
附录B
（资料性附录）
GB/T35951—2018
8种大环内酯类抗生素的药物名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式8种大环内酯类抗生素的药物名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式参见表B.1。
表B.18种大环内酯类抗生素的药物名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式序号
药物名称
螺旋霉素
阿奇震素
替米考星
竹桃霉素
英文名称
Azithromycn
Tilicosin
Oleandomycin
CAS登录号
108050-5
7060-74-4
Cs5HNOP
相对分字
结构式
GB/T35951—2018
药物名称
红霉素
泰乐菌素
克拉霉素
罗红霉素
英文名称
Erythromycin
Tylosin
CAS录号
114-07-8
1401-69-0
Clarithramycin
81103-11-9
Roxithromycin80214-83-1
表B.1（续）
分子式
CaHo,NOr
CaHsNOis
CnHzaNgO
相对分子
结构式
附录CWww.bzxZ.net
（资料性附录）
标准物质选择离子质量色谱图
8种大环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图参见图C.1。100
说明：
螺旋霉素;
阿奇莓素：
替米考星：
竹桃霉素：
红霉素：
泰乐菌素：
克拉霉素；
罗红霉素。
图C.18种大环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图GB/T35951—2018
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