本文件描述了采用液相色谱-质谱法（LC-ESI-MS）测定纺织品中绵羊毛、山羊绒、牦牛绒及其混合物含量的定性和定量分析方法。 本文件适用于含有动物毛纤维及其混合物的各类纺织产品。 本文件不适用于同一物种动物纤维混合物（如山羊绒和马海毛的混合物）的鉴别。

ICS59.080.01
CCSW 04
中华人民共和国国家标准
GB/T 42699.1—2023
纺织品
某些动物毛纤维蛋白质
组定性和定量分析
第1部分：还原蛋白质多肽　
分析液相色谱-质谱（LC-ESI-MS）法Textiles-Qualitative and quantitative proteomic analysis of someanimal hair fibresPart 1: Peptide detection using LC-ESI-MSwith protein reduction
（IS020418-1:2018,M0D）
2023-05-23发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2023-12-01实施
GB/T42699.1—2023
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件是GB/T42699《纺织品某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析》的第1部分。GB/T42699已经发布了以下部分：第1部分：还原蛋白质多肽分析液相色谱-质谱（LC-ESI-MS)法。本文件修改采用ISO20418-1：2018《纺织品某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析第1部分：还原蛋白质多肽分析液相色谱-质谱（LC-ESI-MS)法》。本文件与ISO20418-1：2018相比做了下述结构调整：删除了ISO20418-1:2018的第4章“缩略语”；一增加了“原理”作为本文件的第4章；一增加了第8章“精密度”；
一将ISO20418-1：2018的7.8“试验报告”调整为本文件的第9章；删除了ISO20418-1中的资料性附录C；一增加了资料性附录A。
本文件与ISO20418-1：2018的技术差异及其原因如下：精简了范围，将其中原理的内容调整至第4章“原理”中，使章条结构及内容更加清晰和规范（见第1章，ISO20418-1：2018的第1章）；一用规范性引用的GB/T2910（所有部分）替换了ISO1833（所有部分），以适应我国的技术条件（见7.7,ISO20418-1:2018的7.7）；用规范性引用的GB/T40905（所有部分）替换了ISO17751（所有部分），以适应我国的技术条件（见7.7，ISO20418-1：2018的7.7）；用规范性引用的GB/T40905.1替换了ISO137，以适应我国的技术条件（见6.3，ISO204181:2018的6.3)；
一—增加了规范性引用GB/T6682、GSB16-2262-2008和GB/T6529，以适应我国的技术条件（见5.8、7.2和7.3.1)；
一完善了缩氨酸的定义，以适应我国的技术条件（见3.5）；—增加了石油醚、萃取缓冲液、洗脱液A，以适应我国的技术条件（见第5章）；第6章标题更改为“仪器和材料”，增加了双刀片、超声波发生器、烘箱、天平、离心试管、EP管、过滤网及其参数，以适应我国的技术条件（见第6章）；一增加了“精密度”及相关说明，为实验操作提供更多的可参考信息（见第8章）；一增加了“试验日期”以及“试验操作过程中的异常情况等任何偏离本文件的细节”的要求（见第9章)。
本文件做了下列编辑性改动：
第7章各公式中不同类别纤维的含量下标纤维名称用其英文首字母代替；—7.3～7.6中，各段增加了分条的编号；—7.4.2中，将“两天”描述为“48h”，使表述更加规范；一增加了附录AGB/T2910与ISO1833各部分之间的一致性程度”；一修改和完善了附录B的参数，并补充了引导语，使其更具参考性；I
GB/T42699.1—2023
修改了参考文献。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国纺织工业联合会提出。本文件由全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209)归口。本文件起草单位：内蒙古鄂尔多斯资源股份有限公司、中纺标检验认证股份有限公司、安徽翰联色纺股份有限公司、广东炬盛新材料科技有限公司、浙江依蕾毛纺织有限公司、绍兴迈宝科技有限公司、泉州博庚生物科技有限公司、赛默飞世尔科技（中国)有限公司、惠州学院、东莞市大群纺织有限公司。本文件主要起草人：朱虹、孟令红、石亭、斯颖、张晓夕、程汉兴、高丽忠、庞瑞冬、张恒、肖顶、邹洁、沈国良、李君军、陈学军、张友国、侯帅。引言
GB/T42699.1—2023
对于纺织品中某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析试验方法，为方便使用，按照不同的试验原理和方法分为多个部分，GB/T42699《纺织品某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析》拟由以下两个部分组成：
第1部分：还原蛋白质多肽分析液相色谱-质谱（LC-ESI-MS)法；第2部分：还原蛋白质多肽分析基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS)法m
1范围
纺织品某些动物毛纤维蛋白质
组定性和定量分析
第1部分：还原蛋白质多肽
分析液相色谱-质谱（LC-ESI-MS）法GB/T42699.1—2023
本文件描述了采用液相色谱-质谱法（LC-ESI-MS）测定纺织品中绵羊毛、山羊绒、耗牛绒及其混合物含量的定性和定量分析方法。本文件适用于含有动物毛纤维及其混合物的各类纺织产品。本文件不适用于同一物种动物纤维混合物（如山羊绒和马海毛的混合物）的鉴别。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T2910（所有部分）纺织品定量化学分析[ISO1833（所有部分）注：GB/T2910与ISO1833各部分之间的一致性程度见附录A。GB/T6529纺织品调湿和试验用标准大气（GB/T6529—2008，ISO139：2005，MOD）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696：1987，MOD）GB/T40905（所有部分）纺织品山羊绒、绵羊毛、其他特种动物纤维及其混合物定量分析［ISO17751（所有部分）］
注：GB/T40905.1一2021纺织品山羊绒、绵羊毛、其他特种动物纤维及其混合物定量分析第1部分：光学显微镜法（ISO17751-1:2016，MOD）；GB/T40905.2一2022纺织品山羊绒、绵羊毛、其他特种动物纤维及其混合物定量分析第2部分：扫描电镜法（ISO17751-2：2016，MOD)GSB16-2262-2008山羊绒外观形态图谱3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
动物毛纤维animalhairfibre
自动物毛囊生长具有多细胞结构、由角蛋白组成的纤维。示例：山羊绒、绵羊毛、耗牛绒等。3.2
液相色谱-质谱法
liquid chromatography-mass spectrometry;LC-ESI-MS将液相色谱的物理分离和质谱的质量分析相结合进行分析的化学分析技术，1
GB/T42699.1—2023
羊fibretestspecimen
纤维试样
从实验室样品中随机抽取用于检测的纤维切片。3.4
胰蛋白酶消解
trypsindigestion
通过胰蛋白酶切断蛋白质链段，形成一定数量的更短的肽链的过程，是质谱识别过程中试样制备的步骤之一。
缩氨酸
peptide
蛋白质经酶消解后取得的，由2～50个氨基酸缩合而成的一种蛋白质多肽化合物3.6
缩氨酸标志物
marker peptide
蛋白质中用于对其进行识别、复原及纯化的特征离子。3.7
蛋白质组分析
proteomic analysis
应用不同的分离及分析技术（如质谱法），对一个生物系统的全部蛋白质进行系统识别及定量分析，4原理
该方法在利用光学显微镜对各类动物纤维的外观形态进行预定性鉴别的前提下，采用硫脲/脲/二硫苏糖醇溶液进行蛋白质还原、胰蛋白酶消解，用配备电喷雾离子源的液相色谱-质谱仪对特定的缩氨酸标志物进行蛋白质组分析，计算出各种纤维的质量百分比5试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，5.1
硫脲（CN2H.S）：纯度为99%。
脲（HzNCONH2）：纯度为99.5%。5.3
二硫苏糖醇（DTT）：纯度>98%
三羟甲基氨基甲烷（Tris）：纯度>99.9%。碳酸氢铵（NH4HCO：）：液相色谱-质谱仪用洗提液添加剂。5.6
碘乙酰胺（IAM）：纯度>99%。
Ⅱ型胰蛋白酶：猪胰提取，浓度为每毫克1000单位～2000单位干固体或等水平。5.8水：符合GB/T6682中规定的一级水。盐酸（HCI）：浓度为37%，纯度>97%。5.9
乙（CH;CN）：色谱级，
5.11甲酸（HCOOH）：试剂级，纯度>95%。石油醚：沸程30℃～60℃。
3萃取缓冲液：为25mmol/L三羟甲基氨基甲烷、2.4mol/L硫脲、5mol/L脲、5%DTT的混合溶5.13
液（pH=8.5）。配制方法为分别称取0.7571g三羟甲基氨基甲烷、45.67g硫脲、75.07脲溶于200mL5%DTT中，待全部溶解后，定容至250mL。5.14洗脱液A：水十0.2%乙睛十0.1%甲酸，2
6仪器和材料
6.1光学显微镜（LM）：符合GB/T40905.1的要求。GB/T42699.1-2023
6.2索氏萃取器：配备冷凝器、萃取器、圆形长颈瓶及用于提留样品的套管（通常由厚过滤纸制成）。6.3切片器或双刀片：符合GB/T40905.1的要求。6.4恒温浴锅：温度可控，摇速范围20r/min~200r/min。6.5
离心器：速度范围200r/min~20000r/min。6.6涡流混合器：速度范围100r/min~3200r/min。6.7
氮气流烘干仪：最高气压14.0kPa(2psi），配备探针。6.8
液相色谱-质谱仪（LC-ESI-MS）：配备电喷雾离子源。6.9
超声波发生器：工作频率（40土5)kHz。6.10
烘箱：温度范围0℃～100℃。
天平：精度0.0001g。
离心试管：50mL。
微量离心管：EP管，1.5mL。
过滤网：孔径5μm。
7试验方法
7.1取样
取样的总体要求是试样应具备所在抽样批次的典型代表性。不同类型纤维试样的取样方法、取样规则按GB/T2910.1中的相关规定执行。7.2定性预鉴别
根据GB/T40905.1的规定，结合GSB16-2262-2008，按照不同特种动物纤维的外观形态特点，使用光学显微镜（6.1)进行初步的定性预鉴别，确认样品的组分。7.3样品制备
7.3.1将样品开松洗净后，在索氏萃取器（6.2）中用石油醚（5.12)清洗或浸泡2h；在室温下用流水冲洗1h；然后用50℃的一级水冲洗1h，在烘箱（6.10）内用50℃烘干后，在GB/T6529规定的标准大气下调湿24h。
7.3.2按GB/T40905.1的要求，用切片器或双刀片（6.3）切取质量大于150mg的纤维切片，应确保样品的典型代表性。也可采用其他能确保样品均匀性的切取设备，如剪刀或研磨器切取纤维切片。7.4蛋白提取
7.4.1用天平（6.11）准确称取150mg纤维切片置于试管（6.12）中，并加人1份9.5mL的萃取缓冲液（5.13)。
7.4.2置于50℃恒温浴锅（6.4)内使纤维与缓冲液充分接触，缓慢振动持续48h。7.4.3在室温下将（7.4.2）溶液用过滤网（6.14）过滤后，将缓冲液至于离心试管（6.12）中，用离心器（6.5）在12000g（加速离心力）条件下离心分离20min。7.4.4移取离心分离后的上层悬浮液（7.4.3），保存在4℃条件下待用。3
GB/T42699.1—2023
7.5胰蛋白酶消解
7.5.1将制得的悬浮液（7.4.4)置于超声波发生器（6.9）中降解，至硫脲晶体彻底溶解。7.5.2超声处理后，取67μL降解后的悬浮液（7.5.1)放人EP管（6.13）中，并加人等量的100mmo1/L碳酸氢铵（5.5)溶液，用涡流混合器（6.6)充分混合，然后加人5μuL的200mmol/L二硫苏糖醇（5.3）和100mmol/L碳酸氢铵（5.5）的混合溶液，再用涡流混合器混合处理。7.5.3将溶液（7.5.2）放在室温下保温1h后，加入4uL的含有1mol/L碘乙酰胺（5.6）的100mmol/L碳酸氢铵（5.5)溶液，放人涡流混合器（6.6)处理。7.5.4处理后在室温下保温1h，在（7.5.3）溶液中加人20uL的200mmol/L二硫苏糖醇（5.3），去除多余的碘乙酰胺，再用涡流混合器（6.6）处理，处理后的溶液放在室温下保温1h。7.5.5在溶液（7.5.4）中加人818μL去离子水（5.8）和20μL胰蛋白酶（5.7）溶液（含100ng/μL的1%乙酸溶液，必要时），再进行涡流处理。7.5.6将处理后的溶液（7.5.5)在37℃下静置4h后，加入20uL的37%盐酸（5.9)结束酶解操作，最后在离心器（6.5）中高速浓缩，并采用氮气流烘干仪（6.7)浓缩至干燥7.6胰蛋白酶缩胺酸分析
7.6.1采用液相色谱-质谱仪（6.8)进行蛋白质组分析。将制得的干燥样品（7.5.6）加入100uL洗脱液A（5.14），涡流处理后移人进样小瓶，分析缩氨酸标志物。7.6.2分析参数示例见附录B。
7.7测试结果的计算和表示免费标准下载网bzxz
定量分析采用选择离子监测确定混合试样中所有组分的标志物，并识别其特征离子。按照相应的色谱离子峰面积统一起来计算每种组分的百分比。每种纤维的相对分子质量、保留时间和特征离子的信息如附录C所示。按式（1）～式（5)计算每种纤维的含量：W
A,+Aw-
Ww=Aw+Aa
Aw2+Ac2
W.=100-Ww-W,
式中：
耗牛绒的含量，%；
绵羊毛的含量，%；
Wwl、Ww2——绵羊毛1、绵羊毛2的含量，%；W。
山羊绒的含量，%；
耗牛绒特征标志物总峰面积；
Awl、Aw2
绵羊毛1、绵羊毛2特征离子峰面积：Al、Ac2
山羊绒1、山羊绒2特征离子峰面积；绵羊毛和山羊绒特征离子峰面积。（1）
（3）
·（4）
（5）
GB/T42699.1—2023
由于各实验室所使用的仪器不同，对耗牛绒纤维的定量可能会出现超比例的情况。如果出现这种情况，需要确定一个修正系数。注：修正系数由各自实验室根据内部标准物质自行确定，用于品质控制，除绵羊毛、山羊绒及耗牛绒外，如果样品中还包含其他纤维，应将按本文件测定的检测结果与使用GB/T2910（所有部分）和/或GB/T40905（所有部分）测得的结果合并计算，得出整个织物试样纤维成分及含量的测试结果。
精密度
同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，二组分样品两次测试结果的相对标准偏差不大于10%，三组分样品两次测试结果的相对标准偏差不大于20%。9
试验报告
试验报告应至少包括以下内容：a）
本文件编号；
样品状态描述（如纤维、纱线、织物样片、成衣产品等）；样品识别信息（如批号、品号等）；所用仪器及相关信息；
试验结果；
试验日期；
试验操作过程中的异常情况等任何偏离本文件的细节。5
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。