本标准规定了苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运。本标准适用于由防治鳞翅目害虫的苏云金芽胞杆菌原粉和助剂等制成的苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂。 GB/T 19567.3-2004 苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂 GB/T19567.3-2004 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 65. 100. 10
中华人民北和国国家标准
GB/T 19567.3---2004
苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂
Bacillus thuringgiensis wettable power2004-06-22发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2004-12-01实施
GB/T19567.3—2004
苏云金芽胞托菌（Bacillusthuringiemsis，B.）是月前应用最广泛的-种微生物杀虫剂，它的主要杀虫成分是伴胞品体中的毒素蛋白，其中，本标准所检测的对鳞翅目害虫有毒力的毒素蛋白的相对分子量为130kDa。生物测定中甜菜夜蛾用于检测对麟翅目贪夜蛾属害虫有特性的苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂的毒力，小菜蛾和棉铃虫用于检测对其他鳞樊月害虫有活性的苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂的力。本标准是根据我国以往制定的苏云金芽胞杆菌行业和企业标准等有关材料，结合我国的实际情况制的
本标准对苏公金身咆杆菌可湿性粉剂的要求、试验方法、拍样以及包装、运输等作了具体要求和规定，从而为苏金芽胞托菌生产提供了统…的技术依据。本标准的附录A资料性附录，附录B是规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提山本标准起草单位农业部农药检定所、华中农业大学微生物农药国家工程研究中心、湖北省生物农药工程研究中心。
本标准主要起草人：姜辉、喻子牛、陈守文、工开梅、王晓军、吴新平、顾宝根。本标准由农业部农药检定所负解释。范围
苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂
GB/T 19567.3-—2004
本标准现定广苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂的要求、试验方法以及标志，标签，包装、贮运。本标准适用于由防治鳞翅目害虫的苏云金芽胞杆菌原粉和助剂等制成的苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括期误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡不注H期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1250极限数值的表示方法和判定方法GB/T1600---2001液药水分测定方法GB/T1601农药pH值的测定方法
GB/T1604商品农药验收规则
GB/T1605：2001商品农药采样方法GB3796农药包装通测
GB/T54512001农药可湿性粉剂湿润性测定方法GB/T16150--1995农药粉剂，可湿粉剂细度测定方法3要求
3.1外观；灰白色或棕褐色疏松粉末，不可有团块。3.2苏云金芽跑杆荫可避性粉剂应符合表1要求表1苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂控制项目指标项
毒谢蛋白（13Gke)/(%）
毒力效价(P.1. ,H.α. ,S. e. )/(IU/mg)pH值
水分/（%）
悬浮率(有效成分)/（)
混海时问/min
细度（75μm）/（%）
6. C-~7. 5
注：P，2.H.a.和S.e分别为小菜（Pluteltex.ytastelta），棉铃虫（Heliathtsarmigera）和甜菜夜绶（Spodupteraeriga)缩写。
CB/T 19567.3--2004
4试验方法
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水浴溶液。4.1抽样
2001中“固体制剂采样”过行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样剧不按照B/T16052
少手100g：
4.2毒素蛋白含量
用十二烷基硫酸钠-案两烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶图像处理法进行测定。4.2.1方法握要
用碱性溶液处理苏云金芽胞杆菌可迹性粉剂伴跑晶体，使其降解为毒素蛋白，然后通过SI)SPAGE,依蛋白质树对分子质草的差异，使毒素蛋白与其他杂蛋由分离，之后用电沫图像扫描蛋由区带面积，进行定量。
4. 2.2仪器、设备
a）电泳仪；
b）垂直式电泳樽（1.5mm凹形带槽橡胶模框）,疑胶板面积170mm×170mm1.5mm、20孔样品槽模其）；
c）电泳凝胶成像系统：
d）离心机:10 000t/min
e）分析天半：精确至0.0001。
4.2.3试剂和溶液
4. 2. 3. 1过硫酸铵(APS).
4.2.3.2十二烧基硫酸钠(SDS)，4.2.3.3四甲基乙二胺（TFMEID)。4.2. 3.4氧化钠。
4. 2. 3. 530%丙烯酰胺凝胶母液:称取两烯酰胺 30 多+亚甲基双丙烯酰胺(原称:甲叉双内烯胺)0. 8 g,落于100 ml.燕馏水,过滤、于 4暗处贮存备用。4.2.3.6分离缓液：称最三整基甲基基肝烷（1r1s）18.17品和DS0.4冬辫蒸馏水中，用浓盐酸调室pH8,\,用蒸馏水定容率100 niL：4.2.3.7浓缩胶缓拍薇：称取1ris6.06和SS0.4落手蒸馏水中.用涨盐酸调至P16.8，用馈水定容垒100mL。
4.2. 3. 8 电极缓冲薇:称取 Tris 3. 036 甘氨酸 14. 42 区,SDS 1 名,用水溶解并定容著 1 000 1L。4.2. 3. 9 3×样品蒂释液:1 mol/L 、pH6. 8 Tris-HCl 18. 75 ml.,SDS 6 g,甘油 30 mI.,巯基Z醇15mL，少许漠酚蓝，用蒸摊水定容至100mL4.2.3. 10周定液：量取95%乙醇 500 ml,冰乙160 mL,用蒸罐水定容笔1000ml。4.2.3. 11染色被 称取考马斯亮蓝(CBB)R-250 1 g-加人 95%乙醇 250 mL,冰乙酸 80 mL,蒸馏水定筹罕1000mL，溶解过稳府使用：4.2.3.12脱色液：岸取95%乙醇250ml冰乙酸80ml.用蒸馏水定容率1000ml.。4.2.3.13毒素蛋向标样：毒素强白(相对分子蛋为130kDa)含量为8.0%的原粉。4.2.4样品外理
称取标样、试样存20.0 mgt准确到 0,1 mg），移至 1.5 ml. 离心管中,加 1. ml.水充分浮。取100 ±L加入,另-1.5mL离心管,加入0.5 mol/L氢氧化钢溶被25μL（使氢氧化钠溶液的终浓度为0.1 mol/L效置约 5 min·再加人 3×样品稀释液 75 μl.使最终体积为 200 μL于100℃沸水中煮沸6min，离心（2门r/mia）0min后取上层清微，以备电脉上样，4. 2. 5SDS-PAGE分离毒素蛋白
4. 2. 5. 1制备 7. 5%丙烯酰胺凝胶采用不连续缓冲系统，制胶方法见附录A(资料性附录)。4.2.5.2上样
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取上述标样溶解液.1层清液，于聚内烯酰胺凝胶的上样孔中分别上样6、8、10、12、14μL（毒素蛋白含量约为3g～7μg），作为标准曲线；再取定体积的试样踏液_1层清液（毒索蛋点含量约为5g），加人到上样孔中，注人电极缓冲被后接通电源。4.2.5.3电泳
电泳初期电压控制在190V左有，待试样进人分离胶后，加大电压到170V.继续电泳，当指示剂前沿到达距底端1cm左右时停止电泳，取出胶板，在7.5%（体积分数）乙酸中浸泡30min。4.2.5.4染色
将分离胶部分取下，用考马斯亮蔬（CFB)R-250染色液染色过夜。4.2.5. 5脱色
倒去染色液，先用漂洗液洗涤凝胶，然后加人脱色液，37保溢脱色，更换几秋脱色液，至背景消晰为
4.2.6测定
胶板经脱色后，可清晰地看到分子量为130kLa蛋自这带,用凝胶成像系统对凝胶进行分析。样品牛举案蛋白的百分含量(x)按式(1)进行计算。X
X #X 100路
M—一由标准蛋白回归曲线计算得到的蛋白量；c—·样品的浓度，
V-样品的加样伍，
n—样品的稀释倍数。
4.2.7允许差
取其算术平均值为测定结果。两次平行测定结果相对偏差小于等于5%。4.3群力效价的测定
按附录B(规范性附录)进行。
4. 4PH 值的测定
按（GB/T1601测定。
4. 5细度的测定
按G3/T16150—1995中2.2进行测定。4.6水分的测定
按GB/T160G2001中“共沸蒸馏法\进行测定，4.7激浮率测定
4.7.1仪器试剂
a）量筒：250 mL，具寨：
b）吸液皙：
）秒表；
d）三角瓶:500 mL.100 ml.;
e）恒温水浴锅：
）标准硬水：配制方法按GB/T5151中标准硬水配制方法进行，-1)
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4.7.2操作步骤
称取可湿性粉剂样品20℃.0切（精确到0.2，手盛有玻珠的三角瓶中，加人标雍硬水100mL，用手左右振60欢，制得的愿浮瓶全部转移到250mL真塞量简中，用标准硬水稀释到250mL。
将量简放入 30℃二1℃:恒温水浴锅中，当悬浮液溢度达到 30℃时,将量简盖好,拿起量简先轻轻摇起沉淀物，然后有规律地以摄简中部为中心上下颠305，使呈均句勾的悬浮液，量简仍放人恒温水浴中，打开盖子，静臂30加i，用吸液誉以抽气法将量简上部9/10的意浮滋抽出（在15$303内完成）。抽被过程中，吸液管应依附简壁随羧面下降而下降，勿搅动下部沉淀。按渐录B规范性附录)的方法，对可湿性粉剂及量简内剩下的25mL悬浮液进行毒力效价的测定。4. 7. 3计算
可湿性粉剂的暴浮率（Y)按式(2)进行计算：Y11.1×C.Q×100%
式中;
C供试可湿性粉剂的毒力效价；
Q—留在量简底部的 25 mL 悬浮液的毒力效价。4.7.4允许差
两次重复测定结果之差应不超过10%，4. 8混润时间的测定
按GB/T1600—2001中“共沸蒸馏法\进行测定。5检验规则
符合GB/F1601有关规定。极限慎按GB/T1250处理。6标志、标签、包装、贮运
6.1产品包装应符合GB3796规定，同时注明所用标准编号及检测所用试虫。6.2可凝性粉剂主要采用塑料袋包装.密封。6.3贮存时严防日晒，勿受压，置于阴凉下燥处。6.4运辅时，注意轻放，防止损坏。6.5保证期：在正常贮运条件下，可湿性粉剂质被保证期从生产月期算起为两年，产品出厂时筹力效价和毒素蛋白含量不低于3.2指标。两年内产品毒力效价种毒案蛋白的含不低于3.2指标的70%。A.1制板
附录4
（资料性附录）
电泳凝胶的制备
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本实验选用双垂直电泳槽，具体操作根据实验室条件而定，基本操作是根据电泳楷高大小，选择两块大小样的玻璃板，其中，块端部带有2cm～3cm高的凹槽。两块玻璃板洗净干燥后，在无凹槽的玻璃板两边各放条“间隙条“（塑料条、胶条都可以，其宽度、厚度根据需要而定），然后放上带凹槽的玻璃板，用夹子将两块玻璃板固定，这样两块玻璃板之间就形成了一定的间欧。形城的间隙下端应该封闭，以防满人的胶液漏出。一般用胶纸条封闭，待人的胶凝固后，再撕去胶纸；或用1%～1.5%浓度的脂封闭，方法是：在琼脂中加入电极缓冲液或蒸馏水，在沸水浴中加热溶解.将带有间隙的玻璃板装置垂直放在一个高3cm.觉3cm、比璃板宽而长的一个小槽内（商品电泳槽有配套装置），趋热将落解的琼脂胶灌人小槽内，待冷却后取出，玻璃板装置下端即封严，可进行灌注聚丙烯酰胺胶液。A.2制备分离胶
从冰箱中取出制胶试剂，平衡举室温。按表A，1配方配制分离胶。本试验中分离胶浓度为7.5%。按表A.1配方将胶液配好，混匀后，迅速注入两块玻离的间隙中，至胶液面离玻璃板凹槽3cm左有。然唇在胶面上轻轻键1rm高的蒸馏水，加蒸馏水时通常沿玻璃板慢慢加人，勿扰乱胶面。垂直放胶板于室温，1h左有使之凝聚。此时在胶和蒸缩水之间可以看到很清晰的…-条界面。然后倒掉胶面上的藜馏水，
A. 3制备浓缩胶
用谢根据实际情况丽定，制备方法按表A.1配方配制。按表A.1配方将胶被混合，取少景灌人玻璃板间隙中，冲洗分离凝胶面，而后倒出，将余下的胶液注人玻璃板间照间.使胶液液面与玻璃板凹槽处平齐，雨后捕人“梳子”【样品槽模板），在室温效置20min~-30min。浓缩胶即可凝聚。凝固后.慢慢取出“梳子”，取时应防止把胶孔弃破，取出“梳子\后在形成的胶孔中加人蒸馏水，冲洗未凝聚的柄烯酰胺等，倒出孔中蒸馏水，再加入电极缓冲液。将灌好胶的玻璃板垂直国定在电泳忆上，带凹槽的玻璃板与电泳槽紧贴在一起，形成：个液樽，向其中抓入电极缓冲液，便其与胶孔中的缓冲液相接触。在电泳模下端的贮液槽中也加人电极缓冲液。表A.1SDS-PAGE凝胶的配方
30%内烯酰胺母液
分离胶缓冲液
浓缩胶缓冲液
双燕水
10%过硫酸胺（APS)
四甲基Z.二陆(TEMED)
分离胶
O. li tnt.
tv, 1 mL
浓缩胶
t.. s ml.
0. 02 tr.
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附录B
（规范性附录）
毒力效价的测定
B. 1 毒力效价的测定方法一
一用小菜蛾（Putellaxylestella）作试虫的测楚方法B.1. 1试剂或材料
标准品：CS·1995，Hb200001U/mg。小菜峨幼虫Plureilaxytostella。食用菜籽油。
酵母粉：工业用。
维生素 C:医用,分析纯。
琼脂:凝胶强度大于 300 g/cm。磷酸氢二钾;分析纯。免费标准bzxz.net
磷酸二氢钾:分析纯。
聚山梨酯-80：粘度3.5×101m/s5.5X10-*m2/s。菜叶粉：甘蓝型油菜叶，80℃烘干，蘑碎，过80目筛。燕糖，分析纯。
纤维素粉 CF-11。
氢氧化钾：分析纯。
氯化钠：分析纯。
15%尼泊金：对羟基苯甲酸甲酯(化学纯)溶于%酒精、10%甲醛溶液：甲醛(分析纯)溶于蒸馏水。干酪素溶液：干酪素（BR生物试剂)2g，加0.001mol/L氢氧化钾2mL8mL蒸水，灭菌。磷酸缓冲液：氯化钠8.5g，磷酸氢二钾6.0g，磷酸二氢钾30g，聚山梨酯-80溶液0.1mL，蒸馏水1 000 mL.
B、1.2仪器、设备
磨口三角瓶:250 ml 具塞。
分析天平：确到0.1tg。
电动搅拌器：无级调速，100r/min~t000r/nin。医用手术刀。
振器，
微波炉或电炉。
水浴锅。
养虫管：9cm×2.5cm。
小烧杯：50ml
大烧杯：500ml。
试管：18mmX180mm
玻璃珠：直径5mm。
移液管:10 mL,5 mL,2 mL,1 mL。B, 1. 3 测定步骤
B. 1. 3. 1 感染液的配制
.1.3,1.1标准品
GB/T 19567.3--2004
用分析天平准确称取标准品100.mg~150.0wg（精确到0.1g）.放人250m装有10粒玻璃珠的磨口二角瓶中。加入 100 mI, 磷酸缓冲液,浸泡 10 min,在振药器 :荡 3 min:得到浓度为1tmg/mL的标准品母液（该母液在4℃冰箱+可存放10无），然后将标准品母液稀释成浓度为1.000、0.500,0.250.0.125.0.0625.0.0313rig/ml.六个稀释撼染液。B.1.3.1.2可湿性粉剂样品
称取相当于标准品毒力效价的样品适鼠（精确到0.2mg），加100mL磷酸缓冲液，然后参照标准品的配制方法配制样品感染液。
对有紫效价过高或过低的样品，在测定前需先以3个距离相差较大的度做预备试验，估计致死中液度(LCse值)的范围，据此设计稀释浓度。B、1, 3.2感染饲料的配制
何料配方；维生素C0.5g，干酪溶液10ml.,菜叶粉3.0g酵母粉1.5g,纤维素粉1.0g,琼脂粉2.0g，蔗糖6.0g，籽油0.2ml,10%甲醛溶液0.5mL.15%尼拍金1.0mL.蒸馏水100ml将蔗糖,酵母粉、干酪素溶液、琼脂粉加人90 IIL的蒸馏水中调匀。搅拌煮沸，使琼脂完全溶化，加入尼泊金搅勾。将其他成分用剩余的10mL蒸馏水调成糊状，当琼脂冷却垒75℃左右时与之充分混合，搅勺，置55℃水浴锅中保温备用。取50ml.烧杯7只，写好标签，置55℃水浴中预热，分别向每个烧杯中加人1mL对应浓度的感染液，以瑷冲液作空白对照。问每个烧杯中加人ml,溶化的感染饲料，用电动搅拌器搅拌20s.使每个烧杯中的感染波与料充分混勾。将烧杯静罩，待冷却凝固后，用医用手术刀将懿染饲料切成1cm×1cm的饲料块。每个浓度取4个简料块分别放人4支养虫管中，每管放人--块，写好标签。B.1.3.3接虫感染
随机取已放置饲料的养虫管。每管投人10头小菜蛾三龄初幼虫，每浓度4管，塞上棉塞，写好标签，在相同间养条件下间养。
B. 1. 4 结果检查及计算
感染48h后检查试虫的死亡情况，判断死虫的标难是以细签轻轻触动虫体，无任何反应者判为死亡。
计算标准品和样品各浓度的供试昆虫死亡率，查Abbott表或计算校正死率（x）。空白对照死亡率10%以下需要校正，火于10%则试验结果无效。校正死亡率按式(B.1)计算：
X, =9×100%
式中：
T——药剂处埋死亡率；
C一空白对照死亡率
将感染皴各浓度换算戚对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法分别求出标准品LCso值和待测样品IL.Cu值，计算待测样品的毒力效价（X）。毒力效价按式（B.2)计算：
武中：
S一标准品LC值，
P标准品效价；
Y·样品LCx值。
( B, 2)
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B.1.5允许差
毒力测定法允许相对偏差，但每个样品3次重复测定结巢最大相对偏差不得超过20%。毒力测定制剂各浓度所引起的死亡率应在10%~90%之间，在50%死亡率上下至少各有两个浓度。B.2毒力效价测定方法—-以棉铃虫（Heliothisarmigera）作试虫的测定方法B.2.1试剂和材料
标准品；CS-1995，Hab，20000IU/mg棉铃虫幼虫：Heliathisarmigera。黄豆粉黄豆炒熟后磨碎过6目筛。大友粉：过60日筛。
酵母粉：工业用。
36%乙酸溶液，乙酸（化学纯），溶于蒸馏水，苯甲酸钠：分析纯。
甲醛：分析纯。
维生素C,医用，分析纯。
琼脂粉：凝胶强度大于300g/cm。磷酸缓冲液：同 B.1.1。
B.2.2器、设备
分析大平:精确到 0. 1 mg
电动搅拌器：无级调速，1001/min-~6000x/tmin。微波炉或电炉，
振荡器。
水浴锅。
组织培养盘：24孔。
塘瓷盘，30cm×20cm。
齊口三角瓶：250mL，具塞。
大烧杯：1000mL，
小烧杯，50mL。
试管：18mm×180mm，
玻璃珠：直径5mm
注射器，50mL，
标本缸。
恒温培养箱，
B,2. 3测定步骤
B.2.3.1饲料准备
饲料配方：酵母粉12名，黄否粉24%，维生素C1.5g，苯甲酸钠0.42g:36%乙酸3.9mL蒸馏水300ml..
将黄豆粉，酵母粉、维生素C、苯甲酸钠和36%乙酸敢入大烧杯内，100mL煮水湿润备附。将余下200ml.馏水加人琼脂粉内·在微波炉上加热室沸腾，使琼脂完企溶化，取出冷却至70℃，与其他成分混合，在电动搅拌器内高速搅拌1min，迅速移至60℃水浴锅巾盖保温，B.2.3.2感染液的配制
称100.011g150.0mg（精确到0.1mg）可湿性粉剂样品.至盛有玻璃珠的磨口具寒三角瓶中，加磷酸缓冲液100ml.，泡10min，在振满器上振荡1tmin即成母液。于分析天平上称取150.0mgGB/T 19567.3--2004
300.0mg标催品（精确到0.1机），如上法制成母液，将样品和标准品母液用磷酸缓冲液以--定的倍数等比稀释，每个样品和谁品至少各稀释5个浓度，并设缓冲液作对照，每一浓度感染液吸取3mL至 50 mL 小烧杯内待用。对照吸取 3 mL 磷酸缓冲波。B,2.3.3饲料和感染度的混合及分装用注射器吸取27tnL饲料，注人土述已有样品或标准品感染液的烧杯内，以电动揽拌器速搅拌0.5min，迅速倒入组织培养盘上各小孔中[倒入量不要求致，以铺满孔底为推。凝固待用。B. 2. 3, 4接虫越染
于26℃~30℃室温下，将未经取食的初孵幼出<孵化后12h内）抖入直径20cm的标本缸中，静待数分钟·选取肥上缸口的健康幼虫作供试虫，用毛笔轻轻地将它们移人已有感染饲料的组织盘的小孔内,每孔-头虫。每个浓度和空白对照皆放48头虫,用塑料薄片益住-然后将组织培养盘医个叠起，用橡皮筋捆紧，竖立放于30℃恒温培养箱内培养72h。B,2.4结果检查和统计分析
用肉眼或放大镜检查死、活虫数。以细签触动虫体，完全无反应的为死求，计算死亡率。如对照有死亡，可查Abbott校正值表或按式（B.1）计算校正死亡率。对照死亡率在6%以下不用校正，6%～15%之间需校正，大手15%则试验无效。将浓度换算成对数值，死亡率或校正死亡率换算成几率值，用最小兰乘法分别求出标准品和样品的LCse值、按式(B.2)计算毒力效价：B.2.5允许整
毒力测定方法的允许相对偏差要求与B.1.5相同，B.3毒力效价测定方法——以甜莱夜螂（Spodoptera exigua）作试虫的测定方法B.3. 1材料和试剂
标准品：CS-2002，Hra，20000IU/mg。甜菜夜蛾幼虫：Spodopteruerigua。黄豆粉：黄豆炒熟盾廖碎过60日筛。酵母粉（200日)：工业用。
维生素亡：医用，分析纯。
15%尼泊金：对羟基苯甲酸甲酯(化学纯)于95%酒精。10%甲醛：甲醛（分析纯）溶于蒸馏水。琼脂:凝胶强度大于 300 g/crn，蒸馏水。
B.3.2仪器
分析天平：精确度0.1mg。
电动揽拌器：无级调速，100r/min～6000r/min。微波炉或电炉。
振萄器。
水浴锅。
组织培养盘：24孔。
塘瓷盘:30 cm×20 cm。
蘑H三角瓶:250 mL，具塞。
大烧杯：1000ml..
小烧杯：50mL
试警：18mm×180mm。
玻璃珠：直径5mm
GB/T 19567.3---2004
注射器：50 tnl.，
棕本缸。
恒温培养箱。
B, 3. 3测定步骤
B, 3. 3. 1萄料配方
黄豆粉32g（60日），醇母粉16g（200日），琼脂6g垒素C2名，15%尼拍金6.7mL，10%甲醛4 mL,水 400 ml
将黄豆粉、酵母粉、维生素C、尼泊金和10%甲醒放人大烧杯中，加入150m水，混勾备用。将余下的250mL水加人琼脂，在微波炉上加热至沸腾，使琼脂完全溶化，取出玲却至70℃。与其他成分混合，在电动搅拌器内高速搅拌1min，迅速移至60℃水浴锅中加盖保温。归,3.3.2感染液的配制
称取Cb2002标准品150.0mg~300.0mg（精确至0.1mg），置于250mL带有玻璃珠的角瓶中，班人100mt.麟酸缓冲液，浸泡10min，在游涡振荡器上振荡1min后即为标准品离染母液。称取100.00mg150.00mg可湿性粉剂样品，置于250mL带有玻璃珠的三角瓶中，加入100ml.磷酸缓冲液，浸泡10min，在凝涡振荡器上振荡1min配制成样品感染母液。以两循稀释法将标推品和样品母液稀释成一定浓度梯度，每个样品至少各稀释5个浓度梯度，每--浓度感染液吸取3mL至50mL小烧杯中待用。对照吸取3mL磷酸缓冲液。B.3.3.3饲料和感染液的混合及分装用注射吸取27mL简料，注人上述已有样品或标推品感染液的烧杯内，以电动搅拌器搅拌0.5min，迅速倒入组织培养盘土各小孔中（倒入量不要求-一致，以铺满孔底为准），凝固待用。B.3.3.4接虫感染
于26℃~-30℃室温下，将米经取食的初孵幼虫（孵化后12h内）抖人直径30cm的标本缸中，静待数分钟选取爬上缸口的健康幼虫作供试虫，用毛笔轻轻地将它们移入已有感染饲料的组织盘的小孔内，每孔-头虫。每个浓度和空尚对照皆放48头虫，用塑料薄片盖住，然后将组织培养盘逐个叠起，用橡皮筋捆紧，竖放于25℃培养箱内培养72h。R.3.4结果检查和统计分析
用肉眼或放大镜检查死、活虫数，以细签触动虫体，完全无反应的为死出虫，计算蛇亡率。如对照有死亡，间查Abbatt 校正值表或按式(B. 1)计算校正死亡率。对照死亡率在6%以下不用校正,6%~15%之间需校正，大于15%则试验无效。将浓度换算成对数值，死亡率或校正死亡率换算成儿率值，用最小二乘法或有统计功能的计算器，分别求出标准品和样品的LC，按式(B.2)计算毒力效价。B.3.5充许差
力测定方法的允许相对偏差要求与B.1.5相同。、4对掺入其他有效或分的可疑样品的检测对于某些符合正文3.2分析指标的可疑样品，可通过测定样品中胞晶混合物的毒力贡献率，判定样品是否掺入其他有效成分。
B.4.1可湿性粉剂中不同成分的分离用丙将可性粉剂稀释成10mg/nl的溶液，4℃下5000r/min离心10min，保解沉淀部分用等体积的丙翻景浮，再进行离心，共离心洗涤3次，保留沉淀组分；用等体积的蒸馏水悬浮沉淀组分，离心并保留沉淀组分，共进行次离心洗涤，保留沉淀组分，该沉凝纽分即为可混性粉剂中的胞晶混合物。B.4.2毒力效价的测定
按B.1、B.2或B.3的方法，对单位质量可湿性粉剂及可凝性粉剂的沉淀组分（胞晶混合物）分别进行毒力效价测定。
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