DB44/T1163-2013 水中菌落总数复合酶底物检测方法 前言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》编写，由广东省城镇供水协会提出，并归广东省分析测试标准化技术委员会（GD/TC22）负责。主要起草单位：中山市供水有限公司、中山市住房和城乡建设局。主要起草人：凌水平、孙东卫、陈黄静美、陈冬贤、赵丹清、曾银东。本标准首次发布。 1 范围 本标准规定了使用复合酶底物技术测定地表水中菌落总数的方法，适用于地表水的菌落总数检测。检测下限为2 MPN/mL，未稀释样品的检测上限为738 MPN/mL。 2 术语和定义 菌落总数复合酶底物法：指在一定条件下，水样中细菌群分解复合酶底物培养基的物质，在365 nm紫外灯照射下产生蓝色荧光，通过计算样品盘中显荧光孔数检测水中菌落总数的方法。 3 设备和材料 3.1 培养基：含多剂量生化酶物质的100 mL瓶装无菌培养基，或10 mL试管装无菌培养基。本方法采用SimPlate 100 mL瓶装无菌培养基，可选购同类商业化产品，储存于4~8℃。 3.2 样品盘：含84个孔。 3.3 无菌水。 3.4 培养箱：36℃±1℃。 3.5 高压蒸汽灭菌器。 3.6 紫外灯：6W，365 nm。 3.7 无菌吸管：1 mL、5 mL、10 mL。 3.8 无菌瓶：100 mL、250 mL、500 mL或1000 mL。 3.9 冰箱。 4 采样和样品保存 4.1 采样：采样应在无菌条件下进行，直接采集水样，避免污染。河流、湖泊等可用无菌瓶直接采集，桥上可使用水桶、采水器或带坠采样瓶。采样后贴标签，注明样品名称、来源、数量、采样地点、采样人及时间。 4.2 样品保存：样品应尽快送往实验室，如路途遥远，可在1~4℃保存，尽量在8小时内检测，最长不超过24小时。 5 操作步骤 5.1 将培养基用无菌水稀释至刻度，摇匀制成液体培养基。 5.2 用无菌吸管将1 mL水样和9 mL液体培养基加入样品盘中心，盖上盖子轻轻转动，将液体分配到每个孔，使用1 mL无菌水作空白对照。如空白对照显示菌落，总检测结果无效。 5.3 将样品盘竖起90°~120°，将多余液体吸入海绵。 5.4 倒置样品盘，放入36℃±1℃培养箱培养48小时。 5.5 若结果超过上限738 MPN/mL，需用无菌水逐级稀释样品，重复5.2-5.4步骤。 6 结果和报告 6.1 培养48小时后，将样品盘置于6W、365 nm紫外灯下13 cm处观察，佩戴防紫外线护目镜。84个孔中任何显荧光孔计入结果。 6.2 统计显荧光孔数，对照附录A.1确定每毫升样品中菌落总数（MPN/mL），如有稀释，乘以稀释倍数。 7 质量控制 每批新培养基应进行阴性和阳性检验。 7.1 阴性对照：加入1 mL无菌水和9 mL液体培养基，按5.3-5.4操作，如无荧光则为阴性。 7.2 阳性对照：使用市售菌落总数质控标样，按标准证书操作，结果应符合标准证书。