本标准规定了各类食品中硫胺素的测定方法。本标准适用于各类食品中硫胺素的测定。本方法检出限为0.05kg，线性范围为0.2kg-10kg, GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生素B1)的测定 GB/T5009.84-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.84—2003
代替GB/T12390—-1990
食品中硫胺素（维生素B1）的测定Determination of thiamine (vitamin B, ) in foods2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部　
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T5009.84—2003
本标准对应于AOAC45.1.07《食物中硫胺素的荧光测定法》（1995年版）。本标准与AOAC45.1.07的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T12390-1990《食物中硫胺素（维生素B1)的测定方法》。本标准与GB/T12390—1990相比主要修改如下：修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品中硫胺素（维生素B）的测定》；按GB/T20001.4--2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人：王光亚、张宏伟、杨晓莉、门建华、杨月欣。原标准于1990年首次发布，本次为第一次修订。610
１范围
食品中硫胺素（维生素B）的测定本标准规定了各类食品中硫胺素的测定方法。本标准适用于各类食品中硫胺素的测定。本方法检出限为0.05μg，线性范围为0.2μg～10ug。2原理
GB/T5009.84--2003
硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照射下，噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。如试样中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液作测定。3试剂
3.1正丁醇：需经重蒸馏后使用。3.2无水硫酸钠。
3.3淀粉酶和蛋白酶。
3.40.1mol/L盐酸：8.5mL浓盐酸（相对密度1.19或1.20)用水稀释至1000mL。3.50.3mol/L盐酸：25.5mL浓盐酸用水稀释至1000mL。3.62mol/L乙酸钠溶液：164g无水乙酸钠溶于水中稀释至1000mL3.7氯化钾溶液（250g/L）：250g氯化钾溶于水中稀释至1000mL。酸性氯化钾溶液（250g/L）：8.5mL浓盐酸用25%氯化钾溶液稀释至1000mL。3.8
3.9氢氧化钠溶液（150g/L）：15g氢氧化钠溶于水中稀释至100mL。3.10
1%铁鼠化钾溶液（10g/I）：1g铁氰化钾溶于水中稀释至100mL，放于棕色瓶内保存。3.11碱性铁氰化钾溶液：取4mL10g/L铁氰化钾溶液，用150g/L氢氧化钠溶液稀释至60mL。用时现配，避光使用。
3.12乙酸溶液：30mL冰乙酸用水稀释至1000mL。3.13活性人造浮石：称取200g40目～60目的人造浮石，以10倍于其容积的热乙酸溶液（3.12)搅洗2次，每次10min;再用5倍于其容积的250g/L热氯化钾溶液（3.7）搅洗15min；然后再用稀乙酸溶液(3.12)搅洗10 min:最后用热蒸馏水洗至没有氯离子。于蒸馏水中保存。3.14硫胺素标准储备液（0.1mg/mL）：准确称取100mg经氯化钙干燥24h的硫胺素，溶于0.01mol/L盐酸中，并稀释至1000mL。于冰箱中避光保存。3.15硫胺素标准中间液（10μg/mL):将硫胺素标准储备液用0.01mol/L盐酸稀释10倍，于冰箱中避光保存。
3.16硫胺素标准使用液（0.1ug/mL）：将硫胺素标准中间液用水稀释100倍，用时现配。3.17溴甲酚绿溶液（0.4g/L）：称取0.1g溴甲酚绿，置于小研钵中，加人1.4ml.0.1mol/L氢氧化钠溶液研磨片刻，再加人少许水继续研磨至完全溶解，用水稀释至250mL。4仪器
4.1电热恒温培养箱。
4.2荧光分光光度计。
4.3Maizel-Gerson反应瓶：如图1所示。611
GB/T5009.84—-2003
4.4盐基交换管：如图2所示。
图1Maizel-Gerson反应瓶
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1试样准备
贮液槽
交换柱
毛细管
图2盐基交换管
试样采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将其解冻后混勾使用。干燥试样要将其尽量粉碎后备用。
5.1.2提取
5.1.2.1准确称取一定量试样（估计其硫胺素含量约为10μg～30μg，一般称取2g～10g试样）,置于100mL三角瓶中，加人50mL0.1mol/L或0.3mol/L盐酸使其溶解，放人高压锅中加热水解，121℃30 min，凉后取出。
5.1.2.2用2mol/L乙酸钠调其pH值为4.5(以0.4g/L溴甲酚绿为外指示剂）。5.1.2.3按每克试样加入20mg淀粉酶和40mg蛋白酶的比例加人淀粉酶和蛋白酶。于45℃~50℃温箱过夜保温（约16h）。
5.1.2.4凉至室温，定容至100mL，然后混匀过滤，即为提取液。5.1.3净化
5.1.3.1用少许脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部，加水将棉纤维中气泡排出，再加约1g活性人造浮石使之达到交换柱的三分之一高度。保持盐基交换管中液面始终高于活性人造浮石。5.1.3.2用移液管加人提取液20mL～60mL（使通过活性人造浮石的硫胺素总量约为2μ～5μg)。5.1.3.3加入约10mL热蒸馏水冲洗交换柱，弃去洗液。如此重复三次。加入20mL250g/L酸性氯化钾（温度为90℃左右），收集此液于25mL刻度试管内，凉至室5. 1. 3.4
温，用250g/1.酸性氯化钾定容至25mL，即为试样净化液，5.1.3.5重复上述操作，将20mL硫胺素标准使用液加人盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
5.1.4氧化
将5mL试样净化液分别加人A、B两个反应瓶。5. 1. 4. 1
5.1.4.2在避光条件下将3mL150g/l.氢氧化钠加人反应瓶A，将3mlL碱性铁氰化钾溶液加入反应瓶B,振摇约15s，然后加人10mL正丁醇；将A、B两个反应瓶同时用力振摇1.5min。5.1.4.3重复上述操作，用标准净化液代替试样净化液。5.1.4.4静置分层后吸去下层碱性溶液，加入2g～3g无水硫酸钠使溶液脱水。5.2测定
5.2.1荧光测定条件：
激发波长365nm；发射波长435nm；激发波狭缝5nm，发射波狭缝5nm。612
：依次测定下列荧光强度：
试样空白荧光强度（试样反应瓶A)；a）
标准空白荧光强度（标准反应瓶A)；c)
试样荧光强度（试样反应瓶B)；标准荧光强度（标准反应瓶B）。6结果计算
X-(U-U)X
式中：
试样中硫胺素含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；试样荧光强度；
试样空白荧光强度；
标准荧光强度；免费标准bzxz.net
标准空白荧光强度；
硫胺素标准使用液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；用于净化的硫胺素标准使用液体积，单位为毫升（mL）；试样水解后定容之体积，单位为毫升（mL)；-试样用于净化的提取液体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g)；
试样含量由微克每克（μg/g）换算成毫克每百克（mg/100g）的系数。计算结果保留两位有效数字。
7精密度
GB/T5009.84—2003
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。613
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