本标准规定了用气相色谱法测定DHA和EPA的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品何乳粉中DHA和EPA含量的测定。 GB/T 5413.27-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 DHA、EPA的测定 GB/T5413.27-1997 标准下载解压密码：www.bzxz.net

GB/T5413.27—1997
在婴幼儿配方食品中添加DHA、EPA是近两年的科技成果，对其含量的检测方法尚在探索阶段。本标准给出的方法是在参考了大量国内外文献的基础上，经反复实验、验证而确定的，具有操作简便、快速、灵敏度高的特点。
本系列标准从实施之日起，代替GB5413-—85。本标准由中国轻工总会提出。
本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人：刘波、杨金宝、王芸。330
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
DHA、EPA的测定
Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination of DHA and EPA contents1范围
本标准规定了用气相色谱法测定DHA和EPA的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中DHA和EPA含量的测定。2方法提要
GB/T 5413.27—1997
代替 GB 5413—85
抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气相色谱，火焰离子化检测器定量测定样品中的DHA和EPA的含量。
3试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase)。3.2氨水：体积分数≤25%。
3.3乙醇：体积分数≥95%。
3.4乙醚，
3.5石油醚：沸程，30～60℃。
3.6正已烷：色谱纯。
3.7氢氧化钾的甲醇溶液：c(KOH)为4mol/L，使用无水甲醇。3.8标准溶液
3.8.1标准贮备液：准确称取1.00g标准鱼油（EPA163.9mg/g，DHA135.30mg/g），用正已烷溶解并定容至50mL（EPA的浓度为3.2678mg/ml、DHA的浓度为2.7060mg/mL），冷冻保存。3.8.2标准工作液：取标准贮备液1.00mL，用正已烷烯释并定容至10mL（EPA的浓度为0.3268mg/mL，DHA的浓度为0.2706mg/mL），使用前配制，以防止溶剂挥发而使浓度改变。4
仪器和玻璃器血
常用实验室仪器及：
4.1毛氏抽脂瓶。
4.2离心机。
4.3水浴锅。
4.4振摇器。
4.5气相色谱仪。
国家技术监督局1997-05-28批准1998-09-01实施Www.bzxZ.net
4.6火焰离子化检测器。
GB/T 5413. 27-—1997
4.7色谱柱：2m，10%EGSS，GAS-CHROMQM/100～200目，不锈钢柱。5操作步骤
5.1祥品处理
5.1.1含淀粉样品
准确称取1.0000g样品放入毛氏抽脂瓶中，加入0.1gTaka淀粉酶，再加入10mL45~50C的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，取出冷却室温。5.1.2不含淀粉样品
准确称取样品1.0000g.放入毛氏抽脂瓶（4.1）中，用10mL65℃的热水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷至室温。
5.2测定液的制备
5.2.1于上述样品溶液中加人2mL体积分数为25%的氨水（3.2），置于65℃水浴（3.3）中15min，取出，轻摇，冷至室温。
5.2.2加入10mL乙醇（3.3），混匀。加入25mL乙醚（3.4），塞上塞子振摇1min。加入25mL石油醚（3.5），塞上塞子振摇1min。再加入25mL石油醚，塞上塞子振摇1min。离心或静止，使醚层、水层分开。有机层转入烧瓶中。第二次提取加入的试剂为5mL乙醇、15mL乙醚、15mL石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15mL乙醚和15mL石油醚，如上操作。5.2.3把提取的醚液合并，减压浓缩至近干，用正已烷溶解残留物并定容至10mL，摇匀。准确吸取2mL此液于10mL带盖离心管中，加入0.2mL氢氧化钾的甲醇溶液（3.7），振摇1min以上，放置10min（甲基化反应）。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。5.3测定
5.3.1测定条件
a）进样器温度：230℃；
b）检测器FID温度：250℃；
c）进样体积.2.OμL；
d）灵敏度：10\，
e）衰减:S；
f）氮气流速：50mL/min，氢气流速：25mL/min；空气流速：300mL/min；g）柱温：190℃。
5.3.2定性测定
根据保留时间定性。改变色谱条件，如柱温度、载气流速，使标准组分EPA和DHA的保留时间发生改变。如果样品中的某个蜂随标准品中的某个峰的保留时间有同样的改变，即证明样品中含有与标样相同的某个组分。
5.3.3定量测定
外标定量法。
注射一定量的标准工作液进入气相色谱仪，得到EPA和DHA的峰面积A；注射等体积的样品待测液进入色谱仪，得到样品中EPA和DHA的峰面积B，。6分析结果的表述
样品中EPA或DHA的含量（mg/100g）=式中：B一样品中组分i（EPA或DHA)对应蜂面积；332
.（1)
GB/T 5413.27--1997
一标准样中组分i的质量浓度，mg/mL；V-—待测样品的总体积，mL；
A，标准工作液中组分i的峰面积；m——样品的质量·g。
允许差
同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。333
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