ICS 65.120 B46 山东省地方标准 DB37/T 3422—2018 混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素的测定 高效液相色谱法 Determination of colistin sulfate in mixed feed additives - High performance liquid chromatography 2018-09-14发布 2018-10-14实施 山东省质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：山东省饲料质量检验所。 本标准主要起草人：张玮、宫玲玲、李会荣、张芸、孙延军、李俊玲。 1 范围 本标准规定了混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于以稻壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、小麦粉及其混合物（包括玉米芯粉、桔梗、甘草、白术、赤芍、知母、茯苓等）为载体的混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素的测定。 本方法检出限：硫酸粘杆菌素A为1.0 mg/kg，硫酸粘杆菌素B为0.74 mg/kg；定量限：硫酸粘杆菌素A为2.0 mg/kg，硫酸粘杆菌素B为1.49 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样中的硫酸粘杆菌素用5%草酸溶液提取，经固相萃取柱净化后，采用丹磺酰氯衍生，高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯或更高纯度，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 硫酸粘杆菌素标准品：CAS 1264-72-8。 硫酸粘杆菌素A含量≥44.6%，硫酸粘杆菌素B含量≥33.2%。 4.3 5%草酸溶液：称取50 g草酸，用水溶解并定容至100 mL。 4.4 0.2%甲酸水溶液：取2 mL甲酸，用水稀释至1000 mL。 4.5 盐酸溶液：盐酸:水 = 9:100（V/V）。 4.6 乙腈-甲酸水溶液：乙腈（色谱纯）+0.2%甲酸水溶液 = 2+8（V/V）。 4.7 丹磺酰氯溶液（3.0 mg/mL）：称取0.30 g丹磺酰氯，用乙腈溶解并定容至100 mL，避光现用现配。 注：丹磺酰氯对光和湿敏感。 4.8 碳酸钠缓冲溶液（pH 10.5）：c(Na2CO3)=0.1 mol/L，用盐酸调节pH至10.5后定容。 4.9 盐酸甲胺溶液（20 mg/mL）：称取2.0 g盐酸甲胺溶解并定容至100 mL，2℃～8℃保存。 4.10 硫酸粘杆菌素标准贮备溶液：用乙腈-甲酸水溶液定容配制，2℃～8℃保存，有效期6个月。 4.11 硫酸粘杆菌素标准中间溶液：由贮备液稀释制得，2℃～8℃保存，有效期3个月。 4.12 硫酸粘杆菌素标准工作溶液系列：现用现配。 4.13 固相萃取柱：亲水亲脂平衡小柱或同等性能产品。 4.14 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。 5.2 分析天平：感量0.00（部分原文缺失）