GB/T 19495的本部分规定了转基因产品检测方法的通用技术要求。 本部分适用于转基因动物、植物、微生物及它们加工产品中转基因成分的检测。 GB/T 19495.1-2004 转基因产品检测 通用要求和定义 GB/T19495.1-2004 标准下载解压密码：www.bzxz.net
GB/T 19495的本部分规定了转基因产品检测方法的通用技术要求。 本部分适用于转基因动物、植物、微生物及它们加工产品中转基因成分的检测。

1范围
规范性引用文件
术语、定义和缩略语
实验室通用要求
5.材料，试剂和标准物质通用要求6拥样通用要求
制样通用要炎
险测方法通用要求
结果的表述与判定
测试报件
样品保存
参考文献
GB/T 19495. 1--2004
GB/T19495《转基因产品检测>为系列标准：GB/T 19495. 12004
GB/T 19495.2—2004
G/T 19495. 32004
GB/T 19495.42004
GB/T 19495.52004
GB/T 1H495, -2004
GB/T 15495. 7- 2004
GB/T 13495. 8--2004
转基因产品检测
转基因产品检测
转基因产品检测
转基固产品检测
转基因产品检测
转基国产品检测
转基因产品检测
转基国产品检测
本部分引用了ENISO/DIS21276中的内容言
通用要求和定义;
实验室技术要求；
核酸提取纪化方法；
该酸定性 PCR 检测方法：
核酸定量 PCR 检测方法;
基因芯片检测方法；
抽痒和制样方法；
蛋白质检测方法。
本部分山国家认证认可监督管理委员会提出并门口：GR/T 19495. 1--2004
本部分起草单位：中华人民其刘国深圳出人境检验检按局、国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实验所、中华人民共和国广州出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国汇苏出人境检验检疫员、中国农科院殖保所中国农业大学本部分主要起草人：杨伟东、朱水芳、金显忠、查柱明、吴际云、覃文、曹际娟、陈洪俊、程颖慧、蒋原、下锡锋、黄昆仑
本部分系首次发布的国家标准。1范围
转基因产品检测通用要求和定义GB/11995的本部分规定了转基因产品检测方法的通用技术要求。GB/T 19495. 12004
本部分适用于转基因动物、植物、微尘物及它们加工产品中转基因成分的险测2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T19496的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括裁误的内容)或修订版均不适用士本部分然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些受件的最新版本。儿是不注日期的引用文件，其最新版木逅用于本部分．
GB/T 5682 -1992
GB/T15481
GB/T 19495.2-
GR/T 19495.
GB/T 19495.
分析实验室用水规格和试验方法（evTSo3696：787）检测和校准实验室能力的通用要求200
转其因产品检测 实验室技术要求转基因产品检测核酸提取纯化方法2004
2004转基因产品检测
抽样和制样方法
雪建康
ASTME 1342G1997
用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原尘生物、病毒、遗传要素以及动物和植物的保
3术语、定义和缩略语
下列术语、定义和缩略语适用于 GB/TS
3. 1 一般术语
物种分类targel t
9495的本部分
转基因生物所属类别，道常以种为分类单位，也3. 1. 2
实验室样品laburatory sample
以是更高或更低级的分类单位。山原始样品经过混合、缩分得到的一定数量样品。用丁制各试伴和存套样品。3.1.3
测试样品testsample：testportio全部或部分实验室样品经进一步均匀化得到的用于分析或测试的样品，3. 1. 4
灵敏度sensitivity
结果的变化除以相应的浓度标准曲线也就是分析校准曲线的会率。3. 1. 5
检测低限limitof delcction
定性方法的检测低限是指被检测物能被可靠检出的最低浓度或含量。但是不必进行定量·并几已经经过合作实验的证明或单实验案的确认GB/T 19495. 1--2004
定量检测低限
limit ofquanlitation
定量分析过程的低限是指被检测的样品在合适的精确度水平上能被检测出的最低合量或浓度,并且依据ISO 5725 条款[2]或[3].经过合作实验的满意证明或单一实验室的确认。3. 1. 7
正确度accuracy
测试结果和认可参考值的致性。3. 1. 8
真实度trneuess
物购直安品
婴色美心
大量实验结果的平均值和认可参考值的一致性注：真实度(可信度)的量度标准通常是以斜率来表示的。可信度也就是所提到的\平均值的正确度”。3. 1.9
精确度precision
在愈定条件下所获得的独立浏试结果之间的致性。3. 1. 10
可重复性
repcalabilily
重现性reproducibility
章复(可重现;祭传下的精确度。3. 1. 11
可重复性条件
Frcpeatability conditions
国国商动业国花+#
相同的操作人员在短的问隔时间内在同一·实验室：应用柜问的仪器设备，相司的方法、完成和司书测试项广所获得的独高测结兴的条件，3. 1. 12
reproducihility conditions
重现性条件
不同的操作人员在不同的实验室应用不同的仪器设备，用相同的方法完成和司物测试颈所获得的测试结果的条件。
可重复性标准偏差
repeatability standard deviation重现性标准偏差
repcatahility reproducibility standard deviation在可重复性(重现性)条件下获得的测试结果的标准遍差，注：可重复性（重现件）利准偏差是情在可重复性（事现性）然件下获行的测试结果的散有的分布疾态的限量标递相同地，“可重复性（查现性）变化\或\可重复性（重现性)变化系数\可改被定义或用」在可重复性（重现冶）条件下焱得翁测试结果伤散布情沉的度标准3. 1. 14
rcpeatahility limit
可重复性低限
重现性低限
repealability reprodueibility limit少于或等于在川重复性（重跳性)条件下瘀得的两欧测试结果的绝对差异的值：可以被认为是率概率。
江：使附符与R」
当检查在两个在百重复性(重现型)条件下斐得闷猫立的测试结果时：对照然得书重复性(重现性)阈值[R]-2. 8S,[57。
E collaborative trial or interlaburatory study合作实验或实验室间的研究
儿个实验在有证明文件的情况下对一个或多个稳定的、沟“的原料递行量化检测实验，并肥结渠2
GR/T 19495.1—2004
汇综成单的文件。合作实验的指导方针在ISO5725和IS()/AOAC/IUPAC协议草案中有详细的描述
适当的用途 fitness for purpose适用性applicability
用二鉴是基质、分析物或种尖约方法的啦可范围.根据其性能特征来判新它的浓度范叫和研究/监控类型是全适的。也就是逛背所说的为法的局限性，3. 1. 17
实用性 practkeahility
操作的简使性，根剂完成特定必要的烂能标准从而符合指定的目的所需豹样品量和费月3. 1. 18
适用范图applieabilityrange
量化范围range f guantification线生linearity
动态范围dynamice.ranu
山合准实验证明了公析过程内的滋度词隔具有适当水平的精确度和正确度，3. 1. 19Www.bzxZ.net
度量的不确定性measurenentuncertainty管度量结某析关联的参数，能够合理表现被分松物效值散布特点。3.2DNA 提取和纯化的相关术语
DNA和 RNA的提取
DNA and RNA exiraclion
从测试样品的各种成分中分离出 DNA 和 RNA3.2.2
DNA纯化DNApurification
获得更高纯度DNA的方法，在文中，纯度指的是降依可以观察到的或可测最到的PCR抑制物的作用。
PCR 质控 DNA PCR quality DNAPCR级 DNA,即可以用于 PCR扩增的 DNA模板。3. 3 检测方法的相关术语
聚合酶链式反应 polymerase chain reaction模板 DNA 光经高温变性为单链,在 DNA 案合酶和适宜的温度下,两条引物分别与模板 DNA 两条链上的-段互补序刻发生退火.接者在A聚合酶的催化下以四积dVP为底物，使退火引物得以他，如此反复变性、迟火和IDNA合成这一循环.使位于两段亡知序列之间的 DNA片段呈几何倍效扩增，
多量 PCR multiplex PCR
在同一管 PCR反应体系中有两对以上的 PCR引物,可同时扩增多个产物：3.3.3
基因芯片
gene-chip
H电A电
又冻DNA芯片，是指将大量特定的案核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于载体3
GB/T 19495. 1-2004
上,测试样的核酸分子经是标记,与同定在载体上的 DNA阵列宁的点按喊基配对原理同时进行杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统归播芯片.用计算机款件分析杂交信号强度而获取样品分了的数量和序列信息的技术方法，
酶联免疫吸附测定enzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸除测定是用酶作为标记物或指示剂进行抗原或光体定性、定量测定的综合技术。3.3.5
核酸序列的鉴定identification;identity of nucleic acid seguence逛过按针杂交、酶切以及核酸序列测定，对待测样品扩增片段序列与参照核酸升毁和（或）序列进行比较和鉴定。
筛选screening
能够迅速可靠地去除(筛选大量防性(或阳性)样品的方法，要求使用严格的方法限定检测样品的数量。
本部分筛选方法是指检测儿种转基因生物的相同基因战分的方法·例如应用 PCR 扩增检测启动了、终止子或其他被关主的基因成分的方法。3. 3.7
连接区域junetion egion
定两段连续序列之间连接处的核酸序列。例如一个启动子和一个基因的连接区域！3.3.8
整合-边界区域
ategration-bon
外源基因括入位点附近的区域墩。包括外源基因的部分序列和受休生物基因纽的部分序列。3.3.9
物种特异性目标序列
物种内源目标序列
taxon specifie larget sequencetaxon endogenous larget sequence可特并性确定物种的己知序列，即始终存在于该物种中而在其他物种中不存在的序列。物种特异性序列有两群类型：
数量可变（和/或）多拷贝的序列，能够用于评价该物和的核酸是否售在低拷贝和/(或)单一接贝的序列,而作为该物种基组的参照序刻用于定量分析中。3. 3. 10
前处理流程forwardflov
材料和（或)样品的操作原则，用于确保实验室样品、原材料和包括DN入扩增在内的经过处理的测试样品在整个实验过程中保格自然分离状态。3. 4 关于对照的术语
阳性目标 DNA 对照 positive DNA target control参照DNA或从可溯源的标准物质提取节DNA或从含有已短序列阳性样品（或生物）中提取的DNA，该对照用于证明视谢群品的分析结果含有巨标序列，3.4.2
阴性目标DNA对照negative DNA target control不含外源目标核酸序列的 DNA片段。可使用可溯源的阴性标准物质。4
PCR 抑制对照PCR inhibition controlGB/T 19495.12004
该对照将己知量的阳性DNA模板加入到含有等量测试样品DNA的同一反应中，注：该对照可检测出是否子色可游性的 PCR抑制剂,在PCR 扩增为阴性结桌和定量PCR 的情洗下转刘需要。3. 4. 4
扩增试剂对照amplification reagenl control该对照包括除了测试样品DNA模板以外所有的反应试剂，在PCR反应体系中用相间体积的水(不含核龄)取代模板 DNA。
提取空白对照extraction blank control该对照为在DNA提取过程中，以水代替测试样品完成提取过程所有步骤，用以证明提取过程中没有核酸污梁，
以不同批次提收的1DNA并进行多个PER分析时，在做测试样品PCR时还应司时包括提取空自对照
阳性提取对照
positi
eextractioncontrol
用含有已知且标核酸的样品与测试样品同时提取DNA，证明用相同的提取方式，两者都提取出月标核酸。
环境对照environnent contrul
于髋定如实验室空气没有受到核酸污染的PCR对照，该对照是在管中Ⅲ人不含核酸的适量体积的水，在样品测试野程中即从混样到扩增均散开与空气接触。3.5 标准物质的相关术语
标准物质
种原料或物质，真
测材料。
ematerial
项或多项性质十分相同的，能很好地用于校准没备、评信实验方法或评估检有证的标准物质certificd reference material可以溯源（具有证的标准物质。其一项或多项性质已被有效的技术程序证明，具有证书或可以潮源·或是具有其他经过认机构发出的文件，3. 6 与定量有关的相关术语
内源基因entlogenous gene
管家基因housekeeping gene
内源参照基因endogenous reference gene参照基因referenccgene
在栽培的物种中考工数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于对基因组中某一月的基因的定量分析。
4实验室通用要求
转基因成分检测实验室应符衍合GB/T15481和（GB/T19495.2-20C4的规定。转基因产品检测实验室应参加出实验室认可主管部门组织的水平测流月结果合格·并获得国家实验室认可主管部门授权从享动物、植物、微生物及它们加工产品中转基因成分的检测资格。5
GR/T19495.1—2C04
5材料、试剂和标准物质通用要求所用的引物应是PCR级和（或)IIPLC:级，案针应是IIPLC级；分析过程所有实验仅用不含DNA和13NA裤忙分析纯或岸化试剂：所用的水应符会（1366821992一级水的要求：对关键试剂成在使用前进行质量测定：所配置的溶液需费高压灭脂保存，阻在容器注明流剂名称、浓按、配罩时间、保存条件、头效期及配宵者姓名：天宜高压灭菌的试剂应使用疑滤设备(孔经0.22un)察菌：新品化试剂盒应注明到货H期·门接照舰定的储荐祭件存效：ICR试剂虚小墅保存以减少泻染：材料.容器及试剂的保孕部应该有防污染措施：圆种、质粒组组织的贮在于保脊应符合4SME1342一1997的规定所用的标准物质应出认以机构制备，具有证·并有溯源性，或是具有其他的经过认证机构题发的义件证明。
6抽样遥用要求
抽岸的方法应采周相应国家标准或国弥标准。样品的数量及实验室栏品量应根括拌品的状态和特性采用GB/T19195.7—2004的规定，制样通用要求
实验室收样吊后·应中虐单进行确认.中查油样报鲁，核查样品标识，确认无识后，传进行视试栏品的制备。
将实验室样品的勾混和，取一半作为存留群品，另一半用下检测：测试详品书制备应按GB/T1949元.22001户的规定退行，防上污染测试样品的制各方法应根据栏品的状态和特生采用GB/T19499.3剂GB/T29495.7的方法8检测方法通用要求
实验率应采最满是客户婴求的检训力法·包括采历函家标准或国你标准.实验空应确保使尚标准的最新有效殿本。率”末指定所用方法时，实验室应选择已在国际标雅或国家标雅中颁东的有美方法实验空制定的方法或被实验案选楚的其他方法须经过有效验证方能采用。以核酸为基础的检测方法
核接检测方滨适用二对所转入的外来该酸片段的检测。8.1.1转基因产品核酸的提取
测试栏品核酸的摄反采用本系列标准GB/T1S4195.3-2004中相应的方法。DNA提收必须充分除抑制PCR反应的白质、多糖、脂肪类、纤维素以及IDNA提取过证人的试剂：包括龄类、EDTA，三氧甲烷、异内醇、乙酸钢、异戊醇、7.醇等：所提收的1NA必须是能满足下游分概要求的优页DNA模板。
衔个实验室样品必须设置两个提取平行样。忽“次从测试样品提取核酸的过程都必须设暨一个提取空白对照(水代替样品),载多19个品就必领设肾一个提取空白刘照·如果超过！个样品·期必须增切防性提殿对照，风酷虚最对照必须有规律他应·或者当使用一批新的提取试剂时要应所.以示试剂悬否有效或提取步骤是否存在惜误。在实验的整个过程还必须设立环境对照。8.1.2定性PCR检测方法
定性 PCR检测力法有常规『CR、实吐荧光 PCR和基固芯片检测片法。定性检测对象包括转基固的片动子、终止子、试性筛选转因、目的基因等外源基阅：检测时应设立阳性月标D小A对照、阴性口标LA对照，鼠剂空凸对照和提取空白对照，必要时还必须设立CR抑制剂对照；后时资检浏物种内源基岗。是性方法的特异性必须通过有效实验加以证明，羽性误差率应小丁等三5%。GB/T 19495. 1—2004
定性方法的检测低限应符合分所物的最低含量水平即至少有95治的灵致度（性误差率小于等于5%),实际的检测低限是指目标DNA能被检测到的最低含量·它与测试样品、模板DNA质量和（或）数量以及方法的绝对低限有关。
8. 1. 3 定量 PCR 检测方法
转基因友分的定量PCR检测方法视情况选用外源基因的其中一种进行·并使用符台采用检测标准白规定的转基医阳性标能物质或阳性标准分子。检测时须设立阳性 DNA 对照,阴性 1DNA对照、试剂空自对照和提取空白对照.必要时还必须设立PR抑制动对照。定量方法的检测低限应符合分析物的最低含量水平即其RSLD，为25与或者更少，定量方法的实际险视低限足指目标DNA能够被可靠定量的最低合量：它与测试样品、模板DNA质量和（或）数量以及方法的绝对低限有关。
8.2以蛋白质为基础的检测方法
蛋启质检测方法是检测转人外源基医的衰达蛋方·适月干抗原性未被酸坏的转基固产品。检测方法主要有免疫学方法和化学分新等方法，可以采用符合国家标准的蛋户质检测试剂盒。9结果的表述与判定
9. 1 一般性要求
检测结是不应表示为\十\或“一”。9. 2 各种对照结果与测试结果的关系各种对照的 PCR结果见表1。表 1可用于分析知报告测试样品的检测结果。表 1 各种对照的 PCR 检测结果与测试结果判定的关系测试样品
阳性最段对照
。扩塔的片标计段可检出。
市，未哈出矿增的日标片段
提求学白对照阴性口标 DNA对风阳性日标 DNA 对照十
成从温段核酸开始重微实验（可能存在污染）e应选择见换核酸提取方法或降己提取的核险工新纯亿（可能有在抑制物）9, 3阴性结果的表述
阴性结果不能表述为\o\或\不含转星因成分（GMO not present)”结果分所
阴性结果的测试报告中应注明\对于义物种，末检测出转基医成分”并且注明该检测方法的检测低限LOD
9. 4阳性结果的表述
阳性结果测试报告中应注明“对干实物种.检测出转基因腹分，如有百能也可以包括对转基因成分的确正。9.5 不确定结果的表述
经过两次以上从核较提取开始的重复检测,检测结可疑即不确定(昌现阴性结灵和阳性结果)重现性不好，可在测试报告中表述该实验空样品的检测结果为阴性，并注明定量检测方法禾定性检方法的检测低限。
GB/T 19495. 12004
9.6检测质量保证
检测结果应来自同实验空样品的两分测试样品当一份测试样品的结果为阳性，另一份测试样品的结果为阴性时,应重做检测，可能的活.可通理增加?CR反应体系中DNA模板量，使两份试样得到同栏的结果。此外，还需检测漠板 LDNA的质量10测试报告
样品经检测后，实验空应根据实验的具体操作程序和结果做好详细的实验记录，出具检测报告。检测报告至少包含如下内容：
实验室样品的捕述、状态和明确的标识；检测依据；
取样方法与闫期
收样的日期：
储存条件；
检测开始与结束口期；
检测负责人
实验室样品与测试样品的量：
特定方法取得的结果，结果使用的单位及计算方法：检测过程观察到的特别情况；
对检诞方的偏离、增添或測节，一本系列标精中需要报告的内容，11样品保存
存查样品应视样品的状态采用相应的保存方式，要善保存5个月。如险测为含有转基因成分，则样品保存期为1年，以备复验、谈判和仲裁，保存期满后，需经无害化处，8
参考文献
GR/T 19495.i—20C4
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