ICS 65.120 B46 DB35 福建省地方标准 DB35/T 1089—2011 发酵鱼粉中寡肽含量的测定 The Detection of Oligopeptides in Fermented Fishmeal 2011-01-17 发布 2011-02-20 实施 发布单位：福建省质量技术监督局 前言 本标准按GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的规则起草。 本标准由福建省海洋与渔业厅提出并归口，由福建省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：福建省农业科学院中心实验室。 本标准主要起草人：罗钦、杨苏、陈人弼、宋永康。 1 范围 本标准规定了发酵鱼粉中寡肽含量的测定方法。 本标准适用于发酵鱼粉中寡肽含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6003.1 金属丝编织网试验筛 GB/T 6379.1—2004 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第1部分：总则与定义 GB/T 6379.2—2004 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法 3 方法原理 寡肽是指由2个至20个氨基酸残基通过肽键连接形成的肽，分子量一般在180 Da～2000 Da之间。单宁酸可沉淀分子量在2000 Da以上的蛋白质。 采用凯氏定氮法测定经单宁酸沉淀后滤液中的寡肽与游离氨基酸总含量，再用甲醛滴定法测定滤液中游离氨基酸含量，两者差值即为发酵鱼粉中寡肽含量。 4 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水（符合GB 6682规定的三级水）。 4.1 单宁酸溶液：称取16 g单宁酸溶于100 mL水中，用滤纸过滤，现配现用。 4.2 混合催化剂：6 g硫酸钾与0.4 g硫酸铜（五水合物）混合均匀。 4.3 混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液与0.5%溴甲酚绿乙醇溶液按等体积混合。 4.4 盐酸标准溶液（0.01 mol/L）：按GB/T 601制备。 4.5 蔗糖。 4.6 硼酸溶液：称取2 g硼酸溶于100 mL水中。 4.7 氢氧化钠标准溶液（0.1 mol/L）：按GB/T 601制备。 4.8 氢氧化钠标准溶液（0.05 mol/L）：由0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液稀释制备。 4.9 中性甲醛溶液（pH=8.10）：量取200 mL 37.0%～40.0%甲醛溶液于400 mL烧杯中，在电磁搅拌条件下，用0.05 mol/L氢氧化钠溶液调节至pH 8.10。 4.10 30%过氧化氢。 4.11 氢氧化钠溶液：称取40 g氢氧化钠溶于100 mL水中。 4.12 pH 6.8缓冲溶液：取0.1 mol/L氢氧化钠溶液22.4 mL与0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液25.0 mL，加蒸馏水至200 mL。 5 仪器设备 5.1 样品粉碎机或研钵。 5.2 试验筛：符合GB/T 6003.1要求，规格为200×50—0.25/0.16。 5.3 分析天平：感量0.0001 g。 5.4 消煮炉或电炉。 5.5 滴定管：酸式，10 mL、25 mL。 5.6 凯氏烧瓶：150 mL。 5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 5.8 锥形瓶：磨口或非磨口，150 mL、250 mL。 5.9 容量瓶：100 mL。 5.10 pH计：精度0.01。 5.11 电磁搅拌器。 5.12 振荡机。 5.13 离心机：转速5000 r/min。 6 测定步骤 6.1 样品处理 取具有代表性的试样，采用四分法缩减至200 g，粉碎后全部通过试验筛（5.2），置于密封容器中保存，防止成分变化。 称取处理后的试样5 g（精确至0.0001 g），置于锥形瓶中，加入100 mL水，间歇振摇浸提3 h后，在5000 r/min条件下离心30 min，过滤，取滤液（a）备用。 6.2 寡肽和游离氨基酸总量的测定 吸取滤液（a）10 mL于100 mL容量瓶中，加入50 mL水摇匀，再加入10 mL单宁酸溶液（4.1），混匀后定容至100 mL。 在5000 r/min条件下离心30 min，过滤，取滤液（b）备用。 吸取滤液（b）10 mL置于凯氏烧瓶中，加入6.4 g混合催化剂（4.2），混匀后加入12 mL浓硫酸，在消煮炉或电炉上缓慢加热。待泡沫消失后加大火力，直至溶液澄清，并继续加热（原文未完）。