ICS 65.020 B16 DB35 福建省地方标准 DB35/T 1218—2011 马铃薯晚疫病菌生理小种鉴定技术规程 Technical Standard for Identification of Physiological Races of Phytophthora infestans on Potato 2011-12-31 发布 2012-03-15 实施 发布单位：福建省质量技术监督局 目次 前言 1 范围 2 术语和定义 3 接种体的制备 3.1 培养基的配制 3.1.1 黑麦培养基 3.1.2 选择性培养基 3.1.3 MS培养基 3.2 晚疫病样的采集 3.3 晚疫病菌的分离 3.3.1 保湿培养分离法 3.3.2 薯片夹叶分离法 3.4 晚疫病菌的鉴定与纯化 3.5 晚疫病菌的保存 3.6 孢子囊悬浮液的制备 4 鉴别寄主的保存与扩繁 4.1 保存 4.2 扩繁 5 接种鉴定 5.1 接种方法 5.2 接种技术 5.3 接种后的培养 6 病情调查 6.1 调查时间 6.2 病情调查方法 7 生理小种确定 8 鉴定后材料的灭活处理 附录A（资料性附录）致病疫霉菌菌落培养特征及孢子囊形态特征 附录B（规范性附录）植物水培标准营养液配方 附录C（规范性附录）马铃薯晚疫病菌生理小种命名方法 前言 本标准按GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的规定进行编写。 本标准由福建省农业科学院提出，由福建省农业厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：李本金、陈庆河、翁启勇、兰成忠、赵健、邱荣洲。 1 范围 本规程规定了马铃薯晚疫病菌生理小种室内鉴定的方法，包括接种体的准备、鉴别寄主的保存与扩繁、接种鉴定、病情调查、生理小种确定及鉴定材料的灭活处理。 本规程适用于马铃薯晚疫病菌生理小种的室内鉴定。 2 术语和定义 以下术语和定义适用于本标准。 2.1 人工接种鉴定（artificial inoculation） 在人工控制条件下，用马铃薯晚疫病菌孢子囊接种到鉴别寄主的离体叶片上，根据接种叶片的孢子囊产生情况判定菌株所属的生理小种。 2.2 接种体（inoculant） 用于人工接种鉴定的马铃薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）孢子囊悬浮液。 2.3 离体叶片接种法（leaf inoculation in vitro） 采用鉴别寄主植株中部复叶的小叶片进行接种的方法。 2.4 对照品种（contrast cultivar） 不含已知抗病基因的马铃薯感病品种（r）。 2.5 鉴别寄主（differential host） 含有主效抗性单基因（R1～R11）及对照品种的一组马铃薯品种。 3 接种体的制备 3.1 培养基的配制 3.1.1 黑麦培养基 取黑麦50 g，加适量去离子水浸泡36 h后用匀浆机粉碎，在55 ℃～60 ℃水浴1 h～2 h，经四层纱布过滤，取上清液补水至1000 mL，加入琼脂17 g，121 ℃高压灭菌25 min。 3.1.2 选择性培养基 在黑麦培养基中加入利福平20 mg/L、氨卡青霉素200 mg/L、70%五氯硝基苯100 mg/L。 3.1.3 MS培养基 组分包括：硝酸铵1.65 g、硝酸钾1.9 g、氯化钙（CaCl2·2H2O）0.44 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.37 g、磷酸二氢钾0.17 g、碘化钾0.83 mg、硼酸6.2 mg、硫酸锰22.3 mg、硫酸锌8.6 mg、钼酸钠0.25 mg、硫酸铜0.025 mg、氯化钴0.025 mg、硫酸铁27.8 mg、乙二胺四乙酸二钠37.3 mg、肌醇100.0 mg、烟酸0.5 mg、盐酸吡哆醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.5 mg、甘氨酸2.0 mg、蔗糖30 g、琼脂7 g，加蒸馏水至1000 mL，灭菌前调pH至5.8。 3.2 晚疫病样的采集 在晚疫病发生或流行期采集具有典型症状的马铃薯病叶，用保鲜袋或薯片夹叶带回实验室，在18 ℃～20 ℃光照培养箱中保存备用。 3.3 晚疫病菌的分离 3.3.1 保湿培养分离法 将采集的病叶用自来水冲洗干净，晾干后叶背朝上放入培养皿，在18 ℃～20 ℃条件下保湿培养1 d～2 d。挑取形成的霉层接种于选择性培养基上，在18 ℃～20 ℃条件下培养7 d～9 d（原文未完）。