本标准规定了葡萄球菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。本标准适用于葡萄球菌食物中毒。 WS/T 80-1996 葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则 WS/T80-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
葡萄球菌食物中毒
诊断标准及处理原如
Diagnostic criteria and principles of managementfor food poisoning of Staphtococcus aureus1主题内容与适用范围
本标准规定了葡萄球菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。本标准适用于葡葡球菌食物中毒。引用标准
GB4789.10—94食品卫生微生物学检验葡萄球菌检验GB14938—94食物中毒诊断标准及技术处理总则3诊断标准
3.1流行病学特点
WS/T 80-1996
3.1.1国内最带见的中毒食品为乳及乳制品，蛋及蛋制品，各类熟肉制品，其次为含有乳制品的冷冻食品，个别也有含旋粉类食品。
3. 1. 2 其流行病学特征为起病急,潜伏期一般在 2~～4 h。3.2临床表现
主要症状为恶心，剧烈地反复呕吐、腹痛，腹泻等胃肠道症状，3.3实验室诊断
3.3.1从中毒食品中直接检测肠毒紊（肠毒案检测方法见附录A）,并确定其型别。3.3.2从中毒食品、患者呕吐物、粪便中经培养分离出金黄色葡葡球菌，菌株再检测肠毒素，证实为同一型别。
3.3.3金黄色葡萄球菌检测方法见GB4789.104判定原则
4.1符合本标准流行病学特点及临床表现。4.2实验室诊断
4.2.1中毒食品中检出肠素。
4.2.2从中毒食品、患者吐泻物中经培养检出金黄色葡萄球菌，菌株经肠毒素检测证实在不同样品中检出同一型别肠毒素。
4.2.3从不同患者吐泻物中检出金黄色葡葡球菌，其肠毒素为一型别。4.2.4凡符合其中一项者即可判断葡药球菌食物中毒。中华人民共和国卫生部1997-01-11批准1997-09-01实施
处理原则
按GB14938执行。
wS/T 80-1996
A1 设蓄和材料
A1.1均质器。
A1.2冰箱。
A1.3离心机。
A1.4分液漏斗。
A1.5透析袋。
A1.6振荡培养箱。
10 mL,1 ml. 吸管。
电扇。此内容来自标准下载网
载玻片。
三角瓶：250mL。
150mm直径大平血。
玻璃纸。
镊子。
三角棒。
直径2. 5mm金属打孔器。
塑料模板。
培养基和试剂
A2.1产毒培养基
蛋白陈
多价蛋白陈
胰消化酪蛋白
氯化钠
磷酸氢二钾
磷酸兰氢钾
氯化钙
硫酸镁
蒸馏水
WS/T 80-1996
附录A
葡萄球菌肠鼻素检测方法
(补充件）
200mg（氨基氮）
加至 1 000 mL
10～12g（固体透析培养用）
pH7.27.4,103.43kPa(151b)高压灭菌30min。A2.2营养琼脂。
A2.31%琼脂糖
在注射生理盐水 100mL中，加1g琼脂糖,68.95kPa(10 lb)10 min高压灭菌。A2.40.2%琼脂糖（蒸馏水配制）。A2. 5 0. 2 mol/L pH7. 5 盐水。A2.6三氯甲烷。
A2.7 6 mol/L 盐酸
A2. 8 5 mol/L 氢氧化钠。
A2.9生理盐水。
1%(V/V)Z酸。
WS/T 80-1996
A2. 11 0.1%噻嗪红RL用1%(V/V)乙酸配制］。A2.12硅胶或凡士林。
A2.13A,B.C、D 型葡萄球菌肠毒素和抗血清。A3
检验程序
从食物中检验肠毒素检验程序如下。A3.1从菌株检测肠毒素
营养琼脂斜面37℃18~24h
用盐水洗下菌苔，放入产毒培养基固体培养法37℃温箱
液体培养法37℃振荡培养箱
8 000 r/min 离心 20 min
100C加热10min再离心
取上液或浓缩至 1~～2 mL
双相琼脂扩散
检测肠毒素
A3.2从食物检样中提取肠毒素
固体检样100g加入0.2mol/LpH7.5盐水100mL4℃浸泡18～24h，液体检样 100mL+
固体捡样用纱布过滤
液体检样，固体检样，离心8000r/min 20min+
加入三氯甲烷10~15 mL,振荡10 min，静置，奔去三氯甲烷加6mol/L盐酸，调pH至4.5，8000r/min离心弃上清液+
加 5 mol/L氢氧化钠,调 pH至 7. 5,8 000 r/min 20 min+
A4中食品提取肠率素方法
WS/T B0-1996
取上猜液放入透析袋内·浓缩至1～~2mL+
用微玻片法检测肠毒素
取食品样品100g,加入灭菌0.2mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液,均质成匀浆，放冰箱(4℃）浸泡18~24h。用纱布过滤，将滤液离心8000r/min20min，取上清液放入分液漏斗中，加入10mL三氯甲烷，振摇，静置10min，将底层三氯甲烷弃去（如不分层可8000r/min离心20min）。加6mol/L盐酸调pH至4.5.8000r/min离心20min，取上清液，加5mol/L.氢氧化钠，调pH至7.5.离心，取上清液，装人透析袋或玻璃纸内，用电扇吹干或放多聚乙醇浓缩至1～2mI。做微玻片双向琼脂扩散（如用灵敏度高的其他免疫学方法也可不浓缩直接检测），检测肠素。A5菌抹提取肠毒素方法
A5.1液体透析培养法
将宽2.5cm、长80cm的透析袋内装入60mL产毒培养基，两端系紧，将透析袋装入250ml.三角瓶内，加入15mL灭菌生理盐水。透析袋两端留在瓶口，用棉塞塞好，高压灭菌103.43kPa30min。待测的菌株接种营养琼脂斜面（试管18mm×180rmm),37C培养24h，用生理盘水5ml.洗下菌菩，倾入上述培养瓶中，每个菌株种一瓶，37振荡培养48h，振速100次/min。吸出菌液离心8000r/min30min。取上清液加热100℃10min，再离心，8000./min15min。取上清液做双相琼脂扩散。如为阴性，再入透析袋内，用电风扇吹，或用多聚乙二静浓继至1~2功L，再做琼脂扩散。A5.2固体透析培养法
直径150mm的灭菌平血倾入灭菌产毒培养基，约100~120mL，凝固后表面铺灭菌玻璃纸。接种在营养琼脂菌株，放37℃培养24h，用约3mL灭菌盐水，洗下菌苷，倾在玻璃纸上，用灭菌三角棒涂满灭菌平咀，37C培养 48h,加10～20mL灭菌生理盐水.用三角棒刮取菌苔，吸出菌液8000r/min30 min离心,取上清液做双相琼脂扩散，如为阴性，将培养液再装入透析袋内浓缩后再做琼脂扩散。A6双相琼脂扩散检测肠毒素
A6.1微玻片法
将在95%酒精中浸泡的载玻片，用洁净的纱布擦干，吸取溶化的0.2%琼脂糖（蒸馏水配制）滴在载皱片上，使剩余的琼脂糖流下，放入无尘的环境中干燥。先将一层薄塑料板放在载玻片上，然后将袋孔的塑料膜板边缘涂一层薄的硅胶或凡士林，放在塑料板上，两边用橡皮系紧固定，吸取1%琼脂糖，立即从模板中间孔加入载玻片和膜板之间，直至充满琼脂糖。凝固后在中间孔滴加抗血清，四周滴加菌株产毒液或食品提取液，放入加有湿棉球的平血内，放25～30℃，18～24h观察结果。可在灯光上，并对普暗的背景观察，在抗体血清和提取液之间呈现明显流淀线。如沉淀线只能微弱可见时，可进行染色。A6.2玻片法
吸取溶化的1%琼脂糖2.5mL，铺在洁净载玻片上，凝固后用直径2.5mm的金属打孔器打成辐射型，孔距为2.5mm，中心孔加入肠毒紊抗血，周围六个加入菌株或食品的提取液,放平血内，再放一块滴有2/万三氮化钠的湿棉球以保持平血内湿度，置25~30℃、1820h观察结果，在血清和提取物之间有明显沉淀线即为阳性。
染色方法,取下胶带和塑料模板将玻片放在蒸馏水中漫泡药4~8h,在100mL1%乙酸中加入.100ms噻红R（或氨基黑B）1%乙酸、1%甘油+1%乙酸三种溶液依次漫泡10min，如脱色不净，可WS/T 80-1996
继续浸泡。排除多余液体，在案温或35℃温箱烘干，沉淀线被染成染料颜色。A7动物试验检测肠事素
A7.1肠毒紊的制备
将分离菌株的肉汤培养物1～2mL，加入杜尔受培养基上，使菌液平铺于培养基表面（平血不能倒置），置37℃C10%二氧化碳环境（可用密闭红燃烛法产生二氧化碳）中培养72h，于培养基中加入无菌生理盐水10mL，捣碎琼脂使成糜粥状，离心8000r/min30min，取上清液置沸水浴中煮沸30min。A7.2注射前准备
先给幼猫喂少量食物，以便观赛呕吐反应。A7.3动物接种和观察
取上湾液按幼猫体重(生后约 6～8周)1mL/100g量，注射于腹腔内,在注射后4 h如有恶心,呕吐、膜泻体温上升或死亡等现象，同时以未接种菌的培养基上清液接种幼猫作为对照。若对照猫阴性，而实验猫出现反应，即为肠毒素阳性。A8判断标准
如发生争执时以微玻片法为依据。附加说明：
本标摊由卫生部卫生监督司提出。本标准由北京市食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人刘以贤。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
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