本标准规定了尿中亚硫基二乙酸(TDGA)的气相色谱测定方法.本法最低检测浓度为0.25mg/L.本标准适用于接触氯乙烯的工人尿中亚硫基二乙酸的测定. WS/T 63-1996 尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法 WS/T63-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法U)rine-- Delermination of thindigtycolic acid.--Gas chroniatographic method主题内容与适用范围
本标准规定了尿中业硫基二乙酸(TDGA)的气相色谱测定方法。本法低检测浓度为0.25 m/L,本标准适用于接触氯乙烯的丁人尿中严硫基乙峻的测定，2原理bZxz.net
尿样经酸化片蒸至近十,放冷后用中醇-乙醚混合液溶解亚硫基二乙酸.将溶剂浓缩后.用重氮甲烷酯化，然后进行气捐色谱分析，以保阐时间定性，峰高定量。3仪器
3.1气相色谱仪，火焰光度检测器。3.2微量进样器，10μl.
3. 3瓷蒸发M.[0 mI..
3.4刻度离心管，10ml.，事先要进行刻度校正.并经硅烷化处理（经1一9二甲基二氯硅烷甲苯液浸泡，取山晾下再经300℃烘烤3h）。3.5分波漏斗,30ml.。
3.6具支试管（大型气泡采样管外套管）。3.7聚乙烯塑料瓶，10ml.。
3.8尿比重计，
本标准所用试剂除另有说明者外.均为分析纯试剂。4.1实验用水.蒸馏水或具有同等纯度的么离子水，4.2 盐酸,g-1. 19 g/mL。
4.3盐酸溶液，6mol/L
4.4氢氧化钾溶液，400g/L。
4.5甲醇。
4.6乙醚。
甲醇·乙醚混含液（2+1)。
固定相:聚乙一醇20 M,
4. 9 u体:Chroncsprh W AW DMCS,80~100目。4.10二中盐二氮硅烷甲苯溶液，1十9，中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施
4.11证确基中脉，制备方法见附录入：4、12可硫:乙酸,制备方法见附录3,WS/T 63-... 1996
4.13手硫基乙腹标准液：准确称取）m%业硫基乙酸，用单醇济解，在50Ⅱl.容最瓶中用甲醇稀释至刻度。此溶液「mL柑当}【mg亚硫基一乙酸，丁1（冰箱中至少可使用-个月。临用前用乙醛稀释成1ml.析当于10μg亚硫基乙酸的标准应用液。4.14质控样：用加标模拟尿、接融者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样、5采样，运输和贮存
用聚乙烯塑料瓶收集接触氯乙烯的工人班后尿或班前尿样.测比重后安约99+1的比例加入盐酸【4.1)酸化、混勺，于4（:冰箱中可保存两周.分析前将尿液彻底混约。6分析步骤
6.1仪器换作条件
色谱扯：柱长，2m.内径.3mm.玻璃柱。两定液：担体=5·100。
温：180℃，
载气(纯氮）：50 ml./min。
燃气（氢气)：60ml./min，助燃气（空气）：70mL/min，氢/氢：0.23光电倍增臂府压：750V
6.2样品处理
6.2.1取1mL或2mL）尿样于热发血内.加0.1ml.盐酸（4.2）.混匀.用蒸汽加热使样品蒸发至湿结晶状态，随即取下放冷至室温。在不断缆拌下或摇动下沿蒸发IⅢL困周加人0.3ml.（或0.6ml.)甲醇乙醚混合液（4.6），使内容物溶脱血壁，加人3ml.乙醚（4.5）。将上清液移人刻度离心管中，再用少片乙醚（每次2~3ml.）洗落残渣两次，合并醚液，十湿水浴中（约45℃)浓缩至1mL.6.2.2取约200m1g亚硝基甲脲于其支试管中、加0.5~1ml乙醛.试管口处用橡皮寒与分液满斗[内够氢氧化钾溶波（1，3)联接·通入样品管约玻璃滴管用硅橡胶管与支管相接：打开分液溺斗活塞，让氢氧化钾溶液徐徐下滴，此时重氮甲烷气体就巾支管导入样品管底部.使样品发生氮化反应，直至醛液变微黄色为正，再放置109 min，加入1nil.甲醇（4.4）.缅心在温水济上赶走逆剩的重氮用烷和乙.最后体积在室湿下定容为1.0ml.，6.3标准曲线的绘制
取6 支刻度离心管,按下表配制标准管，亚硫基二乙酸标准管的制备
业硫基乙胶标准应用液ml
TDGA含量,ug
以下按6.2.2条的分析步骤操作。取2~~5μl.酯化后的溶液注入色谱仪.测定各管的降高值。1～5臂的峰高值减么专管值后，取其对数为纵坐示，业硫基二乙酸含量为横坐标，绘制标准曲线，6.4样品测定
取按6.2条处理后的2~5叫.样品溶液注人色谱仪，测定峰高值，减去标准空片（0管)的峰高值，从标难曲线或回归方程查出或求出样品中业硫基一乙酸的含。作测定前前以及每测定10次群品后测：次质控样。色谱图见下图。
7计算
WS/T631996
姚亚硫店乙酸尿
尿样色谱图
7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重（1.020)下的浓度校正系数。1. 020 - 1, 000
k=尿实测比重
7.2按式(2)谁算尿中亚硫基二之酸的浓。X=-m-+/V
式中：X----尿中亚硫基-乙酸的浓度,ng.;m由标曲线问归方程计算或查得的业硫基二乙酸含量·μg·V.分析时取尿祥量，ml..
8说明
8.1本法的最低检测浓度为 0.25 mg/1. ;线性范 0.1～10 mg/1.:精密度：10%~5,9%(亚硫基乙酸浓度 2-~6 mg/1.=12);加标收率:88～103%(尿中亚硫基~2Z酸浓度为 2～8 mg/L. ,n=6),8.2火焰光检测器的响应值的对数值与样品浓度的对数值呈直线关系，所以要川双对数坐标纸或将数值先经划数处理片用直角坐标纸作标雄曲线图8.3火焰光.变检测器开机后需要较长时间十能稳定，所以仪器最好241连续运转,间时每天需要作标准曲线和每测1）次样品加一次质控样或标准管进行检查。8.4品不宜完全蒸干乙醛的转移.浓缩，离心管的刻度准确与香以及定容时样液的温度所造放的积影响部是测定误差的重要来源。8.5尿栏的采集时问最好是采班后2～10h的尿.或下：个班前晨尿。因其代谢产物在一般环境中不存在，赦样品受污染的可能性很小。8.6重氮甲烷气体有剧毒.因此定要在通风柜内操作；重氮中烷容易爆炸.应产格按操作步骤进行，实验时应戴防扩眼镜。
8.7质控样使用如标的模拟尿时可考察准确度和精密度,使用接触者尿和加标的正常尿时可专察精密度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中的部分主要成分。WS/T 63 --1996
附录A
亚硝基甲脲的制备
（参考件）
亚硝脂甲脲(Nitrosnethylurea）.分子式：CH,N(NO)CONH书盐酸甲胺和脲制备mi成：A1仪器
圆底龚瓶，109 ml.。
烧杯.500ml
A1.3球形回流冷凝管。
A1.4 电-1 000W.
玻聪搅拌棒
温度计、10℃
抽滤漏斗(p9cm)及抽滤瓶.
A1.8水泵或真空泵。
A1.9熔点测定器。
A2原料
所用原料均为化学纯或为工业品。盐酸甲胺。
绿素。
亚硝酸钠
A2.4冰染。
粗食盐粒、
硫酸，u—l.84g/ml..
A3反应式
CH,NH,C)+NH,CONH,—-CH,NHCONH,-NH,C)CH,nhCONh,+hNO,-Ch,N(nO)(Onh, + h,OA4步骤
在圆底烧瓶中.放人10 g盐酸甲胺,加 40 mI. 水,再加 30 尿素。将烧瓶在电炉上和媛地间流2 h 15 min,再剧烈回流 15 min。将烧瓶放冷至室温。以11 多亚硝酸钠加入反应瓶的溶液巾,然后将反应施冷却至0（左右
用冰盐水将大烧杯四面围，烧杯内60～100多泳块及10g浓硫酸，用玻璃棒在不停地搅拌[。“面将放冷的反应液缓缓有控制地注入（虹吸的办法)盛有硫酸及冰块的烧坏中，其注入速度以烧杯内温度不超过0为准。也可再放适量冰块到烧杯中，以保持烧杯内的反应温度。产品呈色泡沫状浮在液面,抽滤压干,再用 5～10 mL冷水洗一次,再抽干,真空-干燥或阴凉处晾十。沸点123～124C，产率66%--72%
A5注意事项
A5.1本品应冷藏保存，在不太高的温度（盛夏室温）下有时会强烈分解,因此更不能烘烤。WS/T 63-1996
A5.2本品无需进一步精制,抽下后即可使用，不必下燥处理。附录B
亚碱基二乙酸的制备
(参考件）
亚硫基二乙酸是由氟乙酸与硫化钠缩合而成。是制备噻嗪的中问体：B1、 反应式
CICH,COOH-Na,SS(CH2COOH)2
B2仪器
B2.1玻璃三角烧瓶,500 mI.。
B2.2抽滤漏斗(s9cm）及抽滤瓶。B2.3水泵或真空泵。
B2.4熔点测定器。
B2.5玻璃搅棒。
B3试剂
化学纯或工业纯。
#3.1氯乙酸。
碳酸氨钠。
B3.3硫化钠。
B3.4冰块。
B3.5粗粒食盐，
B3.6硫酸·P2o=1.84 g/ml。
B3.7活性炭。
B4反应步骤
将 94. 5 g 氯乙酸放在盛有150 mI，水的兰角烧瓶中,周围用冰盐水致冷·加进84 g碳酸氢钠。将132g无水硫化钠·放进盛有185mL水的烧杯中。温度保持在25～30℃的条件下，将烧杯内的硫化钠水溶液缓慢边搅边倒入上述三角烧瓶的反应液中。让反应液在冰水浴中静置 1 h后，将 75 ml,浓硫酸缓慢注入反应液中，达加边搅动（温度保持在25～30℃）。再用乙醚反复萃取亚硫基二乙酸（最好用流动式连续提取36h）。合并所有萃取的乙醚溶液，将醚蒸干，得粗制品：产率：88%。用200mL水及少量活性炭溶解并煮沸粗制品，过滤，浓缩到约75ml，放冰浴中，析出结晶，再抽滤并压干。用热水反复重结晶几次，就可得到熔点为129℃的白色亚硫基二乙酸精品。B5参考文献
Bankanbus,Preparation of 1,4-thiazine.J. Am. Chem, Soc.,1948,70:684.附加说明：
本标准冉生部卫生盐督司提出。WS/T 63--1996
术标准由北京市劳动卫生职业病防治研究所负责起草。本标准要起草人陈震阳
本标准出卫牛部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释，
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