ICS 65.080 G20 DB41 河南省地方标准 DB41/T 1574-2018 芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定 高效液相色谱法 2018-04-17 发布 河南省质量技术监督局 发布 2018-07-17 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由河南省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河南省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：郭蕊、孙晓霞、丁国涛、侣丽莎、件春、赵海波、鲍春铭。 DB41/T 1574-2018 1 范围 本标准规定了芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定方法。 本标准适用于以芝麻饼为原料，经微生物发酵、加工制成的芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定。 本方法的检出限为：芝麻素 0.02 mg/100g；芝麻林素 0.04 mg/100g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY 525—2012 有机肥料 3 方法提要 试样中芝麻素、芝麻林素经乙醇溶液超声提取，以甲醇+水为流动相，在波长287 nm处使用C18反相高效液相色谱柱进行分离，外标法定量。 4 鉴别试验 本鉴别试验可与芝麻素或芝麻林素含量的测定同时进行。在相同色谱条件下，试样溶液中某色谱峰的保留时间与标样溶液中对应色谱峰的保留时间相对差值在1.5%以内，即可确认试样中含有芝麻素或芝麻林素。 当上述方法存在疑问时，可采用其他有效方法进行鉴别。 5 试剂和材料 芝麻素标样：已知质量分数 ≥ 98.0% 芝麻林素标样：已知质量分数 ≥ 98.0% 甲醇：色谱纯 乙醇：优级纯，8+2溶液 标准储备液：称取0.0100 g（精确至0.0001 g）芝麻素标样于100 mL容量瓶中，加入80 mL乙醇溶液，超声5 min，冷却至室温，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀，得到100 μg/mL芝麻素标准储备液，于4 ℃避光保存。 采用同样方法制备芝麻林素标准储备液，于4 ℃避光保存。 6 仪器和设备 高效液相色谱仪（具紫外或二极管阵列检测器） 色谱数据处理系统或工作站 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm 进样器 滤膜（0.45 μm） 涡旋混匀器 超声波振荡器 离心机 7 标准曲线的制备 7.1 标准溶液制备 分别准确吸取1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL、20.0 mL、40.0 mL芝麻素和芝麻林素标准储备液于100 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀。 得到浓度为1、2、5、10、20、50 μg/mL的混合标准溶液。 7.2 色谱条件 流动相：甲醇+水=80+20，经滤膜过滤并脱气 柱温：室温（波动不大于2℃） 流速：1.0 mL/min 检测波长：287 nm 进样体积：5.0 μL 保留时间：芝麻素约6.0 min，芝麻林素约7.2 min 以上参数可根据仪器适当调整，以获得最佳分离效果（见图1）。 7.3 操作步骤 在上述色谱条件下，待仪器稳定后，对标准溶液进行分析。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程： y = a·x + b 式中： y——色谱峰面积值 x——标准溶液浓度（μg/mL） a——回归曲线斜率 b——回归曲线截距 8 测定 8.1 试样提取液的制备 按NY 525—2012中6.6规定方法制备试样，称取试样0.5 g（精确至0.0001 g），置于10 mL离心管中，加入5 mL乙醇溶液，涡旋混匀，超声提取15 min，以8000 r/min离心6 min，取上清液于10 mL容量瓶中；残渣再加入4 mL乙醇溶液，按同样步骤提取，合并提取液。