DB65/T 3970—2017

新疆维吾尔自治区地方标准

蔬菜和水果中17种植物生长调节剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of 17 plant growth regulators in fruits and vegetables by LC-MS/MS

2017-01-10 发布
2017-02-10 实施
新疆维吾尔自治区质量技术监督局 发布

前言

本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由新疆维吾尔自治区分析测试研究院提出。
本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归口。
本标准起草单位：新疆维吾尔自治区分析测试研究院、新疆维吾尔自治区标准化研究院。
本标准主要起草人：曹雪琴、杨中、宋良辉、陈国通、王爱霞、赵楠、李芳、郑健琨、胡小明、张磊、李统中、杨飞、文娜、罗建民、芦静、战国利。

1 范围

本标准规定了蔬菜和水果中17种植物生长调节剂残留量的液相色谱-串联质谱测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和其他等。
本标准用于蔬菜和水果中矮壮素、氯吡脲、赤霉素、脱落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-苄基嘌呤、噻苯隆、缩节胺17种植物生长调节剂残留量的定量测定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测

3 原理

试样经含1%乙酸的乙腈溶液提取，盐析离心，用C18净化剂和无水硫酸镁净化，液相色谱-串联质谱仪检测蔬菜和水果中17种植物生长调节剂，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 试剂
4.1.1 甲醇：色谱纯。
4.1.2 乙腈：色谱纯。
4.1.3 乙酸铵：优级纯。
4.1.4 甲酸：色谱纯。
4.1.5 冰乙酸。
4.1.6 C18净化剂：粒度40 μm~50 μm。
4.1.7 无水硫酸镁（MgSO4）：550℃烘干2小时。
4.1.8 氯化钠。

4.2 试剂配制
4.2.1 含1%（v/v）乙酸的乙腈溶液：取10 mL冰乙酸（4.1.5），用乙腈（4.1.2）定容至1 L，混匀。
4.2.2 乙酸铵溶液（5 mmol/L）：准确称取0.385 g乙酸铵（4.1.3）溶解于适量水中，定容至1 L，混匀后备用。

4.3 标准品
17种植物生长调节剂标准品（矮壮素、氯吡脲、赤霉素、脱落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-苄基嘌呤、噻苯隆、缩节胺），纯度均≥98%。

4.4 标准溶液配制
4.4.1 标准储备液
分别精密称取17种植物生长调节剂标准品各5.0 mg，用甲醇（4.1.1）溶解并定容至50.0 mL。此标准储备液浓度均为0.100 mg/mL，储存于棕色玻璃瓶中，-20℃下避光保存。
4.4.2 混合标准储备液
吸取17种标准储备液适量，配制混合标准储备液，用甲醇（4.1.1）稀释并定容。根据相关化合物在仪器上的响应差异，将17种植物生长调节剂分成四组，配制相应浓度的混合标准液。其中A组为矮壮素、氯吡脲、多效唑、烯效唑、6-苄基嘌呤、噻苯隆、缩节胺，浓度为200 ng/mL；B组为脱落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、4-氟苯氧乙酸，浓度为2 μg/mL；C组为赤霉素，浓度为5 μg/mL；D组为3-吲哚乙酸、3-吲哚丙酸、3-吲哚丁酸，浓度为20 μg/mL。混合标准储备液于-20℃下避光保存。

5 仪器和设备
5.1 离心机：高速低温离心机，离心转速10000 r/min。
5.2 分析天平：感量0.01 g。
5.3 天平：感量0.0001 g。
5.4 超声波发生器。
5.5 涡旋振荡器。
5.6 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.7 有机微孔滤膜：0.22 μm。
5.8 均质机。

6 分析步骤
6.1 试样的制备
按GB/T 27404规定的方法制备样品，将试样于-20℃贮存备用。

6.2 仪器参考条件
6.2.1 色谱条件
6.2.1.1 色谱柱：Acquity UPLC BEH C18柱，100 mm×2.1 mm（内径），粒径1.7 μm或相当者。
6.2.1.2 流动相：
a) A相：乙腈；
b) B相：5 mmol/L乙酸铵溶液（0.1%甲酸）。
6.2.1.3 柱温：30℃。
6.2.1.4 进样量：5 μL。
6.2.1.5 洗脱程序见表1。

表1 洗脱程序
时间(min) | A相(%) | B相(%) | 流速(mL/min)
0 | 5 | 95 | 0.2
2 | 5 | 95 | 0.2
12 | 70 | 30 | 0.2
14 | 70 | 30 | 0.2
18 | 5 | 95 | 0.2

6.2.2 质谱条件
6.2.2.1 离子源：电喷雾离子源ESI。
6.2.2.2 电离方式：正负离子电离ESI±。
6.2.2.3 监测模式：多离子反应监测MRM。
6.2.2.4 毛细管电压：2.8 kV(+)；2.8 kV(-)。
6.2.2.5 离子源温度：150℃。
6.2.2.6 脱溶剂温度：350℃。
6.2.2.7 脱溶剂气流量：1000 L/h。
6.2.2.8 锥孔气流量：50 L/h。
6.2.2.9 质谱采集参数见表2。

表2 质谱采集参数
化合物 | 电离模式 | 母离子(m/z) | 子离子(m/z) | 碰撞能量(eV) | 锥孔电压(V) | 去溶剂气流量(L/min)*
矮壮素 | ESI+ | 122.1 | 59.0*, 128.0 | 18 | 34 | -
氯吡脲 | ESI- | 275.1 | 91.1, 127.0*, 153.1* | 28 | 22 | -
多效唑 | ESI+ | 294.1 | 98.2, 125.0 | 22 | 22 | -
烯效唑 | ESI+ | 292.1 | 65.0, 102.1* | 10 | 26 | -
6-苄基嘌呤 | ESI+ | 226.1 | 58.1*, 125.1 | 18 | 26 | -
噻苯隆 | ESI+ | 221.0 | 153.1*, 70.0 | 36 | 26 | -
缩节胺 | ESI+ | 114.2 | 44.2*, 113.0 | 22 | 34 | -
脱落酸 | ESI- | 263.2 | 112.9*, 245.1 | 24 | 3 | -
*(注：表2中部分数据如“子离子”、“碰撞能量”等依据OCR文本整理，具体数值对应原文表格列，*表示定量离子)*