ICS11.220
DB34/T3284-2018
安徽省地方标准
猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法
Method of the real-time PCR for the detection of Erysipelothrix rhusiopathiae
2018-12-29 发布
2019-01-29 实施
发布单位：安徽省市场监督管理局

前言
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽农业大学提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、巢湖市畜牧兽医局、卓阳市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所、同济大学。本标准主要起草人：李郁、李雪松、李春芬、张利亚、陈章、黄晓慧、孙裴、姚焱彬、张劲松、高亚飞、孟天恺。

1 范围
本标准规定了猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法的缩略语、试剂和仪器、样品的采集、运输与保存、操作方法。本标准适用于猪组织样品、血样及其细菌培养物中猪丹毒丝菌的实时荧光PCR检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
荧光PCR：荧光聚合酶链式反应
Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环圈数
DNA：脱氧核糖核酸
Taq酶：Taq DNA聚合酶
PBS：磷酸盐缓冲液
Eppendorf管：微量离心管

4 试剂和仪器
4.1 试剂
4.1.1 无水乙醇：-20℃预冷。
4.1.2 75%乙醇：用新开启的无水乙醇和无DNA酶的灭菌双蒸水配制，-20℃预冷。
4.1.3 灭菌双蒸水。
4.1.4 动物组织基因组DNA提取试剂盒。
4.1.5 引物：
——上游引物：5'-GTGGCGCATATAATCCCGTA-3'
——下游引物：5'-GCAAACGCAATGGCTTCT-3'
4.1.6 2X TransTaq™ PCR SuperMix。
4.1.7 Taq酶。
4.1.8 实验用水：应符合 GB/T 6682 中一级水的规格。

4.2 仪器