ICS65.020.01
CCSB05
黑龙江省地方标准
DB23/T3318—2022
元蘑液体菌种生产技术规程
2022-08-22发布
黑龙江省市场监督管理局
2022-09-21实施

前言
DB23/T3318—2022
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意，本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由黑龙江省林业和草原局提出。本文件起草单位：哈尔滨学院、哈尔滨职业技术学院、鹤岗市十八号林场、绥棱国有林场三吉台林场、逊克县林业工作总站、黑龙江省知识产权保护中心。本文件主要起草人：孙婷婷、刘瑞鹏、高静波、赵妍、李贵军、杜鹏禹、张春红、刘增才、李亚伟、耿楠楠。

1 范围
元蘑（Hohenbuehelia serotina）液体菌种生产技术规程
本文件规定了元蘑液体菌种生产的环境条件要求、生产车间的设计、生产仪器和设备、菌种选择、母种制备、摇瓶液体种制备、发酵罐空消、制备发酵罐液体种培养基、发酵罐液体种的接种、发酵罐液体种培养条件、发酵罐液体种检测、发酵罐液体种质量要求和生产档案。本文件适用于元蘑液体菌种生产。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 150.1 压力容器 第1部分：通用要求
GB/T 1921 工业蒸汽锅炉参数系列
GB 5749 生活饮用水卫生标准
GB/T 11165 实验室pH计
GB/T 13554 高效空气过滤器
GB 19153 容积式空气压缩机能效限定值及能效等级
GB 50073 洁净厂房设计规范
NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 环境条件要求
应符合 NY/T 528 的规定。

5 生产车间的设计
应符合 GB 50073 的规定。

6 生产仪器和设备
生产仪器设备要求如下：
a) 液体种发酵罐质量应符合 GB 150.1 的规定；
b) 空气压缩机质量应符合 GB 19153 的规定；
c) 空气过滤器质量应符合 GB/T 13554 的规定；
d) pH 计质量应符合 GB/T 11165 的规定；
e) 蒸汽锅炉质量应符合 GB/T 1921 的规定；
f) 超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、恒温振荡培养箱、冰箱、显微镜、液体菌种接种枪、磅秤、天平应符合 NY/T 528 的规定。

7 菌种选择
选择菌丝生长健壮、产量高、抗逆性强、抗杂菌能力强的菌种。

8 母种制备
8.1 母种培养基的制作
制作马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：装入试管（18mm×180mm或20mm×200mm）中，分装量应为试管长度的1/5～1/4，应使用棉塞或硅胶塞封口，其中棉塞应使用梳棉，不应使用脱脂棉。将试管放入高压蒸汽灭菌锅中，在0.105MPa～0.125MPa下灭菌30min。灭菌后摆放成的斜面培养基顶端应距试管口≥50mm。
8.2 接种与培养
在无菌条件下，用接种钩取黄豆粒大小的初始菌种接种在母种培养基上。母种培养的温度应为22±1℃，空气相对湿度控制在65%～75%，通风、避光培养8d～10d。

9 摇瓶液体种制备
9.1 摇瓶液体种培养基配方
推荐培养基配方：葡萄糖20g、玉米粉10g、酵母粉5g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、水1000mL。水的质量应符合 GB 5749 的规定。
9.2 摇瓶液体种培养基的制作
将配方中的原料充分混合均匀，装入500mL或1000mL、耐126℃高温、无色或近无色的玻璃瓶中，装液量宜为三角瓶体积的1/4，用聚乙烯透气封瓶膜封口。在0.105MPa～0.125MPa下灭菌30min。
9.3 摇瓶液体种的接种与培养
在无菌条件下，用接种铲将1/4~1/3的斜面母种接种到摇瓶培养基中，置于恒温振荡培养箱，在22℃以140r/min振荡培养5d~7d。

10 发酵罐空消
发酵罐初次使用，或出现染菌，或长期放置时，应检查发酵罐上全部阀门和压力表，进行空消。空消时罐内蒸汽压力应控制在0.105MPa~0.125MPa、温度应控制在121℃~124℃，灭菌40min。

11 制备发酵罐液体种培养基
11.1 发酵罐液体种培养基配方
在9.1配方的基础上应加入2.9mL/L的消泡剂（如豆油）。
11.2 初始pH值
pH值为5.5~6.0。
11.3 投料与...