ICS65.020.30 CCSB44 DB44 广东省地 國方标准 DB44/T2337—2021 实验动物 病原菌PCR定性分析 Laboratory animals Qualitative analysis of pathogenic bacteria with polymerase chainreactionmethod 地方标准信息服务平台 2021-10-18发布 广东省市场监督管理局 发布 2022-01-18实施 地方标准信息服务平台 前言 1 2 3 4 5 6 7 8 9 范围 规范性引用文件 术语和定义 缩略语 原理 主要设备和材料 试剂。 方法 结果 10防止交叉污染的措施 附录A（规范性） 附录B（规范性） 参考文献 溶液的配制 引物及探针序列 目 次 DB44/T2337—2021 2 10 13 地方标准信息服务平台 DB44/T2337—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省科学技术厅提出并组织实施。本文件由广东省实验动物标准化技术委员会（GD/TC93）归口。本文件起草单位：广东省实验动物监测所。本文件主要起草人：闵凡贵、潘金春、黄树武、王静、袁文、何丽芳、陈梅玲、张钰、黄韧。地方标准信息服务平台 11 1范围 实验动物病原菌PCR定性分析 本文件规定了实验动物病原菌的PCR定性分析方法。本文件适用于实验动物病原菌核酸定性分析。2规范性引用文件 DB44/T2337—2021 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用手本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14926实验动物微生物检测方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 聚合酶链式反应polymerasechain reaction，PCR体外酶催化合成特异DNA片段的方法，模板DNA先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模字列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的用下以四种dNTP为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片多以几何倍数扩增。3.2 实时荧光聚合酶链式反应 real-timeCR，实时荧光PCR 实时荧光PCR方法是在普通PCR的基础上，在反芯体系中加入特异性荧光探针，利用荧光信号积累实时报告整个PCR进程，通过读取每次循环反应中的荧光发信号，间接反映了PCR扩增的目标基因的量，最后通过扩增曲线对未知模板进行定性或定量分析。3.3 Ct值cyclethreshold 实时荧光PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的盾坏数。4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）EDTA乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid）