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GB/T 2930.7-2001

基本信息

标准号: GB/T 2930.7-2001

中文名称:牧草种子检验规程 种及品种鉴定

标准类别:国家标准(GB)

英文名称: Inspection procedures for forage grass seeds and identification of species and varieties

标准状态:现行

发布日期:2001-03-14

实施日期:2001-06-01

出版语种:简体中文

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下载大小:515435

标准分类号

标准ICS号:农业>>农业和林业>>65.020.20植物栽培

中标分类号:农业、林业>>粮食与饲料作物>>B21种籽与育种

关联标准

替代情况:GB/T 2930-1982

采标情况:ISTA-1999,MOD

出版信息

出版社:中国标准出版社

页数:平装16开, 页数:12, 字数:22000

标准价格:12.0 元

出版日期:2001-06-01

相关单位信息

首发日期:1982-03-11

复审日期:2004-10-14

起草人:王彦荣

起草单位:农业部牧草与草坪种子质量监督检验测试中心

归口单位:中华人民共和国农业部

提出单位:中华人民共和国农业部

发布部门:国家质量技术监督局

主管部门:农业部

标准简介

本标准规定了种及品种的鉴定方法。本标准适用于牧草种子、草坪草种子和饲料作物种子质量检验的种及品种鉴定。 GB/T 2930.7-2001 牧草种子检验规程 种及品种鉴定 GB/T2930.7-2001 标准下载解压密码:www.bzxz.net

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标准内容

IC5 65-020-2U
华人民共和国国家标准
GB/T 2930. 1~-2930. 11—2001牧草种子检验规程
Rules for foragc seed testing2001-03-14发布
2001-06.01实施
国家质量技术选督后发布
GB/T 293G.72001
本尔准是根据国际种了企教协会(1NTA)国际种子差验机19年版)例定政,本标催在植物种收其效整方达等主要收未内容上,举效采用了国际规册(1STA,1999>药第八部分:种及品种鉴定.另外,义纳人了国际划·未列人仙在我曹具有更要慰矫价值且有适宜检验方法的2个道物种,告在使标准概具有国际标准的先进性红科学性,义叫满尺我压种了险跑了化的实际需要本标带元GB/T757C.1~2937.11—2001牧草种子验规程8系列标消之—。该系列标准对心29371932牧草种十检鉴脱程>进行您订,快订后物标准山以下部分组成:GB/T 2030. 1—2001
GB/T 2330.2- 2001
GB/T 29:10. 3—2001
GB/T 2930. 42001
GB/T 280. 5—2001
Ga/r 2950. 6- 2:
3/T 2930.7—21
GB/T2959.8-2931
GB/T 2U0.9—26D1
较生市子粉验题程扫样
牧草种子格验规程
净能分相
收单种了检整规程
牧卓种子检教规程
牧中仲子格验规我
教常有子格将规择
改立种子检验规型
妆苹种子检验见壶
教心种子检验规料
其他粒物子数测定
发试验
生活力*牛韵化学(四理)池定
健床定
及品种鉴定www.bzxz.net
分测定
并证测定
G3/ 296.1:201
牧肯种于检按规挥
GEO—
救常种子检验就我
包衣种子测定
检验圾告
修后的标准弃编写卒出上:与国际现程有有定区别,国际规程将所有性均胃」幸部格验硕山的正文之后而月规程的人部分内率在附件之中,值用对而救写相卫参照,就为不便。面本标准在缩排上将咨项目均作为致立的标泌消写,将主要内容缩在止文之中,并将相关的附球链务尔准的正文之后,本标准附示A、附录验标准的附录。标雄出中毕人民共和农业部提山井出。本标准起单位:农业部收中与萨半萨钟子所盘监哲检验测试心(兰州)。木标准主紫起草人,主彦果,参加出中人处孙生华余冷、资文、卫东学学杰:69
GA/2930.7—20C1
ISTA前
农业工最大的风险之尽遥品部的种子不熊表呢其生产能才。种子骏佐为「在据格前许网种下约质量·使这种风险降到袋低程。种子质早是由不同特性综六正或的态,这些格生对种子产业生产者、加工者、激者、经营考、表民,认证机构以及负资种子管昼的政府机转成部门的小同部门
等极为重要。在所有价况下,检收的垃终的是测定种子的种用价值,冲子是有生命的产品,其状况不像检验光生命或非生物产非博样能准确地了以预测,所采历的方法必额基于种了科学妞识和种子验汇作占经验识累,所要求的净确性和再海性则因核验的日的断定:本规程热定的标准定义和为决可用于国际贸品间的助了质景评定,为此日的、检验方法的尚度准确世和演性卡必领的。当神子交易超超国界时有可能在不同国家的检验实检冷。四此、所有教室采用一的标准方法非常再要,这样可弃光许范用内获得-激的校验结半。本历程分为两部分一一规程正文和附件。规行正文分两述厂各攻月测定的厅的和原则采月的定义以及概述许用的方达和程序。附什部办对定义加以引申,并详述了规理中所规定的程序和方法。如按照本规程检验的结果,需垃投协会的际种丁检验证书,那就必须产攻地遵守规程,对规动项条文的解释应与该查附件中的有关细节相将。出设“个用家在管理国内种了贸易知实施国家种子质阜管案运规时·应尽可能用本见程及其剂件。单然此钟情况并不必采用两际冲下检验证伤,但盛认识到,如累与这学为国际的压所接受的规型和谢件条文不符,将会随每各国间的种子自由流迪:奔询检验(adviaory1r)品一种振送骏者要求,为特殊目的血行种了批价检轻。这种拉验需考诸如橘种的平节、土拨类型和海拨商竞等因索。对于这种检验,本规社和附件仅拟供·个东本的措导,在关文献的其册技术川你为补泌,灯汰。心规程和附牛是为世史卡露作物到定的。尽肾不是每个卵节.但是娠则上危适用于木现恶大提及的其地作勃种类。
另外,对提供是够的皆导,有必要是到专门制造商的仪能设备,促这井不息味筹ISA认为此类设器设备最好,而排障共地制造商的同类产品。6
1范围
中华人民共和国国家标准
牧草种子检验规程
种及品种鉴定
Roles for forage seed testlng-Verificatlon of speckes and cnltivar本标带现定一种性出种的监定方法GB/T 29307-2001
本标准带于收草种子草半革种子和尚料作物疗子质画检验的种及品神整定。2引用标准
下列标准所包的条文,通过在本标准中引用而构或为本标确的条文.本标准出版时.所示版本马为有效。所有标准都会越订,使用木坏的各方皮探讨使用下列物准最新版本的可筐性:GE/T 253C.1--20011
收草肿子检验型托伴
GB/234—2例1牧草种可检验规晕发芽试改B/T817C-1987效值您约见测
3检验目的
及品种药鉴定日的是谢定送验样品成送验婵品所代表和批勺所提及的种或总和为符台程度。4定义
本标准采用下列定义。
4.1钟子真实性eon
供检种及品种与文件记求(如标签管)是否相。4.2品种度vaieyurity
品种在特征特性行面真·教的程座.同本品种的种子数占快检本植物样品种子数拍百分率装示4.3变异袜
一个或多个性状(特征特性)与原品杆官成者所猫控的巨收明显不同的值述。5原则
只有当样品的送验者对装检种或品种三有说明,并只有一个可它较的可靠标准样品时监定才有效。供比较的性状也括形态、生醒,细胞减化学等为而。进行和或品种鉴定时,可用种子,站芭或在空验室、温室养室或出小次中长战的较成熟培殊、随市把种产和标准样品的种子进出轻,将幼劳拍株与同期邻近种相在相同的环境录件下处于同发冷肾最的标准品的纳苗拆独株进行比较。在特情下,如果定的结果确实可信(郊定染色体倍效,不一定安和标准的对照样品作比。国率质量技术监督局201-C3-14批准7n
2001 -06-01实临
GB/2930.7-2002
当种或品种的一个或儿个奖刻性状柜当一致时(例如自化授粉的种),就可对异钟或异品神的种子、幼出或植株进行计整,当种或品种不够一政时(如异花授扮的种),则对明显的变异样进行计数,并别供检样品的再实性作出总本判断,6器具及试剂
6.1器具
检验所用仪器设备方法的差屏而不同6.1.1实验实:适当地配备仪器、器具及试剂以供形态,牛理及潮学的控查,化学定及独子发芽之用。
6.1.2祖室和培举箱:需配备能两节环境杀件内设备,以诱守幼苗成植梯鉴别性状的发育。6.1.3间小区需具有能使累性状正需发育的气候、上观及载错条件,井对前治病害有充分的保护措递:
6-2成剂
典,澳化钾、盐、氯化销、茉酚,氢载化链,融丙烯酰胺整酸电冰法所需仪器及试剂毒见附录人及附录(标堆的附录),7检验程序
7.1送验详品的重地
送验详品的景低蛋底符合表1的规定。表1种及培品种监定的送验样品缺低宜与囍
纯豆属(is野碗豆周tra)、别菊豆属.i).及种子大小类似的其调
大建国(tordaum1使变属1Atrma)网意属>rral及种子大小类似的共他测
蒸属(B>及种了大小类我的其他园新共世局
7.?种于鉴灾
7.2-!证验椎品
限十实验空测定
州此小区效实验室谢定
接G/T230.1一2C01中7.2翁规定分取试验样品,随从成验样品中数取至少4:J拉利于,检验时独讨重象,每个重复不趣过19粒种了,如采用绿法,试始样品的量可适当减少见附录A标准的附录
7.2.2装亲
7.2.2.1形整定
根据种子形态特征酱定种及品种时.如有必要,可错助救大然进行现穿:测定种子色择时,可在自您光减特定光谱(如被长为3的紫外灯)下见赛:大幸属展有效的鉴定特征籽粒形状,外释部、籽粒颜色、膜沟基利、胆决就度、小秘轴萨毛多少、背脉纹齿状突起、内外释增被、解被形状及节毛稀密学,瓶属的籽粒甄色是有效特征,可分类自色、求黄色、思色等。兼麦属人去粒款色可在馨外光下加以区例,妇片色煎主钟了显现炭光,黄白煎麦种了不显现荧光
GB/T 2930.7—20C1
豌豆石和两常豆同植物种在种了航色、人小汇形状上车替可供鉴别的些异,可在日光或紫外光下按用岗眼进行戏亲。
7.2.2.2化学副定
化学测余通带品估期莱种特别的化学试剂与种子特有成分反应来鉴定品种:7.2.2.2.1羽座豆同摘物藏测定
羽两豆底种了中足乔含有生物减是一积种问鉴别转征。先将种子放人水中授24b然后将年粒种了切一薄片置于或璃版上以:色行质,加1.~%L.2nl搭液(卢女皱:将0.39碘(1和0.6g典化许K落-而水中1若拓片产生棕红色流淀,即表明含生物磁,记求冬或不个生物轻了数:
7.2.2.2.2磁表盐醛HC:测究
半对惩忘和产荧光定有还题时·特龙对经处亚或恶劣气反条牛下收获的程子,则可用盐酸筛被测途,
尚于说人教溶液(1件盐酸整和4份热馆水制成中61带内种子于诺纸上使其口然风T1h,根据踪海色或黄色迹行容定。7.2.2.2-3燕表<.t)大支(1./)黑友单(1.)和普通早购来raes等种子的苯鞘现亲
权超种子内外释染色将定大左,批和需中种了。采用纸上法,预湿1824,将种子移人经1.%举游微g结品石碳酸5莱馅水)湿润的滤纸上,率组下运行处理,表25大支11,黑爱草和普通早激未2卜,校和记录颜色皮店,与标准样品进比些,瓶带期色分为不荐色,茂帮色、档色、深档色,黑遇色和黑色。7.2.3鉴定互和黑变草品种的聚丙联啦咬月泳(PAGE)的标准存照力达见对录A(标准的附录)7.2.4鉴定效友品神的聚丙烯酰胺胶电球(PAGF)的标准参照克法见附录B(标准的附录):7.3动前监定
7.3.1室监评品
按B/T2930.1」中V.2规定分取试验拌1从试验样已隧机激取单少433粒种子.4次重,每个玉复10粒种子.划作案他体倍散的切始测定,用1核:当初奶整定不能得出续论时,须再取10%粒种子进行整定:
将税子置于造宜发监床上萌发:当缺芭达急适当的非长阶时,好全部战分南还行鉴定·有的需进一步处理-有第可直按鉴在,兰测定染色体倍数时,切并报火或或他洲脂在显改统下进行将定7.3.2.1采件类
有此记检可根据共斗韵献色分类.将升子放在垫有测南纸培养厂里有发.当财脂发青达到适当阶段时,鉴定劳销的颜包,其必异片可以从源色乳载色,可卫1头摄化钠或带醒蒂液混消纸使其加深期色,或在器定游果燃外光黑射菌!~21。7.3.2.2照表本两(Loiumr)
大部分多花需走中「.2品种的大多效效程迹在紫外光下显现炎光,而大部分多年器去草(效比品种的大梦数游苗根变不显现炭力.为了测定幼击根逆对费外充的反业,川将种子效在台适的无荧光的广色湿润泄航「,在20/C变制或20.切酬.照暗或光不超0[×>条件下情发,种丁分开排列,以防止报切瓦链烧使显现炎光的板迹混销不清,你神子采用预左冷渐1见G3门1290.12331中表1的规定)方洗进行处军,当根系发到定够度(效品根速产牛的求光都能载检在出来!即可在紫外光灯下进行鉴定。为有清伸人纸层内的根有无荧光.须将不是现光的韧当从滤渠工取出.记较每互型显现炎光及无炭完的劲苗数及正常效苗数,系结果用恪数填:收。3-2-3单(eu)
Br 293C.7—2001
紫羊)和单)用与黑家其同和同的法迹行鉴别,在含有氧的气中其根深本身会发出荧光。在紫外光版岛下,禁工艺根最现黄绿色的炭光,而茅求则显现蓝绿色荧光,种了可接?.2.2现定的黑发草低方伙行表苯,当动芦死分发自后·便川让行将定,鉴宗前可月0.氢氧化铵(NHOH收1.mT.浓HH,加.热福水喷施幼苗工,1后1需外下进行将亲,证总重友尽纯贵限色或业等色卖光的动尚效。7.4温实或增养室的拉样签定
7.4.1诚监师#
地据冲一量要充足以保证能长放1株单权,们掌象的或代包的数风耳成少,种子接G52!50.1一2中,2的是收将。
7.4.2鉴定
种了准种丁适宣的容器内,并保持在对监别性状发育所需要节环境条件,当抹认到适当的发有阶招比,现记载个情株的正性状,7.5王间小区拉株将定
送验栏品改后,要尽悦通中
每个十品至心播种两个单复小区。为避免失收,重做适当布带不同决成向·田资不同位百小区人小要服为准确鉴定提供足够的植袜.摘钟式可采取条插,兵存足够的行,恢放离,双使所恶整运的4状能允分发有一般建议收草行长的15\,行臣关33二m,减少缺摘和间古可能引起的误差,应调窄搭员使民验文和对购区我长激大钓相等,必要时可呆取间前变补萨办达。当适过专查单长就能区别做一或显多的品种时,则应用穴挡,三4实龄牢或温率通种子分开种,也获得单袜,当已长学通当大小,即改找到口间小风。如条件适宜种子日直接插在小区,以后可通过间是使其成单株状查:年粒袜的尚所至少这.间吃应钟标准件品的单来以作对比,恢数必收决工资次数和新用统计处具,不和植株需经位全生育期小能充分表型出费异,匹此,将宗工冶应延绿到格个生向时期。但从并花,点科改)或抽模(不本科牧草)开始五生有终期是举定样品的展好时期,此期间对变带进行数次现器。孔可名出龙为于另外品种或和书植株!实者变欠与血计激和记载,如有可能最好在离定立课的叫时·实除计算或占算小区内的株效,8结果计算和表示
当将定的制子,动南或植袜效公率下2时.用所发现的变教凸供验格战数的整效召分牢支示:如具多」?3,则百分率取位小数:数值惨约G出/8.7的规定进行.在实验不,盘室改养室所洲定的的果项注受检神子微,幼带激或功球数。8.1结节
算紧是种或品种的种子(的尚)他种成种的种于(效芭)占其试种户(划肖)的分率,B.2H小区装实
5有可能,应分别!算川发我的式他种,品种成变恢效占临定梯数的可办率。对准行条插的牧,当难以忙计所区中些定生换的总数时,其站乐川用据种显单中新产作的变所快数表示
如果性状是整运测量的还可克出平效和其间统效值:开花假粉的品种,道板恢补状的变导达判班以础确地确宗齐种异再相快的是能:北种消况“,在填务我杂株6分和的计3结只,补:临关供格群品真实生状的运与评语。在特殊情况下,如求未设对照样品时应激以注虑A1原理
GB/T2930./—2001
附录4
(标准的阴录)
整定瞻豆和黑去革显种的舜丙酰胺凝胶电泳(PAGE\的标准参方法白单粒就豆种子或照左草种子扭粉小提序的于蛋质,轻S十二烷点统醛销处现后可在不注读的鸡聚两塔酰腾凝政电冰过程中得到分离,政片工的蛋房质消带类型即能去现出品升特征A2器具及试别
A2.1收器改备
a)任何适宜的直电球设备(划PhrnariGE2/4ial\Preten:b离心机、离心督,
c) 大平(0.001 g);
l1粉碎机或缺密机:
e)水俗钢
水家式润条,高变干样带
5)不同规格的修肾,举量进择器,试不版,烧林,穿量税:集烧相,滴告、培养血,危射器25及针头等,
A2.2试剂
所有化学试剂都应宠分析纯额或讯步的慈级:丙烯既胺(经专门纯化用于电球)亚甲基双内烯股(经专门纯化后市于电漆BISI:二轻甲基数基甲烷(Tre):
盐酸;
烷基硫酸钠s
两二醇;
2-随基呼;
二基胶(DMF);
过疏酸(.4FS或核黄索):
NNNN-甲苯Z一胺TFME):
冰酸;
三底2酸(TCA)
PAGE蓝-9或PAGF蓝3A,成任何料当于“马斯充蓝必R系列染拉的试剂!漠蓝.
A2.3资谈
42.3.T主体分离服级穿泌
1mol/.TrisHCl,pHI.:121.1Tis落解丁约75ml.蒸馅水宁.滴加1mril/L盘酸游液调节pH值卒5.B(1mol/1.迹转约为每升蒸水中含9UmL.盐酸综绒,滴川这种培液药:5mt.),然尽定容至「L,在效上4C下
A2.3.2浓渐胺级冲滚液
GE/T2930.72001
1ml/T.Tris-[TCl,pT1i.K:30.3gTris游辉于约2CCmJ.燃踏水中,用盐酸带滚调节pII值至i.8升始滴止酸原夜约Bm1.之后再H1mol/.热塑落疫证洲),然后定奔至250ml.存放十4心.A2.3.35LIS书减
USDS溶蒸馅水中【解时需如温利轻操】,定容至1Mm1比薇可室祖下打放,刻采出现析出,可精源便其重新帮解。
42.3.41过疏镀渐液
\.1g过袜单铵落解」1Um1.满密水中,此激必短在年次使用前新配。42.3.5样品提取级冲原微
在12.:al.浓维胶额冲宗A.2.2>中加人20ral.-降.21.1L蒸销水gSDS和12ng强附蓝也不疫前蓝)浪台均与片室温存效,如出现析出:川拍品使其重新幕解。A2.3.6标胶定液
在10醇中人冰乙酸1(心mL用蒸饱水定至1「.。势块效片约需20计,可用二代冰乙聚,二氧乙酸的效然搭空做在15%205之同(的2.3)A2.3.7密胶染色
:15贤-氯乙酸(TCA375TCA用水配游至2.5L1PAGE蓝或同类试剂甲率施g成剂溶十100ml.日)
个号滋mL加多液[L可染一块胶片。A3程序
一股母人样品测定1叫粒神子,妇要求更竹确增估测品种纯性,则带酒定较多的种子品,好果足仅同标准值比较:行续测定则可只制定=拉种于,如果仅剂种子批中某一主要成分的一放性作筛单该准:则可彻定少于的粒的种子,对丁需臣,迪常是分齿按大量种了的群伴样品笔天态数情说下,于测定种子过的一数怪而不许出于格测两个或史多品筛的混夺种子,A3.1样品提取
A3.1.1豆
用电动粉碎机(也可以采用酬球或紫期段各渐单料种的十叶打碎成细新。释的扭圾线冲液用下述方法配制:17份最冲原液(则A2.3.5):3份须草乙醇140份热衡水.只配足当大所用量,
组份与称释的表级冲液改4g:1.l.比例放人1.5m「.的登乙烯离心誉中提取,室祖下改约1上,用转动范和器使细重新量浮,并在水浴中加热Um离心营盖时角一条小键,以免哲内方升高?,冷却斤于100×条件下离心5m收请激的上清凌用十电冰A3. 1. ?黑去中
用谨式磁磨机(起可以采用滚刀啦啡扮碎机或其他划择式碎机将1.5.~.0种于最磨社后用于分析,稀择的提取绥户液可用下述办法死制:17份提取慢惊滋15份需乙醇::0份一净基甲配:17份效增水。一般只配起当天所用。种子粗粉与稀举拟取级冲以mg;1.0m:坂。其后续处理方诺完会与A3.1.1科同.43.7解收制备
根抛电涂设备的结构利类型安装好循沾下净的胶长.如果电述装胃是采用粘贴式密过系,叫以至提前一大专装股慎为好,这可快曾时条贴传更方分史紧密。建议腔厚度以1.5而或更薄为好:下而介组制备12.5关内通做股旅度的分离脏知5%达缩胺方法,43-2.1半保分离收
ER/2930.7—7001
饮制备4块宽效180m>1/(mr×1.nm需用下述致量的率度:=F.4mT.ml/.Tris1CH 3,8的线冲率商(A2.3.1)M:.25mL额腔碎港(19.6g内满软安-U.26BIS,用速留水定容至i:L十拍气积中去微单的家气,然后人3.751.14P(A2..41F.5l。10KS(A2.3.3和7EmLTEME1白拨取用重浪),小心视到展成范述)后.胶装悦人胺蕊,也可用25的注射账泄胶。股液港注举民页部3~4处这部分每片干和策输收。在丰伟分离胶上部注人界的益馅永(或风再然后静性1象含(约1).注,案抽气略达一步找用客向的AFS济净[即3.L的ASG.AS群10mL通水
A3.2.2浓缔胶
用吸智醛大分离胶表而的水(或升丙醇!.产用希的液缩胺额冲液:特浓端胶短冲凝蒸幅水资1:8比例轻秘:单外洗,小心例去稀整液,再月沉吸下,微制备4份米缩胶需用下述数让的密液: 1 /,-C1 pH6,的经冲济范A2. 3. 267.2mT.凝胶济微(1.0g以与情要加0.57长bS用案增本宗穿车67.2m)瓶中气,然人3.9m:S(见A.2.4%$1见3.3.3和50mLFME1自诺取用原液)。微滑段到在胶漠中的工部,插人用内好制成他统了,确保梳当下方尤气,浪,然后空让其案合约1 )。同样,划果采用效高港度的APS深设[3. 证 2%的AI(C.2 APS游可mf.然溜水中>则可省大指这一环节,对干液端胶的案今反成,川以用%核长素整液表代S,晚浪效在一最光线下公发生台,拍敬其要食良好,需用蒙外灯。辅切的用量需经减验米决定.要求m内完成聚合。控范5ml.救液准台浓加7.5mlL核黄求落液.A3.3电球
电添餐液或叫电摄级冲液的证成务3.014.!效1.1SS。用落馅术定奔率1工(或计两要稍作加温以济降S,注电泌语的上种和下种中例人足够量内也极经护戒新配
击凌靠胶工拨出梳子(此相当稀软),形成为小冲冲洗后江入让药电接微冲商-出迹样器将样加人小(吓打品中,进降本的多少上要出成胶度报样品格人小采次定,人多效博下5~较为宜。如采滤整,可人5比了%的激谢监解激含%的医二醇:于各样品中作为扫剂可预克限入报取缓冲通微!A3.中1果路模原为用站景率时,此时将下底书条圾节,用中援援冲滚将详品描充满(需小心,不要使样品液烷动)。难胶放置于儿热描中,产始丹块股先用25的电流电冰,当前沿指示剂江移1策编胶斤电流加学5A,直单流款游指示剂动移到费收底部,温废应保持在1--20<范用,电股经冲滴三出口来水求冷效行循环冷:43.4因定与染色
有数护不间的方偿可用来周定和实色室白质,如无需立前得凹采,在儿冰站束后认胶模中取出避胶或在固定浓见A2.3.中井爱至少1h,排用恭增水漂洗5iu.然放来色准(见42.3.中至少上通常钱),将集色后的安用蒸馏水深决23h(好具址题色较深可人TA),然后密封于案7势袋中,供格查或拍照,虹用密对行当,凝胶可于下保行十可。如需快使染生凝腔可放在较高能满)下周定利激色m然乌冷印,数人1心添乙酸和35外2翼品溶游中脱年30~6iu其带加据动。44毕果些定
通常果用出较方达,比较样品录白质并制类型造否与标难对温品种的相一:成在册来腔产都配加一个山知群品作为对照·该对服品种应具有愉定的或白质微带及共详尽措速,刻对照品钟的诺节Y6
GB/T 2930. 2001
减可,可作步该胶片的定性标准,范胶过行价析比较,整实种了其实格及距种独发,此外,由实块股片中帮有,已知分了互量第标准蛋,不州的胶产可以低其得到校境,并1算出举当主尝重户质谱带的分子再址。
附录R
(标准的对球)
鉴定蒸走品种的骤丙爆酰嵌随腔电课(PAGE)的标准替照方法B1原理
从种子中拟出来均解蛋白或之二醇路蛋初级谦法亚口?可月[I3.2的聚丙烯酷胺凝胶电泳(PA心E)进行分离,所产生的蛋口诺带可作为品种的“指效,这补港效街用来鉴定术判品种,井通过分新单粒种十米测定品护能混杂程盘(即对品种进行餐)爱推详测实品为10检种了。如要求非常准确地洲定品种纯度,则较大样品效。则仪同标准值比较或仅对冲十他中蒸一主要分的致性作龄单的核对,则可只测定5粒种了12位器设备及试剂
R2.1仅器设备
采的实器设务与鉴定离属相向见附录A(标准的时录)1:B2.2试剂
所有化学试剂都应是分析纯级.此更好等数,内烯融胶(经专门件化后用二电录):业净基农丙培经胺(经专纯化行于电实)冰酷酸:
H氨酸:
有平烤:
抗坏二酸;
过载化
您宁G(或焦宁士);
年之腔:
乙醇:
中醇:
考马斯元蓝G250或raBlueG(或同类试剂).B2.3液
B2.3.1投取液
在乙二醇液融求的比例为75:25(/)中加点(或益Y)(0.05%W种:的康紊1w低温保存或新配
B2.3.2电板冲溶液
冰酸4.小点酸,·无离子水定容至1低温保存,B2.3.3斑胺纽冲溶液
冰酷酸ml氧酸,,均离一水定弃率1低温保存D2.3.4定染色液
GB/T+2930.7-2001
把考马斯亮蓝G0或SerBlueG1p.同类荆18、甲醇250ml.和三氧艺酸100R容丁80G血L无离F水中
B3程序
B3.1样品提取
除去内,外件,用手钳夹碎样品,用研游或电动碎将样品打碎成细。细效入1.5m的索乙烯离心皆中换取:加人拖取减(见A.2.3.1)1U.【TLL桁率种子),将细粉和提取渡充分准合,于空温下放置2b或一夜,下14093×条件下离心15min,取清微的上滑液用!电冰,33.2凝胶制备
根带设备的结构和类车安装好清沾干净放液膜,半先用群处理我境板,可使电泳活的爵胶穿易到离。胶碟可以固定在塑料支架土,这样就可以在灌股时保持任凝眩。制备两块疑胶(1mm×10mm×1.5mm)的办法如下:取凝获级冲滤6L入13.5内烯酰胺,0.1g亚中基双内烯鼠,6g床亲,0.1g环血峻.0.005g流酸亚头,摇勾后再用凝胶缓冲减定奔率100ml.如人新配的0.6%(V/V)的过氧化暂落镀(每150ml概胶溶滋加0.2ml.),快速漏向后倒人胶碟.在加人过氧化氢落液之前,疑胶可先冷却至冰点:案合前在政膜上方描人丙感酸择品梳,以使在凝胶上部形放样品惜。
凝胶润合液应充满腔膜,或在胶确上面加一层术以保觀胺药上表而案合良好。颜胶的案合在510min内完成。
从已暴合凝效上取出作品梳,在样品把中人电受凝冲技,下适整的婴油落滋依所使用的仪器而定)注人电概.分别将18L样品报取液加人各样品中,胺模放人电泳措内·卡保证样品格中充满电极经冲兼,然后进行电泳,所需时间为:2CCV(稳后)1min,50)V(稳正】2Urmn,以使前范指示例燃宁G通过额股的用水循环流过织冲获措内的冷中臂,以保持温度在15~2℃,3.4定和染色
从电添牌中取出胶膜.拆开,然后将胶片效人凹盛有200固定知策色液的塑料盒中。染色在1d内即可完成。经适当染色间,政出胺膜在热通水中漂洗2~%上,以更使染色部位济晰,然后进行拍照,既胶片上务种蓝色背策可用1心关三氯乙翻洗去,叫蒸麦醇溶画白谱带的定名和鉴定最好的方法是比较方法,即比较源左的·个未如样品的白质诺带的轮渐外形与提取前可靠的照样品是否一致,同对切以分析,对1丧醉溶蛋白国际上没·有统一的命名体判,而且蒸的白谱带接顶序记数或者则定它们的相刘迁移率。78
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