本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法--生物法。本标准适用于软体动物贝类可食部份中麻痹性贝类毒素(PSP)的测定，其他贝类食品中PSP的测定可参照执行。 SC/T 3023-2004 无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法 SC/T3023-2004 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.050
中华人民共和国水产行业标准
SC/T3023—2004
麻痹性贝类毒素的测定
生物法
Bioassay
Determination of paralysis shellfish poison I2004-01-07发布
2004-03-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T 3023—2004
本标准参考了美国公职分析化学家协会《公定分析方法》（AOAC，1995年版）中959.08《麻痹性贝类毒素生物法》
本标推的附录A、附录1)为资料性附录，附录B、附录C为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出：本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所，本标催主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、陈业翟、冷凯良、将攻。1范围
麻性贝类毒素的測定
生物法
本标准规定了嘛性贝类毒素(PSP)的测楚方法一生物法。
SC/T 3023—2004
本标准适用丁软体动物员类可食部分中麻性贝类毒素(PSP)的测定，其他贝类食品中FSP的測定可参照执行。
2原理
根据小鼠注射贝类抛取液后的死广时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每100贝肉内的PSP的含量。所测定结果代表存在丁成肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒索的总量：3定义
下列定义适用于本标准。
风单位mouse wnit,MU
对体重为20多的小腹腔注射1mL麻痹性贝类素后,小鼠在15nin时死所需的最低再素量。4试剂
4.1盐酸溶液：0.1mml/1.
4.2盐酸溶液：5mol/L
4.3氢氟化钠辫液：0.1mo/.
4.4麻痹性贝类毒素(Saxiroxin)标准溶液：100 u/ml.,经酸化，含有20%的乙醇作为保护剂,冷藏保存，尤限期稳定
5仪器和设备
5.1均质。
5.2天平（感量0.1g）
5.3离心机。
5.4pH计。
5.5秒表，
5.6玻璃：烧杯、量筒、窄量瓶、搅拌棒等5.7注射器:1 tzl.c
5.8注器针头：8”，
5.9小鼠：体重为19~21的健康ICR系雄性小鼠，若休重<19或>21，查表C.1的校正系数便可得到实际的死亡时间、体重>23只或用过的小鼠则不能使用，6ICR系小鼠毒性单位的确定
6.1PSP 工作标准溶液
用移液管取100/nSexitrxin标雅液1m丁100rL容最瓶中,加人而盐酸酸化至pH为3的蒸馏SC/T 3023—2004
水并定容，该被为1g/mLSaxitnxin标准液，pH在2.0~4.0之间，在3℃~4C条件下能稳定数周。6.2测定用标准溶液
分别用10L、15mL、20mL、25mL和30mL水稀释10mL浓度为1g/mL的Saxitoxin标雁液，稀释液的pH应为2~4。
6.3中值死亡时间的标准液选择
6.3.1将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小鼠数只，选择中值死亡时间为5min~7 mim的浓度。如某浓度稀释液已达到要求,还需以1 ml水的增减量进行补充稀释试验。例如：用25mL水稀释的10mL标准液在5min~7min杀死小鼠，还需进行24mL+10mL和26ml.+10 ml的稀释度的试验。
6.3.2先将小鼠称重（精确到（.5g）,以10个小鼠为一组。用中值死亡时间在5min--7mm内的各种浓度的标准稀释液两份（最好是一份）注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射宪毕至停止吸的所需死产时间。
6.3.3记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s记为55,8记为10s（见附录B)。6.4毒素转换系数(CF)的计算
6.4.1小鼠中值死亡时间的选择
若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间<5in或>7min测弃去该组结果；若汇射另-浓度标准稀释孩的10只小限值死亡时何在5min~7min，即使个别小鼠死凸时间<5tin或>7Is1i1,证应使该的数据：但是若注射某浓度标准稀释液后，1只小鼠中有3只以「存活，则要另取只小鼠逆行重复试验。
6.4.2校正鼠单位（4）
根据注射毒素后中值死亡附间为5min~7mil的10只小鼠的个别死亡时间，山附录B分别查出鼠单位（M),再出附录C查出小鼠的重量较正因子（）每毫升标准稀液的校正鼠单位（A)按公式（1）计算。
式中：
A校正鼠单位（MU)：
M——鼠单位(MU):
—小鼠的重量校正因了。
6.4.3毒素转换系数(F)
前素转换系数(F)按公式(2)计算F-C/A
武卡：
F —-毒素转换系数;
：每堂功实际素含最(路 SAX/mL)A.-校正鼠单位(MU)
6.4.4计算每组10只小鼠的平均毒索转换系数值（7），再计算各组间的平均毒素转换系数值（F），并以此为标准做滑规检测。
6.5毒素转换系数(F)值的定期检查6.5.1如PSP检测间隔时间较长，每次测定时要用适当的标准稀释液注射5只小鼠，重新测定F值如果展有几次检测，则用中值死亡时问5min～7min的标准稀释液每周检查一饮，测得的F值应在原测定F值的土20%范围内。
6.5.2若结果不符，用同样的标滩稀释液另外注射5只小鼠，综合先前注射的5只小鼠结果，算出了SC/T3023—2004
值。并用同样的标准稀释液注射第二组11）只小鼠，将第一组求出的了值和第一组的值进行平均，即为。·个新的F值。
6.5.3重复检查的示值通常在原结果的土20%之内，若经常发现有较火偏差.在进行常规检测前应调查该方法中是否存在末控制或术意识到的变因素。7样品的测定
7.1检样的制备
7.1.1牡蛎、蛤及贻贝
周清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割被肉体。收集贝肉沥水5tin（避免贝肉堆积），捡出碎壳等杂物，将贝肉均质。开壳前不能加热或用麻醉剂。
7.1.2 扇贝
敢可食部分(闭荒肌)用作捡测。沥十及均质过程同7.1,1的规定，7.1.3贝类罐头
将罐内所有内容物(包括贝肉组织及汁液)于均质器中均质。大容量的槿头，则过滤分离贝肉及注液，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质。7.1.4 冷冻贝类
在室温下，便冷冻的样品（带充或脱壳的)呈半冷冻状态，按7.1.1规定的方法清洗、开壳、淋洗、取肉、均质。
7.2握取
7.2.1取100g按7.1处理的样品于800mL烧杯中，加0.1mal/L.IICl溶液100m1.充分搅拌，检查pHpH应为2.0~4.0）。需要时，可逐滴加入5mol/HCl溶液或0.1mol/LNaOH溶液谢整lI.划碱时速度要慢，尚时需不断搅拌，防止局部藏化被坏毒素。7.2.2将混合物加热，并徐徐点沸5min，冷却至空温，调节pH至2.~4.0（切勿>4.5）。将混合物移至量简中并稀释至200ml
7.2.3将混合物倒回烧杯，搅举至均质状，使片沉降至上清液呈半透明状，不能堵睾注射针头即可，必要时将混合物或上清以3000t/min离心5min，或用滤纸过滤，保留进行小鼠注射用的起最液体。7.3小鼠试验
7.3.1以感量为0.1的大平将小鼠称重并记录重是。每个样品注射3！小鼠，7.3.2对每只试验小鼠腹腔注射1ml.提取液。注射时若有一滴以上提取液出，须将该只小鼠丢弃，并重新莊射·只小鼠。
7.3.3记录注射完毕时间，存细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时问（到小鼠呼出最后一口气止)。
7.3.4若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间大于7mir1,测需再注射至3！小鼠以确定样品的毒力。
7.3.5若小鼠的死时叫小于5min，刚要稀释样品提取液届，再注射男一组小鼠（3只），得到5min~7inin的死亡时间：稀释提取液时，要逐滴加人.1nel/L或0.(1mal/.IKCl溶液，调节vH至2.～4.08结果的计算与判断
8.1毒力的计算
8.1.1根据小鼠的死亡时间，在附录3中查出相应的每毫升注射液的鼠单位数M，将存活鼠的死时SC/T3023—2004
前视为人于60min邮相当于<0.875M8.1.2著试验动物重<19g或>21g,则根据附录C查出重量校正系数。8.1.3样品中PSP的含量按公式（3)计算X
式中:
xDX200
X样品中PSP含最，每克样品中鼠单位（MUI/I100g）：.每只小鼠的重量校正系数
M每只小鼠的鼠单位数,鼠单馆(MU)：1）——样品提瑕液的稀释倍数：2001——样品量,克(g),
8.2毒力单位转换
样品中的导力单位按公式(4)计算，F ×80 mg/100 g- 400 ML:/100 g武：
F—毒素转换系数；
80g/100g—样品FsF限量（/100g)；400MU/I00g样品中PSP限量（Mt:/100g）：(3)
附录Ａ
（资料性附录】
麻痹性贝类毒紊标准物质的浓度及毒性A，1加拿大海详研究所麻痹性贝类毒素标准物质的浓度A.1.1石房始毒素(STX)的浓度：140/milA.1.2新石房蛤毒素（Neo)的浓度：140/mlmA.1.3膝沟藻毒素1(GrEx-1)的浓度：74rg/ml.。A.1.4藤沟藻素2(GTX2)的浓度：120/mL。A.1.5藤沟藻毒素3(GX-3)的浓度：29μg/mLA.1.6膝沟藻毒素4(GTX-4)的浓度：32g/mt。SC/T3023—2004
以 6种毒案分别存于 4 个安靓瓶中,每个安颜有0.2 ml.溶解于0. 1 mol/.醋酸的各种毒索标滩。
A.2麻痹性贝类霉素各成分的毒性强度麻痹性贝类毒索各成分的毒性强度见表A.1。表 A.1麻痹性贝类毒素各成分的毒性强度成
Saxioxin
Nacsnxitoxin
GFX-S(B1)
GTX-6(E2
de-srx
dr-Nen
dc-GIX-1
de-GTX-2
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de-GIX-4
树于-SEX的毒性
SC/T 3023—2004
时间”
： J5
： 20
： 05
附录B
（规范性附录】
麻痹性贝类毒素死亡时间一鼠单位的关系表B.1麻瘦性贝类霉素死亡时间一鼠单位的关系鼠单位
时间“
4：:00
： 15
： 4h
： 05
： 20
鼠单位
： 30
10：00
： 30
11：00
鼠单位
时间·
以分秒表示。
鼠单位
表B.1(续)
鼠单位
时问+
SC/T 3023—2004
鼠单位
SC./T 3023--2004
附录C
【规范性附录】
小鼠体重校正表
表 C.1小鼠体重校正表
小鼠的重重校正因手（）
附录力
（资料性附录）
本标准与A0AC:959.08：1995方法的技术差异及原因SC/T 3023--2004
表D.1为本标准与美国公职分析化学家协会《公定分析方法》（A0A1995年版）中959.08《麻痹性贝类毒素生物法》方法的技术差异及原因一览表：表D.1本标准与A0AC 959.08的技术差异及原因本辣准的章条
封面，崩言、标准的全义
6章8章
6.8章中的公式
技术性差异
原方法标准的格式与比完全不同文学叙述中有郭分改动，将原文中的人段文字修议为逐案叙述
对标等甲的计算公式的格式进了簡化，用字母我替具体的内容
增加了对冷冻贝类栏减的制备
将原标准中“当最终样品中含有的PSH>80 Hg/100g或PSP>400 M/
100时,测此贝类产品不适合人类良用。的规定取消，改为“毒力转换单,以公式计算,上× S0 /100 -
4MM/100g
式中-毒素转换系数
标准格式采用GB/[1.1—2000的规定按GB/71.1—2000的婴求,将标准条文细化,使其更有翌辑性、更有条理,使用便捷
公试的格式采用GB/T1.1—2(0M)的规定,处可标准使用者计算数据
冷殊贝类尺贝类中的·大类产品，对此类产品的划定，能规危标附使用者的操作过差
四为此规定不爬木标准的范畴,另有产品标准或安全限基标准对此规定,本标准中出这两种幸力不同表示单位之间的关系，便于计草、转换
0品中限量
: 200 MU/100 g
样品中PS限蛋,
(MJ/100 g)
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