DB65/T3951—2016
水质多种药物残留量的测定 液相色谱串联质谱法
2016-11-10发布
2016-12-10实施
新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布

前言
DB65/T3951—2016
本标准依据GB/T1.1-2009《标准化与标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的起草规则制定。本标准由新疆维吾尔自治区分析测试中心提出，由新疆维吾尔自治区科技厅归口。本标准起草单位：新疆维吾尔自治区分析测试中心、新疆维吾尔自治区标准化研究院。本标准主要起草人：文娜、李芳、宋良辉、胡小明、姑丽巴哈尔、张磊、李统中、曹雪琴、毛琼玲、罗建民、邵家丽、杨飞、杨中、陈俊宇、徐熠、王霞。

1 范围
DB65/T3951—2016
水质多种药物残留量的测定 液相色谱串联质谱法
本标准规定了用液相色谱串联质谱法测定水质中二十八种药物残留量的方法原理、试剂材料、仪器、样品、测定步骤、计算结果、精密度与准确度等要求。本标准适用于生活饮用水、地表水及其生活污水中一种激素药、一种抗过敏药、一种退热药、六种抗生素、十种磺胺、九种嗪诺酮类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定。
本方法的检出限：头孢噻呋、罗红霉素、克拉霉素、氢化可的松、盐酸苯海拉明、磺胺喹啉、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、磺胺甲氧唑、磺胺二异恶唑、磺胺甲氧咪唑、磺胺多辛为0.02μg/L；氯霉素、羟氨苄青霉素、对乙酰氨基酚、青霉素G、磺胺噻唑、沙拉沙星、达氟沙星、恩诺沙星、环内沙星、诺氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、双氟沙星、培氟沙星为0.04μg/L。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 方法原理
采用固相萃取技术富集水中多种药物，用甲醇洗脱，洗脱液经液相色谱-串联质谱仪测定，采用外标法定量。

4 试剂和材料
4.1 水为GB/T6682规定的一级水。
4.2 乙腈：色谱纯。
4.3 甲醇：色谱纯。
4.4 固相萃取柱：Waters HLB固相萃取柱600mg或相当者。采用5mL甲醇、5mL水依次活化固相萃取柱，在活化过程中，不要让柱子流干。
4.5 流动相：乙腈 + 2mM乙酸铵（用乙酸调pH至3.2）。
4.6 0.1 mol/L 盐酸溶液。
4.7 头孢噻呋、氯霉素、羟氨苄青霉素、罗红霉素、克拉霉素、对乙酰氨基酚、青霉素G、氢化可的松、盐酸苯海拉明、磺胺喹啉、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧基嘧啶、磺胺甲氧唑、磺胺二异恶唑、磺胺甲氧咪唑、磺胺多辛、磺胺噻唑、沙拉沙星、达氟沙星、恩诺沙星、环内沙星、诺氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、双氟沙星、培氟沙星标准物质：纯度≥99%。
4.8 二十八种药物标准储备溶液：40mg/L。准确称取适量的每种药物标准物质，用甲醇配成40mg/L的标准储备溶液，该溶液在4℃保存，有效期2个月。
4.9 标准混合工作溶液：1mg/L。取4.8溶液用甲醇稀释成混合标准工作溶液。该溶液在4℃保存，有效期1周。
4.10 滤膜：0.22μm有机滤膜。

5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
5.2 玻璃器皿：容量瓶、移液管均为A级。
5.3 分析天平：感量0.1mg。
5.4 样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。
5.5 采样瓶：1L或2L具磨口塞的棕色玻璃细口瓶。
5.6 自动固相萃取仪或固相萃取装置。
5.7 离心机：转速应达到4000r/min。

6 样品
6.1 样品的采集
样品必须采集在预先洗净烘干的采样瓶（5.4）中，采样前不能用水样预洗采样瓶，以防止样品的沾污或吸附。采样瓶要完全注满，不留气泡。
6.2 样品的保存
样品采集后应避光于4℃以下冷藏，在7d内萃取，萃取后的样品应避光于4℃以下冷藏，在40d内分析完毕。

7 分析步骤
7.1 样品制备
7.1.1 样品的富集：取采集水样100mL于离心管中，用0.1mol/L盐酸溶液将pH值调节至6.0，以6500r/min离心后去除沉淀，转移上清水样全部上样，以5ml/min的流速流过已活化好的固相萃取柱（4.4）。
7.1.2 干燥和洗脱：用5mL水淋洗萃取柱，抽干萃取柱，5mL甲醇洗脱，高纯氮气吹干。
7.1.3 用1mL乙腈+2mM乙酸铵（用乙酸调pH至3.2）混合液（1:1, V/V）定容，过0.22μm滤膜后，进行液相色谱-串联质谱分析。
7.2 标准曲线的制备
吸取二十八种药物标准混合工作溶液（4.9），配制成质量浓度分别为0.8, 2.0, 8.0, 16.0, 40.0, 160.0及100ng/mL的标准系列。
7.3 色谱测定
7.3.1 液相色谱条件
a) 色谱柱：Waters BEH C18色谱柱（100mm×2.1mm, 1.7μm），或相当者；
b) 流动相：乙腈（A）+2mM乙酸铵（用乙酸调pH至3.2）（B）；
c) 梯度洗脱程序见表1：
表1 梯度洗脱程序
时间(min) | A(%) | B(%)
0 | 5 | 95
6 | 95 | 5
9 | 5 | 95
11 | 5 | 95
13 | 5 | 5
d) 流速：0.3ml/min；
e) 柱温：30℃；
f) 进样量：3μL。

7.3.2 质谱条件
a) 离子源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：除氯霉素为负离子扫描外，其他为正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；
c) 毛细管电压：3.0kV；
d) 锥孔电压：30.0V；
e) 离子源温度：150℃；
f) 脱溶剂气温度：500℃；
g) 脱溶剂气：1000L/hr；
h) 锥孔气流速：50L/hr。

表2 28种药物的定性离子对、定量离子对、碰撞电压及参考保留时间
名称 | 英文名称 | 参考保留时间/min | 定性离子对(m/z) | 定量离子对(m/z) | 锥孔电压/CV | 碰撞电压/CE
头孢噻呋 | ceftiofur | 5.73 | 524.4/241.2 | 524.4/241.2 | 34 | 25
氯霉素 | Chloramphenicol | 4.60 | 524.4/210.2 | 321.0/257.1 | 34 | 25
羟氨苄青霉素 | Amoxicillin | 5.64 | 321.1/152.0 | 419.5/158.1 | 2 | 14
罗红霉素 | Roxithromycin | 5.61 | 321.1/257.1 | 837.5/158.1 | 16 | 10
克拉霉素 | Clarithromycin | 5.58 | 419.5/83.0 | 748.5/158.1 | 16 | 14
阿奇霉素 | Azithromycin | 5.56 | 419.5/158.1 | 748.5/116.1 | 30 | 16