ICS 65.020.99 B21 DB51/T 808—2008 四川省地方标准 杂交玉米品种真实性和纯度SSR分子检测技术方法 Identifying genuineness and purity of maize hybrid using SSR molecular marker 发布：2008-06-06 实施：2008-09-01 发布单位：四川省质量技术监督局 前言 本标准的附录A为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口，由四川省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：四川省种子站、四川省农业科学院作物研究所、成都市种子站。 本标准主要起草人：杨俊品、苏秀、何芳、林勇、谭君。 1 范围 本标准规定了玉米（Zea mays L.）单交种、自交系的品种真实性和纯度的SSR分子标记检测方法及检测结果的判定标准。 本标准适用于玉米单交种、自交系的品种真实性和纯度鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准；凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 4404.1 粮食作物种子 禾谷类 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验 GB/T 3543.5 农作物种子检验规程 真实性和品种纯度 GB/T 19557.1 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南 总则 NY/T 1432 玉米品种鉴定 DNA指纹方法 BMT guidelines（proj.3） 分子标记选择与DNA指纹库构建指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 简单重复序列（SSR） Simple Sequence Repeats，又称微卫星序列或短串联重复序列，是由1～5个核苷酸为重复单位组成的串联重复序列，长度一般为100～200 bp，可达几十至几百个碱基对。 3.2 聚合酶链式反应（PCR） Polymerase Chain Reaction，是一种用于在体外扩增DNA序列的技术。模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶作用下，引物与模板互补序列退火并延伸，以dNTP为底物合成新DNA链。通过反复循环，实现目标DNA片段的指数扩增。 3.3 引物（Primer） 具有游离3'-OH末端并含有特定序列的寡核苷酸短片段，与DNA模板结合后可启动PCR反应。 3.4 核心引物（Core Primer） 指多态性、稳定性和重复性良好，适用于品种真实性和纯度鉴定并优先选用的引物。核心引物的选择参考BMT guidelines（proj.3）。 4 原理 简单重复序列（SSR）广泛分布于玉米基因组中，各位点重复单位数目及序列存在差异，从而表现出多态性。由于SSR两端序列高度保守，可设计特异引物，通过PCR扩增获得不同长度的DNA片段。经电泳分离并染色后形成特征性条带图谱。不同玉米品种因遗传差异表现出不同的SSR图谱，从而实现品种真实性和纯度的鉴定。 5 试验方法 按NY/T 1432《玉米品种鉴定 DNA指纹方法》执行。 6 核心引物筛选 在玉米每条染色体的长臂和短臂上各选取1对引物，共20对作为基本核心引物；在近着丝点区域及检测实践中再选取20对作为扩展核心引物，共计40对核心引物。同时筛选能够代表不同谱带类型的标准品种。 7 品种纯度检测程序 7.1 样品数量 从供检样品中随机抽取400粒种子，按GB/T 3543.4规定进行发芽试验，从发芽幼苗中随机选取不少于300株用于检测。 7.2 检测程序 从核心引物中筛选出对供检杂交种具有显著差异的3对引物，对样品进行PCR扩增和电泳分析，以判定品种纯度。 8 品种真实性检测程序 8.1 样品数量 当供检样品为杂交种时，随机抽取200粒种子进行检测。 （后续内容缺失）