ICS 65.120
B 46
DB41
河南省地方标准
DB41/T 1588—2018
饲料中沙门氏菌的检测 EMA-PCR法

2018-04-17发布
2018-07-17实施

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准由河南省畜牧局提出并归口。
本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所、河南中标检测服务有限公司。
本标准主要起草人：张发旺、方忠意、董鹏、李金磊、李灵平、李博、于辉。
本标准参加起草人：高延玲、狄元再、韩楠、王艳丽、贾松涛、邱天宝、邱富娜、王书丽、张跃京、张宁、王小艳、王丹。

1 范围
本标准规定了饲料中沙门氏菌的EMA-PCR检测方法。
本标准适用于饲料中沙门氏菌的检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检测方法
GB/T 14699.1 饲料采样

3 原理
叠氮化乙锭（EMA）能够透过死细菌的细胞膜，在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合，使死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增，而活菌能进行PCR扩增。

4 试剂和材料
4.1 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，试验用水符合GB/T 6682一级水的要求。
4.2 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A的A.1。
4.3 氯化镁-孔雀绿增菌液（RV）：见附录A的A.2。
4.4 2×Premix Taq缓冲液：内含Taq DNA聚合酶1.25U/25μL，4mmol Mg，dNTP各0.4mmol。
4.5 特异性引物（对）序列为：
a) 上游引物：5'-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGG-3'；
b) 下游引物：5'-CATCGCACCGTCAAAGGAAC-3'。
4.6 琼脂糖：电泳级。
4.7 Marker 2000。
4.8 沙门氏菌ATCC 14028。
4.9 0.5×TAE缓冲液：见附录A的A.3。
4.10 6×上样缓冲液：见附录A的A.4。
4.11 叠氮化乙锭（EMA，0.2mg/mL）：见附录A的A.5。
4.12 溴化乙锭（10mg/mL）。
4.13 灭菌离心管：1.5mL，15mL。

5 仪器设备