DB51/T1077-2010 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定高效液相色谱法 发布：2010-06-01 实施：2010-07-01 四川省质量技术监督局发布 前言 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省饲料工作总站负责起草，起草人：柏凡、张静、李云、冯娅、甄阳光、赵立军。 1 范围 本标准规定了测定饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的高效液相色谱法(HPLC)。适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检出限分别为2.0μg/kg、0.8μg/kg、2.5μg/kg、1.5μg/kg。 2 规范性引用文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1 饲料采样 GB/T20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样经乙腈-水提取，离心、过滤后，经免疫亲和柱净化、浓缩，用高效液相色谱仪配柱后衍生-荧光检测器检测，外标法计算黄曲霉毒素含量。 4 试剂和溶液 所有试剂为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水。 4.1 甲醇：分析纯、色谱纯 4.2 氯化钠 4.3 氯化钾 4.4 磷酸氢二钠 4.5 磷酸二氢钾 4.6 甲醇-水(70+30)提取液 4.7 磷酸盐缓冲液(PBS) pH7.4 4.8 黄曲霉毒素混合标准溶液及标准贮备液、工作溶液 注意事项：操作需戴医用乳胶手套，所有接触黄曲霉毒素的容器需用4%次氯酸钠浸泡清洗。 4.9 黄曲霉毒素免疫亲和柱 5 仪器与设备 分析天平(感量0.1mg)、振荡器、离心机(转速≥5000r/min)、超纯水处理器、涡旋混合器、高效液相色谱仪配荧光检测器、柱后光化学衍生器、氮吹仪、0.45μm滤膜。 6 试样制备 按GB/T14699.1采样后，按GB/T20195选取实验室样品1kg，四分法缩减至约200g，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 7.1.1 提取：称取25g试样于锥形瓶，加入125mL甲醇-水(70+30)提取液，振荡40min，离心，取上清液过滤，取10mL滤液加入30mL PBS混匀待净化。 7.1.2 净化：将10mL提取液以1-2滴/秒通过免疫亲和柱，用10mL PBS冲洗，抽干备用。