DB14/T1128-2015 苹果树腐烂病抗病性鉴定技术规程 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：山西省农业科学院植物保护研究所、山西新科丰农业科技有限公司。本标准主要起草人：赵晓军、殷辉、周建波、张志斌、秦楠、姚众、杜恩强、任海宝。 1 范围 本标准规定了苹果树腐烂病抗病性鉴定的术语和定义、接种体制备、室内抗病性鉴定及调查方法等。适用于苹果树各个品种及砧木对苹果树腐烂病的室内抗性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件：NY/T1318 农作物种质资源鉴定技术规程。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗病性 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传的性状。 3.2 人工接种 在适宜条件下，人工操作将接种体放于植物体感病部位并使之发病的过程。 3.3 抗病性评价 根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的描述。 3.4 接种体 用于接种以引起侵染的任何病原物部分，真菌的接种体可以是孢子、菌核或菌丝。 3.5 潜育期 病原物侵染寄主后建立寄生关系开始，到出现明显症状为止的这一时期。 3.6 病情指数 将普遍率和病害严重度相结合，用一个数值全面反映植株群体发病程度，具体按公式计算。 4 接种体制备 4.1 病原菌分离纯化、保存及扩繁 4.1.1 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g。将马铃薯去皮、切成小块，用蒸馏水煮沸30分钟，纱布过滤，滤液定容至1000mL，加入葡萄糖和琼脂，121℃高压灭菌20分钟。水琼脂培养基：琼脂20g，用蒸馏水定容至1000mL，121℃高压灭菌20分钟。 4.1.2 主要仪器及设备 光学显微镜、恒温培养箱、凝胶成像系统、超净工作台。 4.1.3 病原菌分离方法 从病斑边缘病健交界处剪取0.5cm×0.5cm大小的病组织，用75%乙醇消毒90秒，然后用无菌水冲洗3次，用灭菌滤纸将水吸干，置于PDA培养基上，28℃恒温培养箱中培养。 4.1.4 病原菌纯化 病菌分离物培养4天以后，从菌落边缘挑取少量菌丝接种至PDA培养基上，28℃恒温培养10～15天。 4.1.5 病原菌保存 制作1.5mL PDA Eppendorf离心管斜面，将待保存菌株接种至斜面，28℃恒温培养待菌丝长满斜面时，将Eppendorf离心管放置4℃保存。 5 室内抗病性鉴定 5.1 鉴定设计 鉴定材料应选择抗病性鉴定目的的相关品种或砧木，进行实验室控制条件下的抗病性测试。