养殖水体中氯霉素残留量的测定 高效液相色谱串联质谱法 DB21/T2410—2015 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则起草。本标准由大连市水产技术推广总站提出，并由辽宁省海洋与渔业厅归口。起草单位：大连市水产技术推广总站。主要起草人：张秀妍、王骏、丁勇、刘彤、马琳、郝佳。 1 范围 本标准规定了养殖水体中氯霉素残留量的测定原理、试剂制备、测定步骤和结果计算。本标准适用于渔业生产养殖水体中氯霉素残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品中的氯霉素用乙酸乙酯液液萃取，反相色谱柱分离，质谱检测器检测，内标法定量。 4 试剂 4.1 乙酸乙酯：色谱纯 4.2 甲醇：色谱纯 4.3 甲醇水溶液[1+1]：100mL甲醇加入100mL水中，超声混匀。 4.4 标准品：氯霉素，纯度≥99.5%。 4.5 氛代氯霉素内标标准溶液：100μg/mL。 4.6 标准溶液 4.6.1 氯霉素标准储备溶液[1.0mg/mL]：准确称取25.00mg氯霉素标准品，用甲醇定容到25.00mL，配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，溶液于-18℃避光保存，有效期为6个月。 4.6.2 氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]：准确量取100μL氯霉素标准储备溶液（4.6.1）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液于-18℃避光保存，有效期为2周～3周。 4.6.3 氯霉素标准使用溶液[50ng/mL]：准确量取0.5mL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液于4℃保存，有效期为1周。 4.6.4 氯霉素标准使用溶液[10ng/mL]：准确量取100μL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液于4℃保存，有效期为1周。 4.6.5 氛代氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]：准确量取1mL氛代氯霉素标准溶液（100μg/mL）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液于-18℃避光保存，有效期为2～3周。 4.6.6 氛代氯霉素标准使用溶液[100ng/mL]：准确量取10mL氛代氯霉素标准中间溶液（4.6.5）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，溶液于4℃避光保存，有效期为1周。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱-串联质谱联用仪 5.2 电子天平：感量0.01mg。 5.3 溶剂过滤器。 5.4 混合纤维素酯水性滤膜：孔径0.45μm 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 旋涡振荡器。 5.7 超声振荡器。 6 测定步骤 6.1 样品处理 6.1.1 将水样经混合纤维素酯滤膜过滤。 6.1.2 量取250.0mL过滤后的水样，置于500mL分液漏斗中，加入50.0μL氛代氯霉素标准使用溶液（4.6.6），振摇混匀。 6.1.3 加入50mL乙酸乙酯，剧烈振摇3分钟，静置分层。将下层水样放入烧杯中，使用滤纸卷吸干分液漏斗管颈内水分，乙酸乙酯萃取液放入125mL鸡心瓶中。 6.1.4 将萃取过的水样倒回原分液漏斗，重复萃取步骤，合并乙酸乙酯萃取液，45℃水浴中减压浓缩至近干。 6.1.5 向鸡心瓶中加入1.0mL甲醇水溶液（4.3），涡旋振荡1分钟，超声振荡1分钟，样液经0.22μm针孔式有机相滤膜过滤后供高效液相色谱-串联质谱联用仪测定。 6.2 空白试验 量取250.0mL纯水，按样品处理步骤进行。 6.3 测定 6.3.1 色谱条件 色谱柱：Cs柱，100mm×3.0mm（内径），粒度1.8μm。 流动相：甲醇：水为60:40（V/V）。 流速：0.3mL/min。 柱温：35℃。 进样量：20μL。 6.3.2 质谱条件 离子源：电喷雾（ESI）源。