ICS65.150 B50 备案号： 江苏省地方标准 DB32/T1737—2011 嗜麦芽寡养单胞菌检验 Examination of Stenotrophomonas maltophilia 2011-04-15发布 2011-06-15实施 江苏省质量技术监督局发布 前言 嗜麦芽寡养单胞菌是水产养殖中危害较严重的病原菌之一，目前尚无统一检验标准，特制定本地方标准。 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编制。 本标准由江苏省海洋与渔业局提出。 本标准主要起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：陈辉、黄春贵、邹勇、方苹、段翠兰、郭闯、王习达、陈静、郭立新、刘训猛。 1 范围 本标准规定了嗜麦芽寡养单胞菌检验的设备和材料、培养基和试剂、检验程序及操作步骤。 本标准适用于鱼类等水生动物中嗜麦芽寡养单胞菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.28—2003 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 GB/T6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088—2000 出入境动物检疫采样 3 仪器和材料 3.1 冰箱：0℃～4℃。 3.2 恒温培养箱：37℃±1℃。 3.3 显微镜：10×100×。 3.4 均质器或灭菌乳钵。 3.5 电子天平：0.0g～500.0g，精度0.1g。 3.6 试管：16mm×160mm、15mm×100mm及相应试管架。 3.7 刻度吸管：1mL（0.01mL刻度）、5mL、10mL（0.1mL刻度）。 3.8 锥形瓶：500mL、250mL。 3.9 培养皿：直径90mm。 3.10 接种灯和接种环。 3.11 手术剪、镊子等。 4 培养基和试剂 4.1 营养肉汤：按GB/T4789.28—2003中4.8规定。 4.2 营养琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.7规定。 4.3 血琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.6规定。 4.4 革兰氏染色液：按GB/T4789.28—2003中2.2规定。 4.5 鞭毛染色法：按GB/T4789.28—2003中2.7规定。 4.6 实验室用水：按GB/T6682—2008三级水规格。 5 样品的采集与处理 5.1 采样数量 对有症状水生动物取3～5条，至少不少于2条濒死个体；无症状个体按GB/T18088—2000随机取样。 5.2 采样要求 应采集活体或刚死不久的水生动物。 5.3 采集部位 采集已知或疑似病原存在的组织或器官。特殊样品可按检测需求进行适当处理并封存。 6 检验程序 检验流程为：待检样品（25g或mL）+225mL灭菌营养肉汤 → 37℃培养18h～24h → 营养琼脂分离培养 → 挑取典型菌落 → 革兰氏染色及鞭毛染色 → 血琼脂培养 → 生化试验 → 结果报告。 7 操作步骤 7.1 增菌 取检样25g（mL）加入225mL灭菌营养肉汤，经均质处理后37℃培养18h～24h。 7.2 分离 取增菌液划线接种于营养琼脂平板，37℃培养18h～24h，形成针尖状淡黄或浅黄色菌落。 7.3 涂片镜检 对典型菌落进行革兰氏染色和鞭毛染色，嗜麦芽寡养单胞菌为革兰氏阴性菌，鞭毛为极生多鞭毛。 7.4 纯培养 挑取典型菌落接种血琼脂平板，37℃培养18h～24h，菌落呈淡紫绿色溶血特征。 7.5 生化试验 接种各类生化培养基，37℃培养24h后观察结果，嗜麦芽寡养单胞菌具有特定生化反应特征（见表1）。