ICS65.020.30
DB6101/T158—2020
新疆维吾尔自治区地方标准
种鸡场戊型肝炎（HEV）净化技术规范
2020-11-12发布，2020-12-12实施
西安市市场监督管理局

前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，由西安市市场监督管理局提出，归口于西安市农业农村局。起草单位包括西安市动物疫病预防控制中心、西北农林科技大学、西安秦岭野生动物园、西安瑞尔康农牧有限公司、咸阳康大农牧业有限公司、西安市长安区方缘养殖专业合作社。本文件主要起草人：张靖飞、张园、赵钦、冯鹏、孙亚妮、闵育娜、王新、石龙飞、邵俊峰、吴耀丽、王向阳、冯莲英、肖养红、聂娉舒。本文件由西安市动物疫病预防控制中心负责解释，为首次发布。
联系信息：西安市动物疫病预防控制中心，地址：西安市长安南路138号，邮编：710061，电话：029-85490058。

1 范围
本文件规定了种鸡场戊型肝炎（HEV）净化技术的术语和定义、检测、饲养管理及净化标准等要求，适用于种鸡场HEV净化。

2 规范性引用文件
下列文件通过文中规范性引用构成本文件的必不可少条款。注日期的引用文件，仅适用于该日期版本；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。
- GB13078 饲料卫生标准
- GB/T14926.52 实验动物酶联免疫吸附实验
- GB/T36195 畜禽粪便无害化处理技术规范
- NY/T388 畜禽场环境质量标准
- NY/T1167 畜禽场环境质量及卫生控制规范
- NY5027 无公害食品畜禽饮用水水质
- NY/T5038 无公害食品家禽养殖生产管理规范
- NY/T5339 无公害食品畜禽饲养兽医防疫准则
- 病死及病害动物无害化处理技术规范
- 农医发[2017]25号

3 术语和定义
本文件未界定新的术语和定义。

4 检测要求
4.1 出壳雏鸡胎粪的检测与淘汰
4.1.1 样品收集：出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳袋中。在灭菌1.5mL离心管中放入0.5mL灭菌磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/mL，pH7.4），轻轻按压雏鸡腹部将胎粪挤入管内。
4.1.2 样品处理与检测：在涡旋震荡仪上充分混匀，采用TRIzol法提取粪便总RNA。RT-nPCR扩增过程中使用Superscript II反转录酶，5μL cDNA产物作为第一轮PCR模板，两轮PCR均使用Transtaq High Fidelity DNA聚合酶，PCR终产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。
4.1.3 检测后处理：胎粪检测为禽HEV阳性，则对应母鸡与后代均视为HEV阳性，阳性鸡不得作为种鸡，应无害化处理；阴性鸡立即运送至育雏舍饲养。
4.1.4 操作要求：每只母鸡采集胎粪后，要彻底洗手或更换一次性手套后，方可采集下一只母鸡胎粪。阴性雏鸡应尽快运送至育雏舍，同一母鸡所产雏鸡应在同一运输箱内运输。
4.2 育雏后期的检测与淘汰
4.2.1 鸡群血清抗体检测：育雏结束前约10天，逐只无菌采集抗凝血，按GB/T14926.50要求，用重组截短禽HEV ORF2蛋白作为抗原的间接ELISA检测血清中的抗HEV IgG抗体。若抗体阳性率>10%，同时采集鸡群阳性个体粪便进行RT-nPCR检测，若RT-nPCR阳性，则淘汰阳性鸡。
4.2.2 检测后处理：ELISA阳性鸡不得作为种鸡，应无害化处理；阴性鸡维持小群或单笼饲养。
4.2.3 育雏期间操作要求：同一母鸡所产雏鸡置于同一笼饲养，不同笼间以一次性纸板隔离，疫苗免疫和采血应使用一次性器具。