本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试与评价ｌgPow值在1.5～6.0之间的稳定的有机化学品的生物富集性，也适用于测试与评价ｌgPow＞6.0的高亲脂性的有机化学品的生物富集性。 GB/T 21858-2008 化学品 生物富集 半静态式鱼类试验 GB/T21858-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本标准适用于测试与评价ｌgPow值在1.5～6.0之间的稳定的有机化学品的生物富集性，也适用于测试与评价ｌgPow＞6.0的高亲脂性的有机化学品的生物富集性。
本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.305(1996年)《生物富集:流水式鱼类试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改:
---将计量单位改为我国法定计量单位。
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D 和附录E 为资料性附录。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准负责起草单位:环境保护部化学品登记中心。
本标准参加起草单位:上海市检测中心、上海市环境科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所。
本标准主要起草人:毛岩、周红、于相毅、赵华清、殷浩文、沈根祥、刘济宁。


前言Ⅰ
1 范围1
2 术语和定义1
3 受试物信息1
4 方法概述2
5 仪器和设备2
6 试验准备2
7 试验程序3
8 质量保证与质量控制6
9 数据与报告6
附录A (资料性附录) 合格稀释水的化学物质特性8
附录B (资料性附录) 推荐使用的试验鱼9
附录C (资料性附录) 吸收阶段和清除阶段持续时间的预测10
附录D (资料性附录) lg犘ow为4的受试物的生物浓度试验取样的理论样例12
附录E (资料性附录) 生物富集系数的计算13
参考文献15

ICS13.300;13.020.40
中华人民共和国国家标准
GB/T21858—2008
化学品
生物富集
半静态式鱼类试验
Chemicals-Bioconcentration-Semi-static fish test2008-05-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-09-01实施
GB/T21858--2008
1范围
术语和定义
受试物信息
方法概述
仪器和设备
试验准备
试验程序
质量保证与质量控制
数据与报告
附录A（资料性附录）
附录B(资料性附录)
附录C（资性附录)
附录D（资料性附录）
隔录E(资料性附录)
参考文献
合格稀释水的化学物质特性
推荐使用的试验鱼
吸收阶段和除阶段持续时间的预测1gP。w为4的受试物的生物浓度试验取样的理论样例生物富集系数的计算
GB/T 21858--2008
本标准等同采用经济合作与发展组织（OECD)化学品测试导测No.305（1996年）《生物富集：流水式鱼类试验(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改：
将计量单位改为我国法定计量单位。本标准的附录 A、附录 B、附录 C,附录 D和附录 E为资料性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标推负责起草单位：环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位：上海市检测中心、上海市环境科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所。本标准主要起草人：毛岩、周红、于相毅、赵华清、殷浩文、沈根祥、刘济宁，ate.net
1范围
化学品生物富集半静态式鱼类试验GB/T 21858-2008
本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验谁备、试验程序、质岳保证与质画控制、数据与报告。
本标准适用于测试与评价1gP。值在1.5～6.0之间的稳定的有机化学品的生物高集性，也适用于测试与评价P>6.0的高亲脂性的有机化学品的生物富集性。2术语和定文
下列术语和定义适用于本标准。2.1
生物富集bioconcentratian/bioaccumulation试验生物体(或特定组织)内某种受试物的浓度相对于试验介质中该物质浓度的增加。2.2
生物富集系数bioconcentration factor,Bc试验吸收阶段的任何时间，试验生物体（或特定组织）内种受试物浓度与试验介质中该物质浓度的比率。BCF也可由动力学方程速率常数(K1/K2)直接计算得到,记为BCFE。2.3
稳定态plateal or steady-state受试物在鱼体中浓度对应时间所绘的曲线与时间轴趋于平行(变化幅度在士20%)时状态。2. 4
稳定态生物言集系数/稳定态生物蕾积系数steady statehioconcentration factor，BCFa在稳定态下，试验生物体（或特定组织）内某种受试物浓度与试验介质中该物质浓度的比率。2. 5
正辛醇-水分配系数octanol-water partifion coefficient,Paw物质在正辛醇-水两相介质中达到平衡时的度之比：通常以P。表示。2.6
吸收速率常数ptake rate constant,K受试鱼暴露于含有受试物质的介质中，鱼体或其特定组织中受试物浓度增加速率。通常以d-1表示。
清除速率常数depuration(loss）rateconstant，K2受试鱼从含有受试物质的介质中转移到不含受试物质的介质中后，鱼体或其特定组织中受试物度降低的速率。通常以d-1表示。3受试物信息
水中溶解度；
正辛醇-水的分配系数（P）；
水解性；
在太阳光或模拟太阳光和在生物富集试验光照条件下，测定化学品在水中的光转化作用；表面张力（若无P。时）；
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蒸气压；
快速生物降解性试验结果：
受试物质对受试鱼的毒性，如LCso值；+
合适的分析方法（已知准确度、精确度和灵敏性）；样品制备和储存的详细资料；
受试物质在水中和鱼体内的分析检测限；当受试物质使用C标记时，应了解放射物质携带杂质的百分率。4方法概述
4.1原理
生物富集试验包措两个阶腹：暴露（吸收阶段和暴露后镜除)阶段。在吸收阶段，将受试鱼暴露两个或两个以上浓度的受试物潜液中。吸收阶段一般为28d，除非能谢录C中的方程式可用于预测吸收险段的美数和稳定状态时间。如证明在此之前已达到吸收来
果在28d内尚未达到稳是,吸收阶股库延长直至稳定步本为止，最长为60定期更换试验介质。
个质，潜除阶段开始。清除阶段必不在吸收达到稳定将
将变词
安试物的吸
可少，除非在吸收阶娶
在整个测试过
验之外，虚设置空对照
生物富集系数
的模型（见附录E
用实测的受让
生物富集系数的
垂时测定
的计算选
鱼体肉的浓
总湿重衰示
BCF 值一般
(内脏)时,可用特
寻惑猩官（妖
试物质在受试鱼体内
4.2参比物
无推荐参比物。
5仪器和设备
溶解氧测定仪；
水度计；
pH计;
分析天平；
TOC 分析仪；
水质测定仪器；
妻的同时，
化学惰性材料制成的水族工具！温度控制设备；
实验室常用玻璃器血，
受试物分析仪器；
样品前处理仪器设备。
6试验准备
6.1受试鱼类
数模型。如果
鱼体的脂肪
量。除两组不司浓度的受试物试莫型明显不后用性，应选肩更复杂算吸收遠率管数，清除速率常数和河食用部分（鱼肉）和非食用部分受试物质格P
>3)，在测定受
6.1.1鱼种的选择
鱼种选择的标准：易于获得、大小合适和实验室内易于驯养，也包括娱乐，商业、生态学价值以及相2
http：
对灵敏和成功选用前例等。
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推荐使用的试验种见附录B。也可以用其他鱼种，但试验条件应作相应调整，并在报告中说明色种选择理由和试验方法。
6. 1. 2 鱼的卵养
受试鱼应在与试验温度相同的水中驯养2周以上，每天设喂相当于鱼体重1%～2%的饵料，应测定饵料的脂肪和总蛋白含量。建议测定农药和重金肩含量。在受试鱼开始驯养48 h内，记录其死亡率并按下殖标准评判：a）7d内试验鱼死亡率大于10%：舍弃整批鱼：b）7d内试验鱼死亡率在5%～10%之间：再养了d；e）7d内试验鱼死亡率小于5%：接收本批鱼。如果在第二个7d内，试验鱼死亡率超过5%，舍弄整批鱼
畸形或惠病鱼不能作为受试鱼，应舍弃。试验期间及试验前两周不应对鱼做任何疾病处理。如果试验中使用成年鱼，应报告受试鱼是雄性还是雌性或两者混用。如果试验中雄鱼和雌鱼漏用时,阙者的脂肪含最应没有显著性差异。雄鱼和雌鱼应-一起喂养。6.2养用水
到养用求一一般来源于无污染，相同水质的天然水。受试鱼种在删养用水中能够存活、成长和馨殖，并且在别养期间不产生任何外观或行为异常。水的特性指标至少应包括pH、硬度、颗粒物、总有机碳、铵及亚硝酸盐的含量、磁度和含盐量（仅对海水鱼类面言）。附景A推荐了获水和海水的部分参数的最大浓度值。
7试验程序
7.1准备
7.1.1试验容器
试验容器应使用化学情性材料制成，对受试验物质没有明显的吸附。建议使用特氟龙材料、不钢或玻璃管，将塑料软管减少到最小最。对于有高吸附系数的物质，要求使用硅烷化玻璃。使用过的容器必须废弃。
7.1.2试验用稀水
稀释水来源和水质同养用水。
在整个试验期间，试验陷水的质量应保持稳定不变，PH值应在6.0~8.5之间，pH值的变化幅度应保持士0.5的范围。稀释水应定期取样分析，包括测定重金属（例如Cu,Pb,Za，Hg，Cd，Ni）、主要的阴离子和阳离子（例如Ca2+，Mg+，Na，K+，CI-，SO42-）杀虫剂（例如总有机磷和总有机氯农药）的含益、总有机碳和固体悬浮物。稀释水中的天然颗粒物最大可接受质量浓度为5mg/L（孔径0.45μm滤膜的截留干物质），总有机碳最大可接受数值为2Ⅱ/L（见附录A)。整个试验过程中，试验容器中其他来源的有机碳不应超过来自于受试物的有机碳。如使用助剂，不应超过10mg/（士20%）。7.1.3受试物溶液的配制
配制合适浓度的受试物贮备液。意议在稀释水中通过简单地混合或搅拌受试物来配制贮备液。应尽量不用或慎用助溶剂或分散剂。可以使用的助溶剂有乙醇，甲醇、乙二醇一甲基醚，乙二醇二甲醚、二甲基甲酰胺和三甘醇。可以使用的分散剂有CrenophorRII4o(乙氧基化氢化麻汕）、吐温80（脱水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚）、0.01%甲基纤维素和HCO-40（乙氧基化氢化剪麻油）。7.2试验操作
7.2.1预备试验
优化试验条件，如受试物浓度的选择、吸收阶段和清除阶段持续时间：3
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7.2.2试验设计
鱼类要暴露在受试物至少2个浓度的水溶液中。通带，较高(或最高)的浓度应为急性LCs的1%，同时该浓度应为水中受试物的分析方法检出限的10倍以上。最高测试浓度也可以通过96h急性LC60除以恰当的急慢性比率来估计。如果可能，也可以选择其他的浓度系列。如果受到工Cso的1为和分析下限的限制而不能配制上浓度时，可以采用小于10倍的浓度级差，或考虑使用14C标记的受试物。任何情况下不得采用大于受试物溶解度的浓度，当试验中使用了助溶剂时，其体积浓度应小于0.I拉/工，函且在所有试验容器中的浓度应相同。应测定助溶剂的有机碳含量。
应设立稀释水对照组或助溶剂对照组。7.2.3桑露条件
7.2.3、1暇收阶段的持续时
吸收阶段持续时间的球测了以实践经验或凭借定的经验关系式获德如利用受试物的水溶解性或正辛醇-水的分配系表录C)。吸收阶段的持续时间险
定状态，应长吸收陈
搬段，龙
7.2.3.2清除阶段
清除阶段的时
集时间
为啵收阶
需的时间过长，例超过了样品吸如判受试物淡度心
使用一次指赞！
定状态浓度
的化学物质
定的分析下
于鱼体内受试物活
7.2.3.3试验介
试验期间，不享对试验介质充
介质时，应快遍把谢
以确保受试物与稀
7.2.3.4受试鱼的
由原试验睿
达到平衡
各试验浓度所需
恭着的尾数
华（见附
新倍时间（如超达
盛有新鲜试验
可平衡，如第28天时还米达到稳时间较短的一
种方法。
解释）。果送到95%清除量所
那么清除阶段的时间可以缩短（例速率常数。请除价段时间应取决试验介质的更换频率。莫换试验器中。新鲜试验质应提前制备，少4 犀重。
如果要求更大的统计
样本，则需要更多鱼尾载
试验时，应选择体重组受试鱼，最小的鱼体重不小于最大鱼体再的三分之二。所有的受试鱼应应键确录受试鱼的质量和鱼龄。建议在试前对更试鱼取样称重。是相同鱼龄，相同来源。』
7.2. 3.5承载量
推荐使用的承载率为鱼重(重)0,1 g/(e g/(d . L)
土20%内,并且溶解氧浓度不低于60%饱和值时,可以提高承载。在选择适当的承裁量时，应考虑鱼种要求的正常生快环境7.2.3.6喂养
如果受试物浓度波动能保持在
在试验期内，使用别养期间相同的饵料。每天投喂相当于鱼体重1%～2%的饵料。建议在试验前对受试鱼取样称重。可根据最近取样的鱼体重来估算各试验惜中鱼的重量，不得称量在试验中的鱼的质量。
每天喂食之后的30min～60min以内，用虹吸清除试验槽中剩余的饵料和鱼类排泄物。在整个试验期间尽可能地保持试验槽干净，以保证有机物的浓度尽可能的。如果更换试验介质，应在每次更换前1h～2 h投食。7.2. 3.7光照和温度
试验期间，光调期应为12h～16h，温度应控制在受试鱼种最适宜温度的士2℃以内（见附录B）。4
http
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7,2.4水质测定的频率
试验时应测定所有试验容器中的漆解氧、TOC、PH和温度，对照组和较高或最高试验浓度组应测定总硬度和盐度，在吸收阶段，至少应测定3次溶解氧，试验开始时、吸收阶段中期和结束时。清除阶段每周1次。TOC的测定应在投人受试鱼前（吸收阶段前24h～48h）、吸收阶段和清除阶段至少每周1次。H应在各个阶段的开始和结束时测定。每次试验测定1次硬度，每日应测量温度，至少连续监测一个试验容器中的温度。7.2.5受试鱼和水的取样及分析
7.2.5.1受试鱼和水的取样计划
在加人受试鱼之前、吸收阶段和清除阶段，均应来集试验槽中的水样进行受试物浓度测定。水样采集频率应不小于鱼样采集频率，且应在投饵之前进行。在吸收阶段至少采集鱼样5次：在清除阶段，至少4次。在有些情况下，仅这几个样品很难计算出二个足够精确的BCF值，因此在两个阶段中建议增加取样饮数(参见附录D)。附录D给出一个取样计划表样例。用其他P的估算值去计算吸收95%的暴露时间，也可以迅速得出相关的计划表。
在吸收阶段应连续取样测定，直到出现稳定态或28d试验期（二者取其短）。如果28d里尚未达到稳定态，应继续取样直到达到稳定态或达60d（二者取其短）。在清除阶段开始前，把试验鱼转人清水容器中。
7.2.5.2取样和样品制备
按虹吸原理，使用情性材料管从试验槽的中部区域采集水样供分析测定。应保持容器尽可能的千净，并在吸收和清除阶段检测总有机碳的含量。每次取鱼样时，从试验精取出适当数量的受试鱼（最少4尾），快速用水冲洗受试鱼，吸干体表水分用最人道的方法快速致死后称重。鱼样和水样采集后应尽快测定，以避免降解或其他方面的损失，并近似计算吸收和清除速率。不能及时测定样品时应用适当的方法保存样品。试验开始前应掌握保存特定受试物的方法、贮存时间和提取方法等。
7.2.5.3分析方法
对于特定的受试物，需要检查分析方法的准确性和重现性，以及水和鱼体中该受试物的回收率。另外，稀释水中不得检出受试物。必要时，应校正试验中测得的C和C,值。7.2.5.4鱼样测定
在试验中使用了放射性标记物质时，则能够测定放射标记物总量（包括母体和代谢物），或者清洗样品后单独测定母体受试物，在稳定态或吸收阶段末（二者取其短）也可鉴定代谢主产物。如累根据放射性标记残余物总量得到的BCF值不小于1000，则有必要鉴别稳定态时鱼体组织中的受试物总残留的降解率是否不小于10%，特别对于农药等特殊类别的化合物。如果鱼体组织中的受试物总残留的降解率不小于10%，则需测定受试物在水中的降解。通常应测定每尾鱼体内的受试物含量，如果这不可能做到，则每次取样后将相同浓度的受试鱼合并，但这将无法进行数理统计分析。如果确实需要进行数理统计，在试验设计时就需充分考虑样品益(变试尾数。
BCF值可表达为试验鱼体总湿重的函数，对于高亲脂性物质，也可表达为鱼体脂肪含盘的函数。如果可能，每次取样都测定鱼样的脂含掌。推荐三筑甲烷/甲醇攀取法为标准方法。不同的测试方法得到的结果不会完全相同，所以应给出所用方法的详细步骤。妞果可能，脂肪测定和受试物测定应使用相同的样品萃取物，因为受试物测定的色谱分析通常都要去除脂肪。试验结束时与开始时的试验鱼的脂肪含量（以mg/kg湿重表示）差值应小于或等于士25%，同时应报告鱼体组织干重，以了解脂肪含益从湿重转化为干重的比率。
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8质量保证与质量控制
有效的试验应满足以下的条件;
a）温度变动小子±2℃；
b）溶解氧浓度不小于60%空气饱和值；控制受试物在试验服明条件下发生光转化作用，滤除波长小于290nm的紫外辐射，避免试验鱼暴露于异常的光化产物；
d）在吸收期,试验容器中的受试物浓度保持在测定平均值的土20%范围内；直至试验结束时，对照和试验组鱼的死亡率或其他不良影响或疾病小于10%，当试验延长数周或数月时，两组中试验鱼死亡或其他不利影响每月应小于5%，并且在个过程中不超过30%。
9数据与报告
数据处理
将鱼体（或鱼体特定组织)的受试物浓度按时间绘制在坐标纸上形成曲线，如果曲线已经达到了一个稳定的状态，也就是说，对于时间轴已经变成了一条近似的渐近线，用式(1)计算稳定状态的生物富集索数(BCF6）：
武中：
C—鱼体组织中受试物的平均浓度：Cw—试验中的受试物平均浓度。当稳定状态没有送到时，也能够计算出80%或95%稳定态的BCF值。1
动力学富集系数（BCF）拍可用一次指数声程的吸收速率常数致1积洁除速率带数致的比率来确定。清除速率带数K，通带道过清除曲线（即在图上描绘出的鱼体中受实物浓度对时间的曲线）来确定，吸收速率常数双1则可根据给定的K2值和来自于吸收曲线的C值计算获得，见附录E。求敢BCFk 和K1、K2 的更好方法是应用非线性参数估计方法软件,否则可用图表法计算 K1、K2 值。如果清除曲线明显不是一次指数方程，则应使用更复杂的方法(见附录C)和生物统计学方法。9.2试验报告
试验报告必须包括以下资料。
a）愛试物：
物理属性及相关的物理化学性质；-化学性质数据，包括有机碳含量：如果使用放射性标记物质，标记原子的推确位置和有关放射性杂质的百分比。b)试验生物：
学名、品系、来源、预处理、驯养、年龄和个体大小等。试验茶件：
所用试验程序；
所用光源类型、特性及光照周期；-试验设计，例如试验槽的大小和数量，试验介质更赖频率，平行数，每个平行的试验鱼数，受试物浓度的系列、吸收期和清除期的持续时间、鱼和水的取样频率；制备试验储备亵的方法和储备綫更薪的频萃（当使用了溶剂时，其浓度，对试验液的有机碳含量负献率）：
http：
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设定的试验浓度、试验容器中测定的浓度平均值和其标推偏差、分析方法：稀释水来源，预处理插述、试验鱼在水中生活能力的表现和水质特性：PH，硬度，温度、落解氧浓度、余氯水平（如果有测定），总有机碳、悬浮颗粒物、试验介质的含盐量和任何其他测定结巢：
试验容器中的水质、PH、硬度、TOC、温度、溶解氧喂食的细信息，如饵料类型，来源，成分（室少包括萌肪和蛋白质合量），投喂量和频率：鱼和水样的处理的信息，包括详组的推备、贮存、萃取、对受试物和脂含量的分析程序和精确度。
d)结果：
预备试验得到的结果：
对照组和各暴露组的鱼的死亡率、观察到的鱼的异常行为；-一鱼的脂肪含量；
曲线（包括所有测试数据），表明直到稳定态吸收和清除阶段鱼体中的受试物情况；-对所有取样时间的C和 C值(包括标推偏差和变化范围),对照组 C值以及本底值(Cr用mg/g整个鱼体湿重或鱼体特殊组织如脂肪湿童或mg/kg表示，Cw用mg/g或mg/kg表示）；
-稳定态生物富集系数(BCF）和动力学富案察数(BCFk）,如有可能,95%置信限的吸收和清除速率常数(以相关的整鱼、鱼体总脂肪含量或其特殊组织表示)，置信限和标推编差，以及各受试物度的计算和数据分析方法；当使用放射性标记物时，在需要的情说下，测得的任何代谢产物；一试验中的任异常情说，试验程序的调整及其他相关信意：一其他说明事项。
e）结果讨论：
测定方法研究的预试验结果应尽可能避免出现类似“方法检测限下未检测到”的结果，因为这将无法用于计算速率常数。
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附录A
（资料性附录）
合格稀释水的化学物质特性
合格稀释水的化学物质特性见表A.1.表 A.1合格稀释水的化学物质特性质
颗粒物质
总有机碳
游离氨
总有机麟孜药
总有机氨农数与多氨联举
总有机氯
极限度
5 mg/L
2 mg/L
1 μg/L
50 ng/L
50ng/L
25 ng/L
1 μg/L
1 ag/L
1 μ/L
10 ng/L
100 ang/L
100 ng/L
推荐使用的试验鱼见表B.1。
武验鱼
斑乌鱼(Brachydania rerio)
稀有Gooeypnsrarus）
剑尾鱼(Xiphoporus helleri)
黑头软口姝（Pimephales
鲤色（Gyprinusarpia
青(Oryzias latip的
孔雀鱼（Poecitia ret
蓝鳃太阳直（Li
彩虹大马哈鱼(O
三刺鱼（Gaster
上表所列
或寄生菌的条
来源。
aehis)
husmykiss
eatus)
易饲养且醋
它们可以
附录B
（资料性附录）
推荐使用的试验鱼
推荐使用的试验鱼
试验温症范围/℃
20 ~ 25
-21-25
21~25*
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试验用鱼体长/cm
3. 0±0.5
3. 0±0. 5
5. 0±2. 0
口鱼种可能难于采案。在控制疾病京证试盒鱼的健崇和知其
这样就能保
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