本标准规定了暗纹东方鲀的主要形态构造特征、生长、遗传学特征及检测方法。本标准适用于暗纹东方鲀的种质检测与鉴定。 SC 1068-2004 暗纹东方鲀 SC1068-2004 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC 1068-2004
暗纹东方
Obscure puffer
2005-01-04发布
2005-02-01实施
中华人民共和国农业部
本标准的第5章和第7章第「条为强制性的条款，其余为推荐性的条款本标准的附录A和附录B为规范件附录本标准曲中华人民共和国农业部提出本标准山全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。SC1068—2004
本标准起草单位：苏州大学、苏州市新时代农业发展有限公司、江苏省淡水水产研究所本标准起草人：陈葵、吴萍、戈志强、沈颂东、戴璇颖、朱江、秦伟、徐世清、龚宏伟、店建清、边文冀1范围
暗纹东方
SC1068—2004
本标准给出了略纹东方鱿Takifugufasciatus（Mcclland.1844）的主要形态构造繁殖和遗传学特征以及检测方法
本标准适用于暗纹东方的种质检测与鉴定，2规范性引用文件
下列文件的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这此文件的最新版本。凡是不注口期的引用义件，其最新版本适用于本标准。GB3/T8588渔业基本术语
GB/T18654.1养殖鱼类种质检验
第1部分：检验规则
GB/T18654.2养殖角类种质检验第2部分：抽样方法（GB/T18654.3养殖角类种质检验第3部分：性状测定GB3/T18654.12养殖角类种质检验第12部分：染色体组型分析SC1036-2000虹鳟
3术语和定义
GB8588确立的以及下列术语和定义适用于本标准3.1
皮刺prickle
鱼类皮肤的棘状骨化物
皮刺区prickledistributingarea鱼类皮肤上分布有皮刺的区域
4名称和分类
4.1学名
暗纹东方纯[Takifugufusciutus（McClland.1844）l，片名Tukifuguobscurus（Abe，1949）4.2分类地位
形日（Tetracxdonilormes），业日（Tetraodontoidci），科（Tctraodontoidac），东方属（Tukifugu）
5主要形态构造特征
5.1外部形态特征
5.1.1外形
体为圆简形，前部较粗圆，向后渐狭，尾柄细长.后部渐侧扁：无腹鳍.背鳍后位，与臀鳍相对，同形胸鳍宽短、尾鳍截形或后缘量梢圆形「小，端位，体无鳞，暗纹东方的外形见图1SC1068-2004
5.1.2体色与斑纹
图1暗纹东方外形
体棕褐色，体侧下方具淡黄色宽纵带，自口角至胸鳍基延伸至尾柄，腹面白色；背侧面具4条一6条不明显暗褐色横纹横跨于眼后、项部胸鳍上方利背鳍前上方，横纹间具白色狭纹3条-5条。胸鳍后上方体侧具一个圆形深黑色大斑，其边缘浅褐绿色。背鳍基部两侧也具褐绿色边缘的熙色大斑。胸鳍基底内外侧常各具黑斑。尾鳍后缘灰褐色，各鳍均淡色5.1.3皮刺区
头部及体的背部均有小的皮刺。背部皮刺区与腹部皮刺区在眼后部相连，鳃孔眉部体的侧面及尾柄光滑无刺（见图2）
皮朝分区域
图2暗纹东方皮刺区的分布
5.1.4可数性状
背鳍鳍式：D.15~18；臀鳍鳍式：A.13~16；胸鳍鳍式：P.16~18；尾鳍鳍式：C.10～11。5.1.5可量性状
体长为体高的3.0倍-3.8倍，为头长的2.7倍～3.9倍；头长为吻长的2.3倍～3.2倍，为眼径的5.7倍~12.4倍。吻长为眼径的2.8倍～4.0倍；头长为眼间隔的1.5倍~2.0倍5.2内部构造特征
5.2.1牙齿与「、下颌骨愈合.形成4个喙状牙板，中央缝隙明显5.2.2头骨骨质硬而细密，呈象牙白色。中筛骨短而宽，前部边缘呈浅凹形，额骨隆起面梢宽，具众多纵走细纹。左右额骨降起线呈细腰形，细腰中部中等宽，前方伸至额骨后缘内侧，后方仲至额骨后缘外侧。额骨长大于额骨宽，前额骨大而长，呈三角形，外侧呈角尖突，前缘平直，向内侧倾斜。眶上缘较短，额骨外缘显著短于前额背外缘，额骨外缘与蝶耳骨上缘边缘成锐角。蝶耳骨突起稍宽，平真
6繁殖
性成熟年龄
SC1068-2004
野生条件下雌鱼最小性成熟年龄3龄，雄伯最小性成熟年龄2龄，人工养殖的雌雄亲鱼最小性成然年龄提前1年。
6.2繁殖季节
6.2.1产卵期为4月份一6月份，5月份为产卵盛期，当水温18%以上时，亲角开始产卵。卵沉性，受精卵有黏性，附着在水草或其他物体上孵化6.2.2人工养殖条件下，其性腺可以完全在淡水中发育成熟，经人工催产可以控制产卵。6.3繁殖力
野生亲鱼的绝对怀卵量-般为14×104粒-30×10-粒。养殖亲鱼的繁殖力和性腺成熟系数见表1
暗纹东方繁殖力和性腺成熟系数表1
体重与性腺
体重，g
性腺重,g
成熟系数，%
绝对怀卵量，粒
相对怀卵量，粒/g
遗传学特征
7.1细胞遗传特征
660.4±28.8
90.88±8.93
22.14±2.56
(21.94=2.16)×10
838.75±29.55
139.9±8.72
23.48+0.93
(32.84=2.05)×10m
391.25112.8
体细胞染色体数2n=44.核型公式10m+6sm+8st+20t，染色体组型见图32
7.2生化遗传学特征
7.2.1同工酶
暗纹东方的染色体组型
102.9±4.23
25.610.41
SC1068—2004
暗纹东方动负舒组织脂酶间酶（EST）有6条酶带，其电泳图谱见图+.打描图谱见7.2.1.1
图4暗纹东方肾酯酶同工酶电泳图谱EST.
图5暗纹东方肾酯酶同工酶电泳图谱扫描图EST,
暗纹东方肾组织酯酶同上酶（EST)酶带的活性强度和相对迁移率见表2。表2暗纹东方幼鱼肾组织酯酶同工酶酶带相对迁移率和活性强度带
相对迁移率
相对活性强度，%
7.3分子遗传学特征
随机引物扩增：引物S%（CACACTCCAG)的特征PCR产物，片段大小为2430bp和1730bp.见图6
8检验方法
8.1抽样
Marker
图6引物S%在暗纹东方基因组DVA的PCR产物电泳图谱按GB/T18654.2的规定执行
8.2性状测定
按照GB/T18654.3的规定执行
8.3年龄鉴定
按SC1036-2000中6.1的规定执行。8.4繁殖力的测定
按SC1036-2000中6.2的规定执行：8.5染色体组型分析
按照GB/T18654.12的规定执行
8.6酯酶同工酶
8.6.1电泳样品的采集
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解剖0龄1龄幼鱼，取肾组织.用去离子水冲洗掉血液，用滤纸吸去组织表面水分。野外样品放入液氮带回实验室保存或带回后放-70℃～～20℃的低温冰箱保存至分析8.6.2电泳样品的制备免费标准bzxz.net
称取1g活体或低温保存的组织放入冰的研钵中，按重量与体积之比为1：3~5加入预冷的0.01mol/磷酸缓冲液.同时加人少量石英砂，研磨匀浆：冷冻条件下，10000r/min离心30min，取上清液8.6.3电泳方法
使用垂直平板电泳仪聚内烯酰胺凝胶；电泳缓冲液Tris/HCl.pH7.0：样品与指示液（0.4%溴酚蓝）混合后点样，每个点样孔加20l，每一样品重复3次，恒流2mA/样品）：4℃恒温电泳4h：聚内烯酰胺凝胶和电泳缓冲液的配制方法按照附录A执行8.6.4染色固定
电泳后将凝胶浸人染色液，配制方法见附录B.37℃保温10min-30min，至酶谱清晰为止，用无离5
SC1068-2004
子水漂洗凝胶.7%乙酸固定
8.6.5扫描测定
电泳图谱测定用凝胶成像分析系统对电泳图谱进行打描，得到酶打描图，相对活性及相对迁移率8.7基因组DNA随机引物扩增(RAPD)分析8.7.1总DNA的提取
8.7.1.1取样
取活负或速冻保存」-20℃的全角的肾脏、肝脏，肌肉或鳍条等组织500mg~-600mg，立即放人研钵加人500lSTE缓冲液（配方：30mmol/TrisHCl.pH8.0：20nmol/L.EITA：50nol/LNaCl.溶解于1000mL双蒸水），剪碎，研磨成浆。操作前用70%浓度的酒精消毒于术器具和冲洗鱼体表面。8.7.1.2酶解蛋白质
把组织浆混匀之后，加1%SDS十二烷基硫酸钠）和5L蛋白酶K存液（20mg/mL），放入56U水浴3h，水浴期问每0.5h取出振荡--次。8.7.1.3去除蛋白质
加等体积（约500l.）饱和酚溶液，振荡1h，至混匀，在4℃下离心（50000rpm，10min），取上清液（约能取300μL--400L），加等体积氯仿：异戊醇（24：1)摇振混匀置4℃保存0.5h，在4℃下离心(50000rpm，10min），取上清液。8.7.1.4沉淀DNA
上清液加2倍体积的无水乙醇和1/10体积醋酸钠。若有絮状沉淀，用干净的牙签挑出。若无絮状沉淀，则置一20℃冷藏30min，再离心，去除上清液保留沉淀。8.7.1.5洗涤
沉淀加75%乙醇振据均匀，离心，去除上清液，重复2次。8.7.1.6溶解保存
将沉淀自然阴干或于37℃培养箱中干燥后，加TE（配方：溶液中含Tris-HCI10mmol/L和EDTA1mmol/L）100l溶解，置4℃保存，24h内测定；置-20℃保存，100d内测定8.7.2PCR反应
8.7.2.1反应体系
8.7.2.1.1体系—：10×Buffer2.5l;MgCl,2L;dNTP2ul;ddH2015.7μL；模板DNA1μL;Taq酶0.3μl引物1.5
8.7.2.1.2体系二：10×Buffer(含MgCl)2.5pL;dNTP2l;ddH018.375μl;模板DNA1uL;Tag酶0.125μ;引物1μL
8.7.2.2PCR反应条件
97℃变性30s,94℃50s-37℃50s72℃2min，40个循坏，72℃延伸10min8.7.2.3PCR产物电泳和成像
1.2%琼脂糖（含溴化乙锭0.05%）凝胶电泳，电压5V/c。紫外成像拍照，并利用凝胶成像分析系统计算扩增产物的分子量。
9检验规则与结果判定
按照（GB/T18654.1的规定执行
A.1电极缓冲液
附录A
（规范性附录】
酯酶同工酶电泳电级缓冲液及凝胶配制方法SC1068—2004
称取羟甲基氨基甲烷（Tris）6.0g和甘氨酸（Gly）28.8g加水定容至1000ml使用之前用蒸馏水稀释10倍、
聚丙烯酰胺凝胶
分离胶浓度5.1%，浓缩胶浓度3.0%：7
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B.1溶液—
附录B
（规范性附录）
酯酶同工酶（EST)染色液配制方法α-乙酸茶酯100mg加5mL内酮（50%）充分混合溶解。B.2溶液二
坚牢蓝RR盐100mg加5ml.丙酮（50%）充分混合溶解B.3溶液三
0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，pH7.0.100mLB.4配制方法
溶液一，溶液二、溶液二充分混合溶解：8
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