本标准规定了大型水蚤生物测试技术中生存及运动影响(急性试验)和生长及繁殖试验方法(慢性效应)。本标准适用于评价可溶性化学物质的毒性；评价工业废水及工业固体废物浸出液的综合毒性；评价废水处理效果；也适用于地面水、地下水的毒性评价及水中沉积物的毒性评价。 GB/T 16125-1995 大型水蚤测试标准方法 GB/T16125-1995 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
大型水蚤测试标准方法
Standard methods for bioassayof daphnia magna straus
GB/T16125-1995
本标准部分参照国际标准IS06341：1982《水质一大型水蚤（甲壳纲、枝角目）活动抑制的测定》（UDC617.777：576.097.2）及美国标准法“水和废水标准检验法”804B.水蚤（Daphnia）的生物检测步骤。
1主题内容与适用范围
本标准规定了大型水蚤生物测试技术中生存及运动影响（急性试验）和生长及繁殖试验方法（慢性效应)。
本标准适用于评价可溶性化学物质的毒性；评价工业废水及工业固体废物漫出液的综合毒性；评价废水处理效果；也适用于地面水、地下水的毒性评价及水中沉积物的毒性评价。2方法原理
2.1测定初始浓度ECs值，此浓度是指在本标准规定的条件下，24h及48h内使50%暴露在试验液中的大型水蚤失去活动能力的浓度，并指出使所有实验水蚤失去活动能力的最低浓度，及不能使任何实验水蚤丧失活动能力的最高浓度。2.2测定初始浓度LCs值，此浓度是在本标准规定的条件下24h及48h内使50%景露在试验液中的大型水蚤心脏停止跳动能力的浓度，并指出使所有大型水蚤死亡的最低浓度及不引起死亡的最高浓度。2.3测定生长曲线，不同浓度下实验水蚤生长的速度不同，其生长曲线也不同，与对照组生长曲线比较判断其生长影响。
2.4测定生殖量，相同条件的实验水蚤在不同浓度实验液中由于毒性作用，其每胎生出的幼水蚤数量不同，与对照组比较判断其毒性。3试剂和材料
3.1试验生物
采用大型水蚤（Daphniamagnastraus）62Dm纯品系生物株，为同龄同母体后代。ECso及LCs试验用1龄～3龄水蚤，每容器10个，平行2～3组：繁殖及生长试验用刚出生的幼水蛋，每浓度组5~6个水蚤。
3.2稀释水
可采用未被有毒物质污染的天然水（地面水或地下水）及自来水（自然景气的），pH值为7～8.6，溶解氧4mg/L以上，或空气饱和氧的60%以上，水的硬度为250士22mg/L（以CaCO。表示），也可用符合上述条件的人工配制水。
3.3仪器
3.3.1-般实验室玻璃仪器。
国家技术监督局1995-12-15批准1996-07-01实施
3.3.2溶解氧测定仪。
3.3.3体视显微镜。
3.3.4pH计。
GB/T16125-1995
3.3.5试验容器：玻璃制结晶Ⅲ或烧杯。3.4试样及实验的制备
3.4.1试样要求有代表性，采样瓶应充满水，采到的废水样品要求在6h内进行毒性测定，否则必须冷藏。
3.4.2试验溶液的制备
3.4.2.1储备液的制备
在无离子水中将已知量的被测物质溶解，先配制高浓度的实验原液，按10的倍数连续稀释成各不同浓度，用mg/1表示，对不溶性物质配高浓度原液时可加少量有机溶剂助溶（如丙酮），但各实验液有机溶剂的最终浓度不得超过0.5mg/L，同时须加溶剂对照。3.4.2.2工业废水原水样为实验原液，作为100%，用稀释水按百分数（百分率）配制成各浓度。3.4.2.3工业固体废物。首先磨碎，按固液1：10比例加入无离子水，摇匀后浸泡24h，滤纸过滤，其溶解部分为被测工业固体废物的浸出原液（100%），再用稀释水按百分数配制成各浓度。4试验步骤
4.1大型水蛋EC5o及LCs实验
4.1.1预试验bzxz.net
确定正式试验的浓度范围，要求得知试验藻全部存活（或无影响）的浓度以及全部死亡（或不动）的浓度，确定被测样品是否稳定，实验水是否健康。4.1.2正式试验
由各浓度中实验水蚤的死亡数得出LCso结果。由各浓度中实验水蚤的不活动数得出ECso结果。实验开始及结束时测定实验液的pH值、水温和溶解氧（DO）。对不稳定性实验液采用定时更换的措施，实验期间实验水蛋不喂食。4.2大型水蚤的繁殖及生长实验（慢性效应）4.2.1预试验
做48hLCso试验·由48hLCs。×0.1得到不引起水蚤死亡的浓度，在水蛋的生存安全浓度范围内选择2～3个生长繁殖试验浓度。4.2.2正式试验
按预试验选好的浓度配制各浓度实验液，平行4～6组，每组设一对照，实验在正常实验室光照下进行，防止直射阳光。实验开始及结束时测定pH及DO，用最高、最低温度计记录实验全程的气温。实验期间，每24h在固定时间用吸管取出实验幼水蚤，分别移入相对应的栅藻藻液缸中喂1h后，移回中缸，即时更换中毒液。
4.3实验水蚤的敏感度测定
用分析纯重铬酸钾测定大型水蚤24hECs在2mg/L以下，表明本实验水蚤的敏感度合格。4.4数据处理与实验结果
4.4.1EC及LC5试验
用半对数纸或概率纸获得ECs及LCs值，也可用计算机LCs程序处理数据。实验结果用mg/L或百分数表示，实验中对照组应无异常。4.4.2繁殖及生长试验
以观察时间为横坐标，平均体长为纵坐标，画出各浓度生长曲线，与对照组生长曲线做比较，判断出作用浓度及不作用浓度。统计各实验液中幼水蚤总数，得出生殖总量及生殖量（每胎平均生幼水蚤数），600
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比较是否与对照组有显著差异，实验期间对照组应无异常。5
试验报告
在明确采用本标准方法情况下，还包括：a.
浓度。
实验用大型水蚤的来源、种名、品名、数目、年龄、驯养时间、健康状况等等；被测物质的名称、来源、理化性质、采样时间及储藏等，以及实验液的配制；实验方法、条件、稀释水等；
数据处理，及24h、48h的ECso，LCs结果。生长曲线以及生殖量，中毒症状，0%及100%影响601
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附录A
大型水蚤的培养繁殖技术
(补充件）
A1在1～2L的圆玻璃缸或烧杯中，加入500mL～1000mL培育水（自然曝气三天以上的自来水或未经污染的过滤地面水），加入10~20个大型水蚤，投喂新鲜栅藻藻液，使藻浓度为（6~8）×105个/mL最佳，在室内自然光照条件下进行培养，避免阳光直射，培养温度15～25℃·pH值为7.5土0.5，溶解氧2mg/L以上，每周全换培养液1～2次。A2实验幼水蚤的分离
选择怀卵量高的水蚤10~20个，投喂充足的饵料，在实验前24h用孔径为1mm的筛子将幼水蚤滤去，在实验前6～12h进行第二次过筛，所得到新出生的幼水蚤为出生6～24l大小的幼水蚤，将此水蚤再继续培养两天即得出生72h的实验水蛋。A3栅藻（Scenedesmus）的培养
采用人工培养的栅藻藻液喂养大型水蚤，用下列无机盐作为栅藻藻种的养液。硫酸铵（NH),SO)
硫酸镁（MgSO,·7H,0)，
碳酸氢钠（NaHCO，），
磷酸二氢钾（KHPO,），
氯化钙（CaCl，·2H2O)，
无离子水
1000mL
栅藻种可在大三角瓶中、在15～25℃水温49W日光照下（8h~16h）进行培养，每天搅拌5～6次。经上述配方培养的栅藻藻种用稀释水扩大培养，按1：1（藻液与稀释水比）或1：2接种，并每3天追加脲素1次.使脲素最终浓度不超过10mg/L，可用此栅藻藻液直接喂大型水蚤。附加说明：
本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所负责起草。本标准主要起草人：修瑞琴、高世荣、许永香、任改英、郭琪本标准由卫生部委托技术归Ⅱ单位中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。602
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