GB 5009.141-2016 食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定 GB5009.141-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB5009.141—2016
食品安全国家标准
食品中诱惑红的测定
2016-08-31发布
人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2017-03-01实施
本标准代替GB/T5009.141—2003《食品中诱惑红的测定》。本标准与GB/T5009.141—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中诱惑红的测定”一增加了试剂的级别和分子式；增加了标准品。
GB5009.141—2016
1范围
食品安全国家标准
食品中诱惑红的测定
本标准规定了汽水、硬糖、糕点、冰淇淋中诱惑红的测定方法。本标准适用于汽水、硬糖、糕点、冰淇淋中诱惑红的测定。2原理
GB 5009.141—2016
诱惑感红在酸性条件下被聚酰胺粉吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水，3.1试剂
甲醇(CH.OH)。
石油醚：沸程30℃～60℃。
硫酸（H,SO）：优级纯。
乙醇(CH,CH,OH)。
氨水（NH：H，O）：含量20%～25%。柠檬酸(C,H.O,·H,O)。
钨酸钠（NazWO·2HO)。
丁酮(C,H.O)。
柠檬酸钠（C.HNa;O,）。
正丁醇CH.O)。
海砂。
甲酸（HCOOH)。
试剂配制
硫酸溶液（10%，体积分数）：将1mL硫酸缓慢加入至8mL水中，混匀，冷却，用水定容至10mL.混匀。
乙醇-氨溶液：取2mL的氨水，加70%（体积分数）乙醇至100mL。3.2.2
乙醇溶液（50%，体积分数）：量取50mL无水乙醇与50mL水混匀。3.2.4柠檬酸溶液（200g/L）：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。3.2.5
钨酸钠溶液（100g/L）：称取10g钨酸钠加水至100mL，溶解混匀。氨水溶液（1%，体积分数）：量取1mL氨水，加水至100mL，混勾。3.2.6
GB5009.141—2016
3.2.7柠檬酸钠溶液（2.5%，体积分数）：称取2.5g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀3.2.8甲醇-甲酸溶液（6：4.体积分数）：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。3.2.9展开剂1：丁酮+丙醇十水十氨水（7十3十3十0.5)。3.2.10
展开剂2：正丁醇+无水乙醇+1%氨水溶液（6十2+3）。展开剂3：2.5%柠檬酸钠+氨水十乙醇（8十1十2）。3.2.11
3.3标准品
诱惑红（CAS：25956-17-6）。
3.4标准溶液配制
3.4.1诱惑红标准贮备液配制：准确称取诱感红0.025g（精确到0.0001g，按诱感红实际纯度折算为纯品后的质量），用水溶解并定容至25mL.诱惑红浓度为1.0mg/mL。3.4.2诱惑感红标准使用液（0.1mg/mL）：吸取诱惑红的标准贮备液5.0mL于50mL容量瓶中，加水稀释到50mL。免费标准下载网bzxz
4仪器和设备
可见分光光度计。
电子天平：感量为0.001g和0.0001g。微量注射器：10μL、50μL。
展开槽。
电吹风机。
离心机。
恒温水浴锅。
分析步骤
试样制备
5.1.1汽水：将样品加热去二氧化碳后，称取10g（精确到0.001g）样品于烧杯中，然后用20%柠檬酸调pH呈酸性，加人0.5g～1.0g聚酰胺粉吸附色素，将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗涤多次（约200mL），以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇-甲酸溶液洗涤1次～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-氨水溶液分次解吸色素，收集全部解吸液，于水浴上驱除氨·蒸发至2mL左右.转人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿，洗涤液并人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用。
5.1.2硬糖：称取10g（精确到0.001g）的已粉碎的样品，加30mL的水，温热溶解，若样品溶液的pH较高，用柠檬酸溶液（3.2.4)调至pH4左右。加人0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素，将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗涤多次（约200mL），以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇-甲酸溶液洗涤1次～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-氨水溶液分次解吸色素，收集全部解吸液，于水浴上驱除氨，蒸发至2mL左右转人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇分次洗涤蒸发Ⅲ，洗涤液并人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用5.1.3糕点：称取10g（精确到0.001g）已粉碎的样品，加入30mL石油醚提取脂肪，共提三次，然后用2
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电吹风吹干，倒人漏斗中，用乙醇-氨解吸色素，解吸液于水浴上蒸发至20mL，加人1mL的钨酸钠溶液沉淀蛋白，真空抽滤，用乙醇-氨解吸滤纸上的诱惑红，然后将滤液于水浴上挥去氨，调pH呈酸性，加人0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素.将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗涤多次（约200mL），以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇-甲酸溶液洗涤1次～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇氨水溶液分次解吸色素，收集全部解吸液，于水浴上驱除氨，蒸发至2mL左右，转人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿，洗涤液并人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用
5.1.4冰淇淋：称取10g（精确到0.001g）已均匀的试样于烧杯中.加人20g海沙15mL石油醚提取脂肪，提取2次，倾去石油醚，然后在50℃的水浴上挥去石油醚，再加入乙醇-氨解吸液解吸诱惑红，解吸液倒入100mL的蒸发Ⅲ中，直至解吸液无色。将解吸液在水浴上挥去乙醇，使体积约为20mL时，加人1mL硫酸（1十10），1mL钨酸钠溶液沉淀蛋白，放置2min，然后用乙醇-氨调至pH呈碱性，将溶液转人离心管中，5000r/min离心15min，倾出上清液，于水浴挥去乙醇，然后用柠檬酸溶液调pH呈酸性，加人0.5g～1.0g聚酰胺粉吸附色素，将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗涤多次（约200mL），以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇甲酸溶液洗涤1次～3次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-氨水溶液分次解吸色素，收集全部解吸液，于水浴上驱除氨，蒸发至2mL左右，转人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿，洗涤液并人5mL的容量瓶中，用50%的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用。
5.2定性
取层析纸，在距底边2cm起始线上分别点3uL～10uL的样品处理液、1μL诱惑红标准使用液，分别挂于盛有展开剂1、展开剂2、展开剂3的展开槽中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处，将滤纸取出空气中凉干，与标准斑比较定性。5.3定量
5.3.1标准曲线的制备
吸取0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL诱惑红标准使用液，分别置于10mL比色管中.各加水稀释到刻度，浓度分别为0μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6ug/mL、8μg/mL、10μg/mL。用1mL比色杯，以零管调零点，于波长500nm处，测定吸光度，绘制标准曲线。5.3.2样品的测定
取色谱用纸，在距离底边2cm的起始线上，点0.20mL样品处理液，从左到右点成条状。纸的右边点诱惑红的标准溶液1L，依法展开，取出晾干。将样品的色带剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移人10mL的比色管中，加水稀释至刻度，混匀后，与标准管同时在500nm处，测定吸光度。6分析结果的表述
试样中诱惑红含量按式（1）计算：AX1000
×1000
.（1)
式中：
试样中诱惑红的含量，单位为克每千克（g/kg）；测定用样品中诱惑红的含量，单位为毫克（mg）；样品解吸后总体积，单位为毫升（mL）；样品纸层析用体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g)；
1000——换算系数
GB5009.141—2016
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他
取样量为10g时，检出限为25mg/kg。4
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