GB/T 39101—2020 中华人民共和国国家标准 多肽抗菌性测定 抑菌圈法 Determination of antimicrobial activity for polypeptides—Inhibition zone method 发布日期：2020-09-29 实施日期：2021-04-01 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。 本标准起草单位：北京工商大学、河北科技大学、深圳市计量质量检测研究院、河北农业大学、北京萨姆伯科技有限公司、武汉明了生物科技有限公司、浙江东杰生物科技有限责任公司、市场监督管理总局食品审评中心、中国测试技术研究院生物研究所。 本标准主要起草人：贾英民、马爱进、干志新、田益玲、郝帅、彭海、周李华、杨志坚、郑燕燕、郑刚、陈晶、姜雨、杨国武。 1 范围 本标准规定了多肽抗菌性的抑菌圈测定方法（抑菌圈法）。 本标准适用于多肽抗细菌性能和抗丝状真菌性能的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多肽 (polypeptides)：介于氨基酸和蛋白质之间，由2个或2个以上氨基酸通过肽键连接形成的一类化合物。 3.2 抑菌圈 (inhibition zone)：固体培养基表面与试样接触边界处无菌繁殖的环带区域。 3.3 抗菌性 (antimicrobial activity)：抑制微生物繁殖的能力，以抑菌效价U值（AU）来表示。 4 原理 利用多肽在固体平板中与测试指示菌接触后，使其周围的菌株生长受到抑制，形成无菌繁殖区域，根据测试菌在固体平板表面表现出的抑菌圈直径，计算抑菌效价U值来判定活性。 5 试剂或材料 除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，实验用水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 生理盐水：0.85%生理盐水：称取8.5g氯化钠于容量瓶中，用一级水溶解并定容至1000mL。121℃高压蒸汽灭菌20min。 5.2 培养基：营养肉汤培养基（NB）、营养琼脂培养基（NA）、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基（PDA），配制参见附录A。 5.3 指示菌标准菌株： 革兰氏阳性细菌：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CICC 10473（CGMCC 1.8721、ATCC 29213），藤黄微球菌（Micrococcus luteus）CICC 10269（CGMCC 1.3749、ATCC 10240），蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC 10277（CICC 10468、ATCC 11778）。 革兰氏阴性细菌：大肠埃希氏菌（Escherichia coli）CICC 10305（CICC 23657、CGMCC 1.2385、ATCC 25922），鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）CICC 22956（ATCC 14028），铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CICC 10351（CICC 23694、CGMCC 1.2421、ATCC 9027）。 丝状真菌：黑曲霉（Aspergillus niger）CICC 2463（CGMCC 3.5487、CICC 40372、ATCC 16404），产黄青霉（Penicillium chrysogenum）CICC 40654（CGMCC 3.7894、ATCC 10106），桔青霉（Penicillium citrinum）CICC 2478（ATCC 9849）。 6 仪器设备 6.1 恒温培养箱：温度精度1℃。 6.2 电子天平：感量为0.0001g和0.01g。 6.3 分光光度计：波长范围为190nm~900nm。 6.4 游标卡尺或抑菌圈测量仪：精度0.02mm~0.1mm。 6.5 血球计数板：16格×25格或25格×16格。 6.6 玻璃培养皿：直径为90mm，底部平整。 6.7 不锈钢牛津杯：内径6.0mm±0.1mm、外径7.8mm±0.1mm、高10.0mm±0.1mm。 7 试验步骤 7.1 抗细菌性能测定 7.1.1 样品制备 称取多肽样品10.0mg，水溶性好的样品采用无菌缓冲液溶解与定容。