本标准适用于《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》(GB2760)和相关公告允许使用的食品工业用酶制剂。
本标准代替 GB1886.174—2016《食品安全国家标准 食品添加剂 食品工业用酶制剂》。
本标准与 GB1886.174—2016相比,主要变化如下:
———增加了“酶制剂用辅料”“固定化酶制剂”和“固定化载体”的术语和定义;
———增加了酶制剂用辅料和固定化载体的技术要求;
———修改了大肠埃希氏菌的指标要求;
———增加了酶制剂用辅料名单的附录要求;
———增加了附录中部分酶活力测定参考方法。

中华人民共和国国家标准
GB 18B6174-20P4
食品安全国家标准
食品添加剂
20R4020B发布
食品工业用酶制剂
20R40B0B实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局　
本标准代替GB1886174-2016食品安全国家标准本标准与GB186174-2016相比,主要变化如下=食品添加剂
GB 18B6174-20R4
食品工业用酶制剂》。
增加了“酶制剂用辅料”固定化酶制剂和“固定化载体\的术语和定义；增加了酶制剂用辅料和固定化载体的技术要求=修改了大肠埃希氏菌的指标要求增加了酶制剂用辅料名单的附录要求；增加了附录中部分酶活力测定参考方法。1范围
食品安全国家标准
食品添加剂食品工业用酶制剂
本标准适用于食品安全国家标准工业用酶制剂。
2术语和定义
食品工业用酶制剂
GB 1861742024
食品添加剂使用标准》GB2ID)和相关公告允许使用的食品由动物或植物的可食或非可食部分直接提取或由传统选育或经基因重组技术得到的微生物包括但不限于细菌、放线菌、真菌菌种发酵、提取后或再经进一步纯化、制剂化等工艺制得的可含有一个或多个活性酶组分）用于食品工业具有特殊催化活性的制剂产品。2
酶活力
酶在一定条件下催化某一特定反应的活性能力高低的指标。抗菌活性
抑制或杀灭微生物的特性。
酶制剂用辅料
为酶制剂产品的活性保存、流通贮存、标准化使用等目的而加入的食品原料和食品添加剂。固定化酶制剂
利用物理和或北学的方法将酶固定于载体上在食品生产过程中以不可溶解状态发挥作用的产品剂型。
固定化载体
固定化酶制剂中起固定酶作用的材料。3产品分类
按产品形态分为固体剂型含固定化剂型和液体剂型。4技术要求
原辅料要求
用于生产酶制剂的原辅料应符合相关要求在规定的使用条件下不应对最终食品产生有害健1
GB 18B6174-20R4
康的残留污染。
用于提取酶制剂的动物组织应符合肉类检疫要求。用于提取酶制剂的植物组织不应霉变。对微生物生产菌种应进行分类学和遗传学的鉴定并应符合食品安全国家标准食品添加剂使用标准》GB2I)及相关公告。菌种的保藏方法和条件应保证发酵批次之间的稳定性和可重复性。了酶制剂产品的活性保存、流通贮存和标准化使用商品化的酶制剂允许加入必要的辅料成分。酶
制剂用辅料不应在最终食品中发挥功能作用，般按生产需要适量使用在达到预期的目的下尽可能减少使用品种和用量。酶制剂中允许使用的辅料名单见附录A。固定化酶制剂所使用的固定化载体应符合食品安全国家标准食品接触材料及制品用添加剂使用标准》GB9F5》食品安全国家标准用的原料清单的规定。
理化指标
产品酶活力应符合声称。
食品添加剂使用标准》(GB2D)或其他在食品中允许使注=部分酶制剂的酶活力测定参考方法参见附录B。企业可按相应标准中给出的或企业规定的方法测定。污染物限量
污染物限量应符合表1的规定。
表1污染物限量
铅bY(mgkg)
总砷以 As计Y(mgkg)
微生物限量
检验方法
GB511975 或 GB511912
GB511976 或 GB511911
微生物限量应符合表2的规定。其中经基因重组技术得到的微生物生产的酶制剂不应检出生产菌。
表2微生物限量
菌落总数/(FUg或CFUVmL）
大肠菌群/CFUg或CPUVmL）
大肠埃希氏菌/CFUg或CFUmL)
沙门氏菌5g或25mL）
抗菌活性
不应检出
不应检出
检验方法
GB4/892
GB4/893
GB4/893B
GB4/894
微生物来源的酶制剂不应检出抗菌活性抗菌活性按食品安全国家标准食品微生物学检验微生物源酶制剂抗菌活性的测定》GB4/8943)执行。2
酶制剂用辅料名单见表A1。
附录A
酶制剂用辅料名单
柠檬酸
柠檬酸钠
柠檬酸钾
乳酸钠
酶制剂用辅料名单
焦磷酸二氢二钠
焦磷酸钠
磷酸二氢钙
磷酸二氢钾
磷酸氢二铵
磷酸氢二钾
磷酸氢钙
磷酸三钙
磷酸三钾
磷酸三钠
六偏磷酸钠
三聚磷酸钠
磷酸二氢钠
磷酸氢二钠
焦磷酸四钾
焦磷酸一氢三钠
聚偏磷酸钾
酸式焦磷酸钙
冰乙酸名冰醋酸）
乙酸钠名醋酸钠）
氢氧化钙
氢氧化钾
碳酸钠
GB 18B6174-20R4
CNS号
INS号
GB18B6174-20R4
酶制剂用辅料名单
氢氧化钠
氨水(包括液氨）
二氧化硅
硬脂酸镁
硅酸钙
抗坏血酸钙
抗坏血酸棕榈酸酯
抗坏血酸(名维生素C)
抗坏血酸纳
二氧化硫
焦亚硫酸钾
焦亚硫酸钠
亚硫酸钠
亚硫酸氢钠
低亚硫酸钠
苯甲酸
苯甲酸钠
山梨酸
山梨酸钾
丙酸钠
丙酸钙
对羟基苯甲酸甲酯钠
对羟基苯甲酸乙酯
对羟基苯甲酸乙酯钠
聚氧乙烯()山梨醇酐单月桂酸酯名吐温2)聚氧乙烯()山梨醇酐单棕榈酸酯名吐温40)聚氧乙烯の)山梨醇酐单硬脂酸酯名吐温の)聚氧乙烯の)山梨醇酐单油酸酯名吐温8）甘油(名丙三醇)
D-甘露糖醇
微晶纤维素
氨基乙酸名甘氨酸）
CNS号
INS号
酶制剂用辅料名单续）
碳酸钙(包括轻质和重质）
硫酸钙
氯化钙
氯化镁
丙二醇
麦芽糖醇
麦芽糖醇液
山梨糖醇
山梨糖醇液
乳糖醇（名4βD吡喃半乳糖-D-山梨醇）阿拉伯胶
黄原胶(又名汉生胶）
纤维索
氧化镁(包括重质和轻质）
海藻酸钠名褐藻酸钠）
羧甲基纤维素钠
聚葡萄糖
瓜尔胶
磷酸酯双淀粉
氯化钾
硫酸镁
L半胱氨酸盐酸盐
硬脂酸名十八烷酸）
聚乙二醇
乙酸锌
L半胱氨酸
硫酸铵
硫酸钠
硫酸锰
氯化铵
氯化钠
醋酸钙乙酸钙）
GB18B6174-20R4
CNS号
INS号
注=合适的各种食品原料作为酶制剂用辅料不在本表列出。所用食品原料需符合相应的标准。5
GB 18B6174-20R4
部分酶制剂的酶活力测定参考方法部分酶制剂的酶活力测定参考方法部分酶制剂的酶活力测定参考方法见表B1。表B1
部分酶制剂的酶活力测定参考方法序号
t淀粉酶
o乙酰乳酸脱羧酶
β葡聚糖酶
菠萝蛋白酶
蛋白酶(包括乳凝块酶）
果胶酶
过氧化氢酶
木瓜蛋白酶
木聚糖酶
葡糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶）
普鲁兰酶
乳糖酶半乳糖苷酶）
无花果蛋白酶 Fiin
纤维素酶 CdLbre
蔗糖课糖转移酶仅名果糖基转移酶）脂肪酶
转葡糖苷酶
溶菌酶
α乙酰乳酸脱羧酶活力的测定
α乙酰乳酸脱羧酶
参考方法
&淀粉酶制剂》(GB/T244D1》
附录B中B2
葡聚糖酶制剂》(QB/T4B1)
酶制剂质量要求
酶制剂质量要求
第1部分蛋白酶制剂》(GB/T23571）第1部分蛋白酶制剂》(GB/T23571)附录B中B3或碱性果胶酶制剂》(B/T4482)业用酶制剂测定技术导则》(GB/T35B）酶制剂质量要求
第1部分蛋白酶制剂》(GB/T23571）休聚糖酶制剂》(P/T448B)
附录B中B4
业用酶制剂测定技术导则》(GB/T3B)《业用酶制剂测定技术导则》(GB/T35B)第1部分蛋白酶制剂》GB/T23571）酶制剂质量要求
纤维素酶制剂》(QB/T2BB）
课糖基转移酶制剂》(CB/T5357)脂肪酶制剂》(GB/T23535)
附录B中B5
食品安全国家标准
食品添加剂
溶菌酶》(GB186257)
可以与α乙酰乳酸反应脱羧将α乙酰乳酸羧基转化为3羟基2丁酮的酶。α乙酰乳酸脱羧酶活力
在30℃pH60的条件下1g或1mL酶样品与底物α乙酰乳酸发生反应每分钟生成1μmd的3羟基2丁酮偶姻)即为1个酶活力单位以UgUVmL)表示。B
分光光度计法
本方法规定了乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定方法。本方法适用于用分光光度计测定酰乳酸脱羧酶制剂中酰乳酸脱羧酶的酶活力。本方法
不适用于啤酒和其他含醇产品中乙酰乳酸脱羧酶的酶活力的测定。GB1886174-20R4
试样中3羟基2丁酮乙偶姻)和/或双乙酰的存在会使试验结果偏大。乙偶姻在贮存时易形成二聚体从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防本方法仍可使用。
乙酰乳酸脱羧酶与底物乙酰乳酸反应脱羧生成乙偶姻。乙偶姻在碱性条件下与萘酚和肌酸的混合物反应生成红色产物。通过在52m下测定溶液的吸光度可以从乙偶姻标准曲线上得出反应生成的乙偶姻的量进而计算出α乙酰乳酸脱羧酶的酶活力。B
试剂和材料
除特殊说明外所用的试剂均为分析纯水均为符合GBT6i2中规定的二级水。偶姻 6羟基-2-丁酮>ECHsC0CH OH)CHs CAS 号 5138601纯度 ≥95或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
MESZ6gL)氯化钠(5CE4g/L>聚氧化乙烯十二烷基醚 ( 2 mL/L)缓冲液 分别称取2-N 吗啉代基磺酸 é-N-marphdioltarebricaid MEs>B80g和氯化钠1532g于烧杯中用约45L水溶解然后加入15的聚氧化乙烯十二烷基醚溶液7①mL搅拌均匀用约1mdL氢氧化钠溶液调节pH至6±OC5。然后移入5mDmL容量瓶中用水定容搅拌均匀。该溶液在常温(5℃～2℃)下的保存期为1周。B
α-乙酰乳酸底物 mL/L)吸取乙基2乙酸基2甲基乙酰乙酸1μL于mL容量瓶中加入约05DmdL的氢氧化钠溶液60mL振摇2min后加入缓冲液到约400mL用约1mdML盐酸调节溶液的pH至6CD+OC5。然后再用缓冲液定容。该溶液使用前配制。蘑酚(00gLY肌酸 (0grL)显色剂 分别称取 1萘酚 50g和肌酸O5g移入5DmL 容量瓶中 用约1mdL的氢氧化钠溶液溶解并定容。该溶液使用前配制。配制时需避光并且冰浴。警告1萘酚可燃有毒。对眼和黏膜有刺激性。吞咽或经皮肤吸收都能引起中毒。逐偶姻储备液(mDgL)取一定量的乙偶姻于试管中在3℃恒温箱中溶解。然后将试管置于冰水中使乙偶姻重结晶。重结晶后乙偶姻不含有影响试验结果的乙偶姻二聚体可用于储备液的配制；称取重结晶后的乙偶姻0Dg精确至0mD1g移入1mmL容量瓶中用水溶解并定容。注=乙偶姻对热不稳定，且容易吸潮因此需放置在干燥器中冷藏台℃～6℃)保存。如发现物质有明显的吸潮现象建议放弃不用。该溶液在冷藏条件下的保存期为1周。BbzxZ.net
乙偶姻标准溶液用乙偶姻储备液和水按照表B2稀释而成该溶液应每天配制。表B2乙偶姻标准溶液
标准点
乙偶姻储备液/mL
a用水做第一个标准点。
水/mL
稀释倍数
乙偶姻／(mgL）
GB1886174-20R4
仪器和设备
分析天平精度为oam1g
pH 计精度为001。
B2343 恒温水浴锅3D℃±O1℃。分光光度计河在52m下测定吸光度。B
计时器。
涡旋振荡器。
分析步骤
乙偶姻标准曲线的制备
分别吸取配制好的乙偶姻标准溶液4DμL于6个不同的10mL试管中。然后按表B2依次在每个试管中加入显色剂4DmL用涡旋振荡器充分混合均匀。室温下反应400min后使用分光光度计在52m下测定各管溶液的吸光度。B
标准对照品的制备
建议使用一个有代表性的、稳定的样品作为标准对照品。在每次分析中将该标准对照品与样品一同进行检测以判断试验的重复性。样品溶液的制备
从样品中称取一定量的样品精确至OmD5g-用溶液稀释。其稀释的倍数要使样品的最终吸光度H,落在乙偶姻标准曲线的范围内。B
标准曲线的绘制
以52m波长下的吸光度为Y轴，乙偶姻的浓度mg/L)为X轴绘制标准曲线计算出标准曲线的斜率h或用回归方程计算）
将试样溶液和底物先置于30℃水浴中预热约10min吸取酶样品溶液2D0L于30℃±01℃水浴中的10mL试管里然后加入底物2D0山L,立即计时并用涡旋振荡器充分混匀迅速放回水浴中。反应20min后依次向试管中加入显色剂4①mL用涡旋振荡器充分混匀。置于室温重新开始计时。反应400min后使用分光光度计在52m波长下测定各管溶液的吸光度。同时用缓冲液代替试样溶液进行空白试验。
结果计算
α-乙酰乳酸脱羧酶制剂的酶活力X1 单位为Ug(UmL)按式B1)计算 =X1:
式中=
样品的吸光度；
(H1 - H2)×01 1351×F1
空白的吸光度；。
00D1 135 1-
-01g的乙偶姻所对应的摩尔数；8
..(B1)
样品溶液反应前的总稀释倍数；一试料的质量单位为克9);
标准曲线的斜率。
样品的测定结果用算术平均值表示。GB 18B6174-20P4
当结果小于1 Ug( UmL)时给出 1位有效数字当结果大于或等于 1 Ug( UmL)且小于1mUg(UmL)时给出2位有效数字当结果大于或等于1mUg(UmL)时给出3位有效数字。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。
全自动生化分析仪法
本方法规定了乙酰乳酸脱羧酶活力的测定方法。本方法适用于用全自动生化分析仪测定酰乳酸脱羧酶制剂中酰乳酸脱羧酶的酶活力。本方法不适用于啤酒和其他含醇产品中α乙酰乳酸脱羧酶酶活力的测定。本方法的检测限为06g(mL)
试样中3羟基2丁酮(乙偶姻)和/或双乙酰的存在会使试验结果偏大。乙偶姻在贮存时易形成二聚体从而影响试验结果。但若遵循配制步骤中所述的措施去预防本方法仍可使用。
乙酰乳酸脱羧酶与底物乙酰乳酸反应脱羧生成乙偶姻。乙偶姻在碱性条件下与萘酚和肌酸的混合物反应生成红色产物。通过在510mm波长下测定标准溶液的吸光度绘制出标准曲线对照标准曲线进一步计算出酶样品的活力。B
试剂和材料
MES76g/L)氯化钠(C4g/L)聚氧化乙烯十二烷基醚( mL/L)缓冲液=见α乙酰乳酸底物mL/L)现B2333
萘酚 %oogL肌酸 (ogL显色剂 现B2334°仪器和设备
全自动生化分析仪
自动生化分析仪要求带有进样系统、搅拌系统、温度控制系统3℃±O2℃和检测系统。检测系统要求可在510m波长处用动力学法检测吸光度变化时间间隔最少18s建
底物保温周期如下
温度3℃；
时间2480s
底物=
酶反应周期如下=
温度3℃=
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