DB12/T986—2020 豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素的测定 液相色谱-串联质谱法

前言
本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。主要起草人：李娜、邵辉、林宏芳、刘磊、李辉、张玉婷、郭永泽、卢娜、绳慧珊、梁静。

1 范围
本标准规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素残留量的测定-液相色谱串联质谱法的方法提要、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、灵敏度、准确度和精密度。本标准适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素单个或混合物残留量的测定。

2 规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 方法提要
试样经酸化乙腈提取，提取液浓缩、甲醇定容后，用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定，基质外标法定量。

4 试剂和材料
4.1 基本要求
除另有说明外，所用试剂均为析纯。所用水为GB/T 6682规定的一级水。
4.2 乙腈：色谱纯。
4.3 甲醇：色谱纯。
4.4 甲酸：色谱纯。
4.5 6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素标准品纯度>98.0%。
4.6 标准溶液的配制
4.6.1 标准储备溶液（200mg/L）：准确称取各种标准品10mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至50mL，-18℃避光保存，有效期6个月。
4.6.2 混合标准溶液：分别吸取一定量各种农药标准储备液于50mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L的混合标准溶液，0~4℃避光保存，有效期1个月。
4.6.3 基质匹配标准工作溶液：用空白豆芽基质配制浓度分别为0.005、0.02、0.05、0.2、0.5、1.0mg/L的系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪分析，现用现配。

5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）
5.2 分析天平：感量0.0001g和0.01g
5.3 台式高速离心机：转速不低于4000r/min
5.4 匀浆机
5.5 涡旋混合器
5.6 旋转蒸发仪
5.7 纯水仪

6 试样制备与保存
样品用四分法缩分出适量，经匀浆机捣碎，分取两份试样，装入清洁容器内，密封并标记。一份作为检样，一份作为留样，于-18℃保存。

7 测定步骤
7.1 样品前处理
准确称取捣碎的试样5.00g（精确至0.02g）于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙腈，于涡旋混合器上涡旋2min，加入0.4mL甲酸，再涡旋2min，4000r/min离心5min，上清液转移至100mL梨形瓶中，于40℃条件下旋转蒸发至约2.5mL，转移至刻度试管中，用甲醇定容至5mL，过0.22μm有机滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。
7.2 仪器测定
7.2.1 液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Acquity BEH C18柱（2.1×50mm）
流动相：A相：乙腈；B相：0.1%甲酸水
梯度洗脱条件见表1
进样量：10μL
柱温：30℃

表1 梯度洗脱条件
时间(min) | V(%) | K(%)
0 | 10 | 90
3 | 90 | 10
4 | 90 | 10
5 | 10 | 90

7.2.2 质谱参考条件如下：
电离模式：电喷雾电离(ESI)
毛细管电压：3.0kV
离子源温度：120℃
脱溶剂气温度：400℃
脱溶剂气流量：600L/hr
锥孔反吹气流量：60L/hr