ICS 01.040.67 X 60 安徽省地方标准 DB34/T2560-2015 窖泥微生物群落结构快速定量测定 PSP-qPCR 绝对定量法 Quickly detection method to quantify pits mud microbial communities PSP-absolute qPCR method 2015-12-30 发布 安徽省质量技术监督局 发布 2016-01-30 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 的规定起草，由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。起草单位包括安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、哈尔滨工业大学。主要起草人：何宏魁、周庆伍、李安军、刘国英、余秀娟、汤有宏、葛向阳、张会敏、蒋军、聂加燕。 1 范围 本标准规定了一种基于门特异性引物测定窖泥微生物群落结构组成的快速定量优化方法，适用于窖泥中微生物群落结构的快速定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件对本标准的应用为必不可少： - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 门特异性引物 (phylum-specific primers, PSP)：指特异性扩增某个门的所有微生物基因序列所共有且相对于其他门的微生物基因序列所独有的引物对，由一条正向引物（5’→3’）和一条反向引物（3’→5’）组成。 3.2 荧光定量 PCR (quantitative PCR, qPCR)：又称 real-time PCR，指荧光反转录-聚合酶链反应。 3.3 Ct 值 (cycle threshold, Ct)：指 PCR 反应体系中目标 DNA 浓度达到人为设定的值时所需的 PCR 循环次数。 3.4 TA 克隆 (TA Clone)：一种依赖 DNA 链两端腺嘌呤 (A) 和胸腺嘧啶 (T) 互补作用的亚克隆方式，在连接酶存在下，将不同 DNA 链连接。 4 原理 本方法基于门特异性引物进行荧光定量 PCR，实现对窖泥微生物群落结构的快速绝对定量检测。