ICS 07.100.30 B20 DB22 吉林省地方标准 DB22/T2053-2014 饲料中构巢曲霉测定实时荧光PCR方法 发布：2014-02-28 实施：2014-04-30 吉林省质量技术监督局 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001规则起草，由吉林省质量技术监督局提出并归口。起草单位包括吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。主要起草人包括史艳宇、刘金华、王莹、郎乐、张庆波、韩冰雪、李媛媛、王庆峰。 1 范围 本标准规定了饲料中构巢曲霉的实时荧光PCR检验方法，适用于饲料中构巢曲霉的快速筛选检测。 2 规范性引用文件 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T 13092 饲料中霉菌总数的测定 - GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 3.1 实时荧光PCR (real-time fluorescent PCR)：在PCR反应中加入荧光基团，通过荧光信号实时监控PCR进程，对未知模板进行定性或定量分析。 3.2 Ct值 (cycle threshold value)：循环阈值，用于判定PCR反应结果。 4 原理 对饲料样品进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察荧光增幅曲线，从而快速检测饲料中的构巢曲霉。 5 试剂 除特别说明外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682一级水标准，并在无DNA酶污染的容器中分装。 5.1 引物及探针 上游引物：5'-GGCTACACCGAGGACGACAT-3' 下游引物：5'-CCCGCCTTAGCATCGAAGA-3'