ICS 65.020.01 B20 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T2339-2014 百合鳞片组织培养扩繁技术规程 发布：2014-07-05 实施：2014-09-05 辽宁省质量技术监督局 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009规则编写，由沈阳市质量技术监督局归口。起草单位为沈阳市农业科学院、铁岭市农产品质量安全检验检测中心。主要起草人包括李明艳、迟东明、左丽君、岳玲、宋伟、果朋忠、马东梅、李金凤、张家旺、徐丹、姚斌。 1 范围 本标准规定了辽宁省百合鳞片组培生产环境的消毒灭菌、培养条件调控以及组培苗的接种、继代、生根、移裁等技术操作程序，并对生产及试验设备、设施提出具体要求。适用于辽宁省百合组培苗工厂化生产。 2 规范性引用文件 - GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 - GB 4285-89 农药安全使用标准 - GB/T 8321 农药合理使用准则 - NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 定义 3.1 植物组织培养：从植物体分离所需器官、组织或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养，以获得再生植株或其他经济价值产品。 3.2 植体：从活植物体上切取的用于培养的器官、组织或细胞、原生质体。 3.3 培养基：供植物外植体存活和生长所需的介质，通常包括水、无机盐、有机物、凝固剂、糖及植物生长调节物质。 3.4 初代培养：接种外植体后继代培养之前的首次培养。 3.5 继代培养：对初代培养获得的芽或原球茎进行分离切割、更新培养基，使培养材料数量增加，并得到无根幼苗。 3.6 生根培养：将无根幼苗转接到生根培养基中诱导生根，培养成生根苗。 3.7 炼苗：在保护设施中，通过逐步通风、控温、遮光等措施，使幼苗适应外界环境。 4 生产设备及化学试剂 4.1 建筑设施：组培实验室或小型组培工厂应选环境优静、无污染地点，配置合理，包括准备室、接种室、培养室、洗涤室、实验室、贮存室、温室，可附办公室、更衣室等。 4.2 洗涤设备：工厂化生产可用自动或半自动洗瓶机，实验室或小型车间可用普通洗涤用具，如水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱，人工洗涤，并配干燥箱、晾瓶架。 4.3 灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅（大型卧式、中型立式、小型手提式）、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微滤孔器。 4.4 灭菌剂：酒精、氯化汞、次氯酸钠、高锰酸钾、甲醛、过氧乙酸、新洁尔灭、来苏水、抗菌素等。 消毒措施：洗涤室每天用来苏水或过氧乙酸喷洒地面；接种室接种前用紫外灯照射20-30分钟，并定期用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸；培养室一般每7天用高锰酸钾和甲醛混合蒸或用70%酒精喷洒，也可用广谱杀菌烟雾剂；超净工作台接种前照射紫外灯20-30分钟，并用70%酒精或新洁尔灭擦拭，定期清洗过滤膜。 培养基消毒：高温高压蒸汽消毒，通常压力1.1kg/cm²、温度121℃；污染的瓶苗消毒后清洗培养容器。 6 初代培养 取鳞茎外向内第2-5层鳞片，流水冲洗30分钟后用0.2%-0.5%洗衣粉水浸10分钟，清洗干净。75%酒精灭菌30秒，再用0.1%汞溶液浸泡8分钟，中间不断摇动，最后用无菌水冲洗5-6次。沿鳞片周围切去1mm，选取外层下部与鳞茎盘相连部分，横切约1.0cm的小块作为外植体。 接种：将无菌鳞片小块接种到MS培养基（含2.0mg/L BA + 0.2mg/L NAA），置于25±2℃，光照9-10小时，光强1200 lx条件下培养。接种2周后，约98%的鳞片切块在近轴或边缘诱导不定芽，4周后形成中间轴小鳞茎，基部出现粗壮根。