GB/T 9695.16-1988 肉与肉制品 四环素族抗生素残留量检验 GB/T9695.16-1988 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
肉与肉制品四环素族
抗生素残留量检验
Meat and meat products-Method forthe examination of the resldues of tetracyclines主题内容与适用范围
本标准规定了肉和肉制品中四环素族抗生素残留量的检验方法。本标准适用于肉和肉制品中四环素族抗生素残留量的检验。引用标准
GB9695.19肉与肉制品取样方法
3原理
GB/T9695.16-88
四环素族(四环素、土霉素、金霉素)抗生素具有很强的抑菌作用。在接有特定微生物的平板培养基上放入牛津杯,在牛津杯内加满试样溶液，培养后测量抑菌圈的大小。4试剂与培养基
4.1试剂：
4.1.1磷酸盐缓冲液(pH4.5)：精确称取磷酸二氢钾(GB1274,分析纯）13.6g,溶解于蒸馏水中，定容到1000mL，高压灭菌115℃，30min，冷却后置4℃冰箱内保存。4.1.2生理盐水称取氯化钠（GB1266)8.5g溶解于1000mL蒸馏水中，高压灭菌115℃，30min。
4.1.3盐酸(GB622)：0.1mol/L溶液。4.1.4标准四环素原液：精确称取四环素50mg，用0.1mol/L盐酸1mL溶解,用水定容到1000mL，在4℃冰箱中可保存一周。4.2培养基：
4.2.1菌种培养基：
胰蛋白陈
牛肉膏
氯化钠(GB1266)
蒸馏水此内容来自标准下载网
14.0~16.0g
1000mL
将以上成分加热溶解，高压灭菌121℃15min最终pH6.5土0.1。4.2.2检定用培养基：
胰蛋白陈
牛肉膏
酵母膏
蒸馏水
14.0~16.0g
1000mL
将以上成分加热溶解，高压灭菌121℃15min,最终pH5.8土0.1。仪器和设备
5.1培养血：内径90mm,底部平整光滑，具陶质盖。5.2牛津杯：内径6±0.1mm，外径7.8±0.1mm，高度10土0.1mm。5.3游标卡尺：测量抑菌圈直径用。5.4均质器。
5.5离心机。
5.6恒温水浴。
5.7恒温培养箱。
5.8电热干烤箱170土0.1℃。
6试样
6.1按GB9695.19取样。
6.2至少取有代表性试样200g，用绞肉机绞2次混匀，放在封闭容器中干冰箱内贮存备用，试样要尽快分析。
7分析步骤
7.1检样液的制备
称取试样10.0g，加入0.1mol/L磷酸缓冲液20mL小心搅匀放置60min。然后于均质器中
均质(3000～6000r/min）1min,经4000r/min离心10min,其上清液为检样液。7.2菌液和检定用平板的制备
7.2.1菌液的制备
菌种：蜡样芽孢杆菌(BaccereusATCC11778)由卫生部药品生物制品检定所提供。将菌种移种于盛有300mL菌种培养基的克氏瓶中，于30℃培养箱中培养7天。镜检芽孢数达到85%以上，用生理盐水25mL洗下菌苔，置65℃恒温水浴中加热30min，离心(2000r/min）20min,弃去上清液，如此重复洗涤芽孢悬液三次。再置于65℃恒温水浴加热30min，然后取生理盐水50mL制成芽孢悬液。置4℃冰箱中可保存一个月。7.2.2蜡样芽孢杆菌悬液用量的测定在实际检定前先试几个平板，即把不同浓度的芽孢悬液加入检定用培养基中，使0.05μg/mL浓度的标准四环素溶液可产生12mm以上的清晰、完整的抑菌圈作为最适芽孢用
量。一般用量为每100mL检定用培养基内加芽孢悬液0.51.0mL,1.0mL菌悬液中含芽孢数
约为10**6。
7.2.3检定用平板的制备
将适量芽抱悬液加入溶化后冷却至55～60℃的检定用培养基中混匀。每个平血内加入培养基6mL,前后摇动平血,使含有芽孢的检定培养基均勾覆盖于平血表面,置水平位置上盖上陶质盖，待冷凝固后，于每个平板的培养表面放置6个牛津杯，使牛津杯在半径为2.8cm的圆面上成60度角的间距。所用平板须当天制备。7.3检定
7.3.1标准曲线的绘制
四环素稀释液：取原液用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液稀释成0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800μg/mL的标准溶液（当天用当天稀释)。取检定用平板18个,分成6组，每组3个平板作为平行试验。第一组于每个平板的6个牛津杯中分别加满0.025μg/mL的标准溶液作为对照组。第二到第六组于每个平板上的6个
牛津杯中，间隔加满0.200ug/mL的标准溶液作为参考。各组余下的牛津杯，根据组别顺序依次加满0.050、0.100、0.200、0.400、0.800ug/mL的标准溶液，经培养后，以各组抑菌圈直径的校正平均值绘制标准曲线。抑菌圈直径校正值(mm)等于2～6组(0.200ug/mL)抑菌圈直径的平均值减去各组抑菌圈直径平均值。用此校正值校正0.050、0.100、0.200、0.400、0.800ug/mL标准溶液的抑菌圈直径平均值。校正后的值，包括0.200μg/mL浓度的平均值在半对数坐标纸上作图，以抑菌圈直径为横坐标(算术级),以浓度为纵坐标(对数级),通过下列公式绘出标准曲线L= (3a+2b+c-e)/5
H=(3e+2d+c-a)/5
式中：L—标准曲线的最低浓度的抑菌圈直径；a、b、e相应浓度是0.050、0.100、0.800ug/mL。
H——标准曲线的最高浓度的抑菌圈直径；a、d、e相应浓度是0.050、0.400、0.800uμg/mL。
一参考浓度(0.200μg/mL)的45个抑菌圈直径的平均值。7.3.2试样中四环素族抗生素残留量的检定每份试样取3个检定用平板，在每个检定用板上，间隔的3个牛津杯内加满四环素标准参考浓度溶液。另外3个牛津杯加满被检试样液，将陶质盖重新盖好，置30土1℃培养箱中培养17土1h。除去牛津杯翻转平板,精确的测量产生的抑菌圈直径精确到0.1mm)。分别求出3个检定用平板上参考浓度和被检试样抑菌圈直径数值校正后，从四环素标准曲线上查出被检试样中四环素的含量。8检定结果的计算
从标准曲线上查出被检试样液的抗生素残留量,乘以稀释倍数,结果以mg/kg计算。附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。本标准主要起草人裴显庆、张纯。中华人民共和国商业部1988-02-25批准1989-03-01实施
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