本标准规定了海洋生物调查的技术要求、采样、分析及资料整理等内容和方法。本标准适用于海洋环境基本要素调查中的海洋生物调查。 GB/T 12763.6-1991 海洋调查规范 海洋生物调查 GB/T12763.6-1991 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了海洋生物调查的技术要求、采样、分析及资料整理等内容和方法。本标准适用于海洋环境基本要素调查中的海洋生物调查。

中华人民共和国国家标准
调查规范
生物调查
The speciflcation for oceanogrephic surveyMarine biologicel survey
1主题内容与适用范围
GB 12763.6—91
本标准规定了海洋生物调查的技术要求、采样、分析及资料理等内容和方法。本标准适用于海洋坏境基本要素调查中的海洋生物调查。2引用标准
GB 2014蚕丝、合纤筛网技术要求GB12763.1海洋调查规范：总则
GB12763.7海洋调查规范海洋调查资料处理3本语符号
3.1叶绿素
叶绿素是自养植物细胞中·-类很重要的色素，是植物进行光合作用时吸收和传递光能的主要物质。叶绿素 a是其中的主要色素。Chla 表示海水中的叶绿素 a。3.2初级生产力
单位时间内，单位体积海水中(或单位面积海区内)浮游植物同化无机碳的能力。3.3生产力指数
单位时间内，单位叶绿素a同化无机碳的能力。3.4微生物
一群个体微小、结构简单、生理类型多样的单细胞或多细胞生物。3.5细菌异养生长速率
异养细菌利用有机物进行生长繁殖的速率。3. 6 细菌异养活性
异养细菌进行生理代谢活动的能力。3.7浮游生物
缺乏发达的运动器官，运动能力很弱，只能随水流移动，被动地漂浮于水层中的生物群。3.8底栖生物
生活于海洋基底表面或沉积物中生物的总称。依个体大小，凡被孔宽为0.5mm套筛网目所阻留的生物，称为大型底栖生物。凡能通过孔宽为0.5mm套筛网目，而被孔宽为0.042mm所阻留的尘物，称为小型底栖生物。
国象技术监督局1991-03-22批准1992-01-01实施
:com3.9污揽生物
GB12763.691
生活于船底及水中切设施表面的生物，这类生物一般是有害的。3.10游泳动物
具有发达的运动器宜，能白由游动，普于更换栖息场所的一类动物的总称。第一篇一般规定
技术设计
根据调查任务进行技术设计，共内容包括设站、项目、内容、方法、时间、次数、预期成果、专业配备、人员素质，船只及器材设备。应特别注重海采样和室内分析的技术要求和保证措施。5调查要求
5.1调查项目
5.1.1叶绿素和初级生产力
5.1.2微生物
5.1.3浮游生物
5.1.4大型和小型底栖生物
5.1.5污损生物
5.1.6游泳动物
5. 2辅助参数
海洋生物调查时，应视需要确定与其有关的专业参数，并同步进行观测。5.3调查方式
5.3.7大面观
5.3.2断面观测
5.3.3连续观测
5.4采样方法
5. 4. 1采样
适用于叶绿素浓度和初级生产力、微牛物，浮游植物等项采样。按规定水层采样（见表1)表1来样层次
水深范围
100-200
标准次
表层510房层
表层5102030底层
表层510203050
75底层
75100150
表层510203050
注：@表层指海而下0.5m深度以内的水层。②水深小于50m时，底层为离底2㎡的水层。③水深在50～200时，底层离底的距离为水深的4%。5.4.2拖网
适用于浮游生物、底栖生物和游泳动物等项采样。5.4.3采泥
底层相郭标推
层的最小距离
适用于微生物.底栖生物采样。
5.4.4挂板和水面或水中设施上采样适用于污损生物采样。
5.5调查时问
5. 5. 1逐月调查。
GB 12763. 6 --91
5.5.2季度调查，一般是2月（冬），5月（春），8月（夏），11月（秋）。各季调查的时间间隔应基本相等。如有特殊要求应酸情增加调查次数，5.5.3在远离我国海区，调查时间应按实际情况确定。5.6定位要求按GB12768.1有关规定。5.7山海准备
海上所需物品，均应计算实用量和备用量，安装仪器设备，存放工具器血，以安全方便为原则。6主要仪器设备
6.1海洋牛物调台和分析，主要有采水器，底质采样器，荧光计，分光光度计，液闪计数仪，各种网具及附件,生物分类鉴定、计数测定、称量器械，离心、十燥、冷藏、烘干等设备。仪器设备及标物质和试剂按GB12763.1的有关规定。6.2调查船
6.2.1实验室
6.2.1.1般实验室
适用于淬游生物、底栖生物、污损生物和游录动物等样品处理，分析。6.2.1.2放射实验室
适用于初级生产力和微牛物样品应用+C和H进行分析测定，要求具有通风和放射性防护设施。放射实验室与接触C和\H的仪器都必须具有明显标志，并定期检测放射强度。6.2.1.3微生物实验室
适用于微生物样品的处理，并应具备无荫设施。6-2.2其他设施
6.2.2.1绞纲机，钢丝绳，起网币杆，双拖网或单拖网（含板网架）及探鱼仪等，均需适应游泳动物拖网的要求
6.2.2.2动力绞车、钢丝绳、吊杆、海（淡）水源、工作电源，甲板工作空间和场所等条件，均需满足各专业要求。
了采样
7.1采样要求
7.1.1采样位置
应避调查船的排污口。
7.1.2深水样
使用调查项目规定的采水器采水，入水前应检查采水器是否关闭，准确放至预定水层，严守停滞时间。按要求取样、处理。
7.1.3拖网采样
使用专业规定的网具采样，严格起、落网速度，准确判断网其到达颅定水层。拖网时注意工作状态是否正常，遇常应即采取有效措施。认真冲洗网具，收集样品，严禁标本带。7.1.4采底质样
使用项月规定的采样器采样，严守操作程序,注意采样器的工作状态。按要求取样和处理。发现异常应重采。
7.1.5挂板和水中设施上采样
GB 12763. 6—91
按计划要求制板，正确选挂板地点、采样设施和挂板方式。严格取板、采样时间、样品处理。7.2记采
按GB12763.1有关规定记录。遇异常现象或新发现，除记录外还应现场拍照或录相。7.3采样工具、设备的要求
按GB12763.1有关规定。
8样品分析
8.1样品处理
各颈目采得的样品，应按专业票求处理，8.2样品测定
要测定的样品，应按专业要求测定。8.3鉴定、计数
主要种类.除微生物外一般应鉴定到种，并按专业要求计数。8.4样品保存
分析、测量、鉴定后的样品，可依资料分析、应用程度和学术价值，确定全部或部分保留。保留样品应按要求保管。
9资料整理及编写报告
9.1资料整理
9.1.1计算、统计
鉴定，计数及测定结果，按规定公式和格式进行计算、统计。9.1.2填荐表格
各类计算，统计结果，按要求填写表格戴卡片。9.1.3绘制图表
有关数据资料形成后，根据要求绘制舒式图表。9.1.4填写报表
按GB12763.1的有关规定，填写各类报表。9.2编写报告
9. 2. 1航欣报告
每航次海上谢查完成后，技术负责人应按GB12763.7有关规定编写航次报告。9.2.2调查成果报告
调查任务完成后，技术负责人应按GB12763.」有关规定编写海洋调查成果报告。9.3资料归档、验收及成果鉴定
按 GB 12763.1有关规定。
第二篇叶绿素和初级生产力测定10技术要求
10.1叶绿索和初级生产力测定包括叶绿素a和初级尘产力测定。10.2叶绿素a测定
10.2.1采样层次
见等~箭表1。
10.2.2精密度
GB 12763. 6—91
叶绿素a浓度在0.5mg/m*水平时，重复样品的相对误差为土10%。10.3初级生产力测定
10-3.1采样层次
按光学深度，在光强为表层的100%，50%、30%，10%，5%和1%的深度上采水样，特殊情况可规要求而定。
10.3.2测定范围
0.05~100mg/(m.h).
10.3.3精密度
初级生产力在30mg/(m2·h)水平时，重复样品的相对误差为士10%。（培养3h，加185kBg放射性\c)
11海水中叶绿素(萃取荧光法)测定11.1方法原理
叶绿素a的丙酮萃取液受蓝光激发产生红色荧光，过滤定体积海水所得到的浮游植物用90%丙酮提取其色紊，使用荧光计测定提取液酸化前后的荧光值，计算出海水中叶绿素的浓度。11.2主要仪器设备
11. 2. 下 荧光计
激发光波长 450mm，发射光波长685nm。11.2.2抽滤装置
包括滤器，支架、抽撼瓶和真空泵。11.2.3玻璃纤维滤膜
其截留效率相当于 0. 65 um 孔径的聚碳酸酮微孔癌膜。11.2.4冰箱
11.3试剂
11.3.190%(V/V)丙酮
11.3.210%(V/V)盐酸
11. 3. 3碳酸镁减 p(MgC0a) =10 g/dm11.4测定步骤
11.4.1荧光计校准
11.4.1.T至少每半年校准一次。11. 4. 1. 2标准叶绿紊 a 溶液(p=1 mg/dm\)制备过滤定量的生长良好，处于指数生长前期的培养硅藻，用90%丙酮提取其叶绿紊，或者用90%丙酮溶解一定量的市售叶绿素 a 结晶,浓度大约为 p=1 mg/dm。11. 4. 1. 3标推叶绿紊 a溶液液度标定使用分光光度计正确测定标准叶绿素日溶液的浓度。11. 4. 1. 4叶绿素 a 标准工作溶液配制用上述标难叶绿素a溶液配制浓度不同的标准工作溶被，供各量程档校准用。11. 4. 1. 5换算系数 F。的确定上述不同浓度的标准工作溶液，在不同世程档上进行酸化前后荧光值的测定。各量程档的换算系数Fa的计算公式：
中： F-
GB 12763.6—91
量程档\d\的换算系数，m/m*；p(chla)
p(Chla）叶绿素a的标准工作溶藏的浓度，mg/m；R,酸化前的荧光值;
R2酸化后的荧光值：
11.4.2水样测定
11.4.2.1采样
按第-篇表1规定的深度采样，并记录于海生表](见附录G)。11.4.2.2过滤
采样后，应尽快过滤。过滤海水的体积视谢查海区而定，水深小于200m海区取20～100cm，大于200m取100~250cm水样过滤前，加入1~2cm碳酸镁溶液，过滤时抽气负压应小于50kPa，记录于海生表2（见附录G）。
11. 4.2.3提取
将载有浮游植物的滤膜放入加有10cm90%丙削的提取瓶内，盖紧，摇荡，立即放于低温（≤0℃）冰箱内，提取12~24h。
11.4.2.4荧光测定
测定步骤如下：
取出样品放在室温、黑暗处约0.5h，使样品温度与室温一致！b.
每批样品测定前后，以90%丙酮作对比液.测出各量程档的空白荧光值Fm和Fz；将提取瓶内上清液倒入测定池中，选择适当量程档，测定样品的荧光值路：加1滴10%盐酸于测定池中，30s后测定其荧光值R将结果记录丁海牛表3(见附录G)。12资料整理
12.1数据计算
12. 1. 1 计算海水中叶绿素 a液度F) -(R-- R.) . V)
式中：p.(Chla)一—海水中补绿素 a浓度,mg/m\s基程档\d\的换算系数，mg/rm*—酸化前荧光值;
R。—酸化后炎光值
V,-提取液的体积.cm\
V：过滤海水的体积,cm。
12. 1. 2 计算水柱叶绿素 a含量A(Chla)
式中：o-
p.(Chla) + Pa+(Chla) . (D-1 = D)2
水柱叶绿素a含量.mg/m;
Pm(Chla)-
第：层叶绿素a浓度，mg/m
D,———第i层的深度,ml
取样层次数；
x -。
12. 1. 3计算水柱叶绿素a 平均浓度值GB12763.6—91
pchla)
p,(Chla)-
式中：p(Chla)—水柱叶绿素a平均浓度值,mg/m，A(Chla)水柱叶绿素a含量，mg/m2;D
一最大取样深度，m。
12.2填写海生表7(见附录G)。
12.3绘制分布图
12.3.1平面分布图
12.3.1.1各层次分布图
等值线取值标准，0.10.0.20,0.30,0.50,0.75,1.00,1.50,2.003.00,5.00.10,00mg/m12.3.1.2含量分布图
等值线取值标准，1.00,1.50,200,3.00,5.00,10.00,20.00,30.00.50.00,100.00,200.00，300.00,500.00 mg/m。
12.3.2断面分布图
等值线取值标准，0.10,0.20,0.30,0.50,0.75.1.00，1.50,2.00,3.00,5.00，10.00mg/m。12.3.3以上取值标准，可规具体情说增减。13海洋初级生产力(1\C示踪法）测定13.1方法原理
一定数最的放射性磁酸氨盐H\CO-或碳酸盐1+CO加入到已知二氧化碳总浓度的水样品中，经一段时间培养，测定浮游植物细胞内有机1C的量，即可计算浮游植物通过光合作用合成有机碳的盘。13.2主要仪器设备
13.2.1水下光量子仪水下照度计或透明度盘。13.2.2样品培养箱或培养瓶罩
用中性衰光材料，将光减为100%，50%，30%，10%，5%和1%。13.2.3抽滤装置
见 11, 2. 2 条。
13.2.4滤膜
见 11. 2. 3 条或孔径为 0. 65 μm的纤维素酯微孔滤膜。13.2.5液体闪烁计数仪
13.2.6通风橱
13.2.7振满器
13.3试剂
13. 3. 1 过滤海水
用调查海区的海水，经玻璃纤维或纤维索酯微孔滤膜过滤.盛于十净的试剂瓶和洗瓶中备月。13.3.21C工作溶液
GB 12763. 691
用过滤海水稀释1*c贮备液，使放射性强度约为1850kBq/cm，或视要求而定。13.3.3闪烁液
13.3.4测总计数闪烁液
每10cm\闪烁液中加0.2cm(V/V）苯乙胺。13. 3. 50. 1 mol/dm 盐酸
13. 4测定步媒
13.4.1萃灭校正方程的确定
用-一系列（一般6个）\C萃灭标准瓶，在液闪计数仪上测定。用直线回归法得出道比求效率的方程。13.4.2采样深度的确定
使用水下光量子仪或照度计，测定水柱中不同深度的光辐射强度，或者用透明度盘测定海水的透明度，确定采样的光学深度。
13.4.3水样测定
13. 4. 3. 1采样
按预定深度采样，并记录好游生表2（见附录G）。采样时应使用不透光和没有钢制部件的采水器：水样避免阳光直接照射。
13.4.3.2水样分装
采样后，尽快在弱光下，将水样经孔径为180um左右的筛绢过滤，分装至培养瓶。培养瓶必须清洗干挣，并经2%（V/V）稀盐酸没泡24h以上。每层样品应包括两个白瓶和-个黑瓶，第一和第四层样品还应各分装一个零时间培养瓶，零时间培养瓶中水样体积必须准确。剩余水样按第11章的规定，测定各层次水样的叶绿素a浓度，
13. 4. 3. 3加1*C 工作液
取相同体积的1C工作溶液加至每个培养瓶。所加数量规样品中浮游植物多少和培养时间而定。一般在水深小于200m海区，培养24h,加37~~370kBg，大于200m海区加370~740kBq。13. 4. 3. 4取总计数样
用微量吸滤器从每零时间培养瓶中吸取一定体积水样两份，分别移入2个总计数闪烁瓶中，盖紧，混勾，供作放射性活度测定。13.4.3.5培养
将已加有\C的培养瓶(零时间培养瓶除外），放入各相应的培养箱内，或罩上各相应的培养罩，再放入透明的培养箱内。记下开始培养时间，培养籍应置于阳光不受遮蔽处，并用流动的表层海水保持培养期间的温度恒定，培养时间一般在2～24 h之间,并尽量接近当地中午时间。13.4.3.6零时间样品的过滤
培养开始后，立即过滤两个零时间样品，所得载有浮游植物的滤膜，放入闪烁瓶，在通风橱中，加入1 cm*0. 1 mol/dm2盐酸,15 min 后加盖。或在通风橱中以浓盐酸蒸气熏无滤膜 15 min,放入烁闪瓶。13. 4 3.7过滤
样品培养后.过滤水样步骤见 13. 4. 3. 6条 13.4.3.8放射性活度测定
向装有带浮游植物的滤膜的烁闪瓶加10cm液闪液，在振器上缓慢振荡至少20mi，用液体闪烁计数仪测定，并记录于海生表5和6(见附录G)。13.4.4水样二氧化碳总浓度测定测定海水样品的盐度，计算海水中一氧化碳总浓度p(C) = (0. 067 $ — 0. 05) × 0. 96 × 12 000-(5)
GB 12763. 6—91
一海水中二氧化磁的总浓度（以C计），mg/m式中：p(C)—
S…--毒水实用盐度(无量纲)。
14韧级生产力的资料整理
14.1数据计算
14. 1. 1 计算加入\C 的量
R. - VtX 1 000
加入c 的量kBq
式中，R—
各总计数闪炼瓶测得\C数量的平均值，kBq；V—培养水样的体积，cm\;
联测总计数水样的体积，mm。
14.1.2计算海洋初级生产力
P, - (r. fo) : p(c)
式中：P,-海洋初级生产力（以C计）,mg/(m*，h)R-\加入\C的量,kBq;
比--白瓶样品中1C放射性活度的平均值，kBq-零时间样品中1c的放射性活度，kBgRh --
一海水中二氧化碳的总浓度，mg/m；pr)
N—·培养时间,h。
14.1.3计算生产力指数
n(Chla)
生产力指数，h-\
式中：1
水体初级生产力，mg/p(Chla)——水体中叶绿素a的浓度，mg/m。14.1.4计算水柱初级生产力
%P- +, Pa . (D.+ - D)
式中：P,-水柱初级生产力,mg/(m·h);Pu—第层初级生产力，mg/(m.h）；来样层淡数
D,第i层深度,m;
1isn—1
14.2填写海生表8（见附录G)。
14.3绘制分布图
14.3.1平面分布图
GB 12763. 6- 91
等值线取值标准1.0,5.0,10.020.0,30.0,50.0,100.0150.0.200.0mg/（m*.h）。14.3.2断面分布图
等值线取值标准：0.1,0.3,0.5,1.0,3.0,5.0，10.0,30.0,50.0,*100.0mg/（m.h)。14.3.3以上等值线取值标准，可视具体情况增减，第三篇微生物调查
15技术要求
15.1微生物调杏包括测定细菌、放线菌、酵菌、霉菌的数量，细菌异养生长速率和细菌异养活性。15.2采样站位和层次
15.2.1站位布设应尽量和其他专业一致。15.2.2呆样水层见第篇表1，大洋调查可增加500,1000.2000m等水层的采样。15.2.3海洋沉积物中微生物调查，只来底质表层样。调查微生物垂直分布时，见第六篇分层采样。15.3无菌操作
15.3.1采水器上的采样瓶、袋应预先灭菌。15.3.2实验宰内水、泥样分样和分离培养鉴定过程中，均按无菌要求操作。15.3.3其他凡属海上调查所需物品，如水样贮存瓶（棕色）、移液誉（1，5、10cm\）、培养血等均需洗净，包封灭菌，足量备用。
15.3.4样品应在采样斥2h内处理，分析。若暂放冰箱保存，不得超过24h。16采样
16.1主要仪器设备
16.7.1采水器
根据采样深度、选用击开式或尼斯金(Niskin)采水器。16.1.2采泥器
弹采泥器或箱式采泥器，见第九篇。16.2米水样
16.2.1见第-篇规定.并按实际情况选用采水器。16.2.2采水容器开启后应停留片刻,待水样装满16.2.3按测定项目计算来水量，若同一水层分几次采样，样品应混匀，再按各测定项日要求分装、处理。
16-3来挑拌
用无菌工其从预定层次中取10～20g样品.置」无菌容器。17样品分析
17.1十要仪器设备
17.1.1抽滤装置
包括滤器、支架、插滤瓶和真空泵。17.1.2滤膜
17.1.2.1微滤膜(Miliporc）直径25mm和47mm,孔径0.2um。GB12763.6—91
17. 1. 2. 2 核孔滤膜(Nuclepore),直径 25 mm,孔径 0. 2 μm。17.1.3荧光显微镜
具有荧光装置的显微镜。
17.1.4液体闪烁计数仪
具有测定C 和H 的功能。
17.1.5螺盖试管和闪炼计数瓶
50 cm2螺盖玻璃试管。
20 cm*与闪烁仪匹配的玻璃或塑料闪烁瓶。125cm螺盖玻璃三角烧瓶，
17.2培养基、战剂和T作溶液
17.2.1培养基
17. 2.1. 1细菌培养基
蛋白陈
酵母膏
陈海水
17. 2. 1. 2
放线菌培养基
可溶性淀粉
MgSO·7H20
陈海水
17. 2. 1. 3
霉菌培养基
Mg504+71I,0
1 000 cma
7. 6~7. 8
1000 cm
陈海水
17.2. 1. 4醇母菌培养基
酵母商
葡葡糖
蛋白陈
陈海水
GB 12763.6—91
1000 cm2www.bzxz.net
1000 cm
将上述已制备好的各种培养基趁热分装。经高压（98.1kPa)灭菌20min后，制成平板和试管斜面。17.2.2试剂和工作溶液
17.2.2.1陈海水
取天然海水贮存于暗房或具黑，红布罩的玻璃瓶中,放置3个月以,上.。使用时取其清液。或经孔径0.45um滤膜过滤的海水。
17.2.2.2表面活性剂
将吐温-80(Tween-80)按1：2000比例配成水溶液，灭菌备用，17. 2.2. 3吖啶橙染色液
将0.1吖啶橙染色剂溶于100cm蒸馏水中，并经0.2um滤膜过滤。该液可于冰箱（5℃)中存放两周。
17.2.2.4伊拉克黑染色液
将1.0g伊拉克黑染色剂溶于含2%(V/V)乙酸的500em无颗粒无菌蒸馏水中。可在冰箱中长期保荐。
17.2.2. 5甲醛溶液
经 0. 2 μm滤膜过滤的 40%(V/V)甲醛溶液。17.2.2.6［甲基-\H]胸腺嘧啶核苷工作溶液取市售放射比活度高于或等于1.85×1012Bq/mol的[甲基-\HI胸腺嘧啶核苷的贮备液。使用前用无颗粒无菌蒸馏水稀释成1nmal/cm*的工作溶液。17.2.2.7D-[u-\c]葡葡糖工作溶液取市售的放射比活度大丁或等于 7, 4 × 101° Bg/ no1 D-[u-11c]葡萄糖的贮备液,用第化钠溶液p(NaCI)=35g/dm稀释成1.85×10Bg/cm的工作溶液.并按10ug/cm*量加入非放射性葡萄糖。然后定量分装于安颜中,封熔后高压炎菌 15 min 备用。17.2.2.8三氯乙酸
用蒸馏水分别将该试剂配成10%(V/V)的萃取溶液和5%(V/V)冲洗溶液。17.2.2.9闪烁液
市售或根据配方配制的闪烁波。17.3样品处理
17.3.1水样处理
17.3.1.1吖啶直接计数的水样
加2%(V/V)甲醛游液固定，如在冰箱(5℃)保存不超过两周。17.3.1.2滤膜萌发平板计数的水样按10cm/dm量加灭菌的吐温-80水溶液。17.3.1.3细菌异养生长速率测定的水样
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