CJ/T 3018.15-1993
基本信息
标准号： CJ/T 3018.15-1993
中文名称：生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 多管发酵法
标准类别：城镇建设行业标准(CJ)
标准状态：现行
发布日期：1993-05-03
实施日期：1993-09-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：248608
标准分类号
中标分类号：环境保护>>污染物排放标准>>Z68城市生活污染源控制标准
关联标准
出版信息
页数：7页
标准价格：12.0 元
相关单位信息
标准简介
CJ/T 3018.15-1993 生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 多管发酵法 CJ/T3018.15-1993 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
中华人民共和国城镇建设行业标准生活垃圾渗沥水总大肠菌群的检测多管发酵法
Leachata-Deteetion for members .ofthe coliform group-Multiple-tutefermentation method
CJ/T3018. 15—93
害题内容与适用范围
本标准规定了用多管发酵法检测渗沥水中总火肠菌群的方法。本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。2引用标准
GB5750生活饮用水标准检验法总大肠菌群GB4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定3术语
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长吋能使乳糖发酵，在24h内产酸，产气的革兰民阴性无芽孢杆菌。总大肠菌群数系以每升渗沥水祥品内，总大肠菌群的最可能数（MPN）表示。4原理
根据总大肠菌群具有的生物特征，如革些氏阴性无朱孢杆菌，在37℃于乳糖内培养能发醇，并在24内产酸、产气的等点，将不同稀释度的试样接种到具有选摔性的乳携培养基中，经培养后根据阳性反应结果，测出原试样中总大肠菌群的MPN值。5培养基和试剂
本标准所用减剂，除劳有说明外，均为符合国家标准或行业标推的化学纯试剂和生化试剂，均用然馏水或去离子水。5.1乳糖蛋白陈培养液
5.1.1成份：蛋白陈
中华人民共和国建设部1993-05-03批准54
1993-09-07实施
5.1.2制法
牛肉笋
氨化钠
CJ/T3018.15-- 93
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
燕馏水
1000mL
将蛋白陈、牛肉膏，乳糖及氣化钢置于1000L蒸馅水中班热解，调整pH为7.2～7，4，再加入1m上1.B%漠甲酚紫乙醇溶被，充分混勺，分装于装有倒管的试管中，置高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20min+贮存于冷暗处备用：5.2三倍浓缩乳糖蛋白培养液
按1逆乳糖蛋自陈培养液（51）浓缩三倍配制。5.3品红亚硫酸钠培养基
5.3.1成份：蛋白陈
磷酸氨二钾
蒸馏水
无水亚硫酸钳
5%裁性品红乙醇游液
5.3.2储备培养基的制备
15-30g
1000mL
先将琼脂加至900mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氨二钾及蛋白陈，滬匀使其溶解，再用蒸馅水补足到1000m，调整pI为？.2~7.4，趋热用脱脂棉或绒布过滤，再证入乳糖，混勾后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min，些存于冷瞻处备用。
5.3.3平板培养基的配制
将上法制备的储备培养基（5，3.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的最，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶，置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于一个灭菌空试管内，期灭黄水少许使其溶解后，置于沸永浴中煮沸10血in以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠辫液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成谈粉红色为正。将此亚硫酸钠与碱性品红的泥合液全部加入已融化的储备培养基内，并充分混勾（防止生气泡），立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平血内，特其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存应小于两星期，如培养基己由淡红色变成深红色，则不能再用。5.4伊红美蓝培养基
5.4.1成份：蛋自陈
YKAoNIKAca
磷酸氢二钾
蒸馏水
2%伊红水浴液
0.5%美蓝水溶液
5.4.2储备培养基的制备
CJ/T3018,15-93
20-30g
1000mL
张将琼脂加至9加mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白陈，混勾使之溶孵，再历蒸馅水补足到1000mL，调整pH为7.27.4，趋热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混勾后定量分装下烧瓶内，置压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20Ⅲin，贮存于冷嘀处备用。
5.4.3平板培卷基的配制
将上法制备的储备培养基（6.4.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液，加入已融化的储备琼脂内，并充分混匀（防正产生气泡），立即将此种培养基适倾入于已灭菌的空平血内，待其玲却凝固后，倒置冰箱内寄用。5.5生理盐水
将8.50～9.50g氯化钠（NaCI）溶于水中，稀释或1000mL，摇勾。pH值应为4,5~7.0.
6仪器、设备
6.1高压蒸汽灭菌器。
6.2下燥箱：最高工作温度300。6.3恒温培养箱：36±1℃。
6.4冰箱。
6.5恒温水浴：46±1℃。
6.6生物显微镜。
6.7稀释瓶t125mL小口玻璃方瓶。6.8玻璃试管：18×180mm。
6.9玻璃倒管：3×30m
6.10刻度吸管，1mL，10mL，分度牵0.1ml..6.11载玻片。
6.12乎Ⅲ：#径90mm
6.13接种环：直径3mm。
6.14滴精灯。
7样品
供总大畅群检测的渗沥水实验室样品量药需100Im工，用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。采样后应尽快检测，在2h内不能处理时，应置了2～5℃冷藏，最长保存时间为6h。56
8步骤
8.1准备工作
CJ/T3018.15—93
8.1.1工作室及操作台经清扫后，用紫外线灭菌10min。8.1.2玻璃器血置于于燥箱中于160℃灭菌2h。8.1.3将装有90mL生理盐水的稀释瓶和9mL生理盐水的试管，前者瓶口橡皮塞讨上滤纸条，后者管口塞上棉花球，置高压蒸汽灭菌器（6.1）内，于121C灭凿20min，玲却待用。
8.2试样稀释
8.2.1以无菌操作，吸取经充分混勾的试样10mL于盛有90mL灭凿生理盐水的稀释瓶（8.1.3）中，充分混后就成1：10的帮释被。8.2.2吸取1：10释液1mL，沿管整徐徐注入盛有9mL灭菌生现盐水的试管中，混勾成1 :100的稀释液。
8.2.3.按上述操作进行10倍递增稀释，每递增稀释1次，随即换用1支1mL灭菌刻度吸管。
8.3发酵试验
以无菌操作，选择适宜的四个连续稀释试样1mL，接种到各装有10mL乳糖蛋白陈培养液（5.1）的试管（内有倒管）中，若其中取10mL原试样，则需注入装有5mL三格浓缩乳糖蛋自陈培养液（5，2）的试管（内有倒管）中，混勾后置于36士1℃的恒温培养箱内培养24±2h。
8.4板分离培养
取出经培养24h后的发酵试管，将产酸产及点产酸的发酵管，分别接补于品红业硫酸钠平板培养基（5.3.3）或伊红美蓝平板培养基（5.4.3）上，再置于36土1°源培养箱内培养18～24h。挑选符合下列特征的菌落，取菌落的-一半进行涂片。革兰染色、镶格（见谢录A）。
品红亚硫酸钠培养基上的菌落：紫红色，具有金属光泽的凿落。深红色，不带或略带金属光萍的凿落。淡红色，中心色较深的菌落。wwW.bzxz.Net
伊红美蓝培养其上的菌落：
深紫黑色，其有金属光萍的菌落。紫喂色，不带惑略带金属光泽的落。淡紫红色，中心色较深的菌落。8.5证实试验
上述徐片、镜检的菌落，如为苹兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另·半再接于装有10mL普通浓度乳糖蛋凹陈培养液（5.1)的试管（内有倒管）中，然后置36土1℃恒温培养箱中培养24土2h。有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。57
YKAoNIKAca
9报告方式
CJ/T301B.15—93
根据证实试验有总火肠菌群存在的阳性管数，查MPN检紫表（表1），MPN值在100以内时，按其实际取值表示，大于100时，用10的指数形式麦示，并以每升渗沥永样品中的总大肠菌群的MPN值报告。
本标准未作规定的按GB5了50和GB4789.3热行70
裴1大肠菌群最可能数(MPN)检索囊接种盘;mL
×10-a
MPN/100omL
2.38×10*
9×102
2.38×105
>2.38×105
× 10l... X10-
9×10*
9×105
>2.38×100
A1草兰氏染色
A1.1 染色液配谢
A1.1.1结晶紫染色液
95%乙醇
1%草酸铵水溶液
CJ/T 3018.15—93
附录A
苹兰氏染色和镜检
(补充件)
将蒋结品紫完全落解工乙醇中，然后与芹酸铵溶液混合。结晶紫溶波救置过久产生沉淀，不能再用。A1.1.2碘助樂液
碘化钾
蒸馏水
将碘和化钾先行混合，加少许蒸馏水充分振据，待完全溶解后，再用蒸馏水稀释至300mL.
此溶波二星期内有效。当辫液由棕黄色变成淡黄色时，即应弃去。A1.1.3 乙醇脱色液，95%（V/V）Z醇。A1.1.4沙黄复染液
95%乙醇
蒸馏水
将沙黄溶于乙醇中，待完全游解后，加入90mL蒸增水。A1-2染色黄步骤
A1.2.1 涂片
胆灼烧拎都后的接种环挑·一环2吸生班盐水于清获无脂的载玻片上，再用接种虾从培养18～24h符合菌落特征的平板中取菌辫的半沾于盐水滴的上端，烧去接种环.1.多余的菌落。然后用接种环将菌种在盐水中均句涂开，要涂得薄些（形成可见的搏层），然后将标木向上，在火焰上方加溢固定，干燥、冷却。A1.2.2染色
滴如结晶紫染色液，染色1nin，倾去染色滋，水洗。滴加碘助染液，作用1min后倾去，水洗。滴加乙醇脱色液，摇动载玻片，直至无紫色脱落为止（约90s），水洗。59
YKNKAca
/3018.15-93
滴加沙黄复染液，染色1min后倾去，水洗。炼下，镜检。
滴香柏油，在高倍油下观繁，是深蒙色为革兰氏阳性脂，呈淡红色为革兰氏阴性。
附加说明：
本标准虫建设部标准定额研究所提出。本标雅由建设部城镇环境卫生技术标准妇口单位上海市环境卫生管理局归本标准由上海市环境卫生设计科研所负责起草。本标准主要起草人肩化，章莉娜。本标准委托上海市环境卫生设计科研所负责解释。60
（京）新登字035号
中华人民共和国城镇建设行业标追生活垃圾渗沥水理化分析和组菌学检验方法CJ/T 3018.1-~15--93
中国建筑工业出版社出版，发行（北京西郊百方庄）新华书店经
北京市顺义县無华印刷广制
开本：787×1092毫米1/16印张：4字数：94千字1993年12月第一版
印数：1-T0D册
1993年12月第--次印别
定价：2.75元
ISBN7-112--0215B—8/TU1656
(7178)
YKAoNIKAca=
2691~810
ISBN7-112—02158—8/TU·1656(7178)
定价：2.15元
3018-1-1
-93 cJ/T
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Leachata-Deteetion for members .ofthe coliform group-Multiple-tutefermentation method
CJ/T3018. 15—93
害题内容与适用范围
本标准规定了用多管发酵法检测渗沥水中总火肠菌群的方法。本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。2引用标准
GB5750生活饮用水标准检验法总大肠菌群GB4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定3术语
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长吋能使乳糖发酵，在24h内产酸，产气的革兰民阴性无芽孢杆菌。总大肠菌群数系以每升渗沥水祥品内，总大肠菌群的最可能数（MPN）表示。4原理
根据总大肠菌群具有的生物特征，如革些氏阴性无朱孢杆菌，在37℃于乳糖内培养能发醇，并在24内产酸、产气的等点，将不同稀释度的试样接种到具有选摔性的乳携培养基中，经培养后根据阳性反应结果，测出原试样中总大肠菌群的MPN值。5培养基和试剂
本标准所用减剂，除劳有说明外，均为符合国家标准或行业标推的化学纯试剂和生化试剂，均用然馏水或去离子水。5.1乳糖蛋白陈培养液
5.1.1成份：蛋白陈
中华人民共和国建设部1993-05-03批准54
1993-09-07实施
5.1.2制法
牛肉笋
氨化钠
CJ/T3018.15-- 93
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
燕馏水
1000mL
将蛋白陈、牛肉膏，乳糖及氣化钢置于1000L蒸馅水中班热解，调整pH为7.2～7，4，再加入1m上1.B%漠甲酚紫乙醇溶被，充分混勺，分装于装有倒管的试管中，置高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20min+贮存于冷暗处备用：5.2三倍浓缩乳糖蛋白培养液
按1逆乳糖蛋自陈培养液（51）浓缩三倍配制。5.3品红亚硫酸钠培养基
5.3.1成份：蛋白陈
磷酸氨二钾
蒸馏水
无水亚硫酸钳
5%裁性品红乙醇游液
5.3.2储备培养基的制备
15-30g
1000mL
先将琼脂加至900mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氨二钾及蛋白陈，滬匀使其溶解，再用蒸馅水补足到1000m，调整pI为？.2~7.4，趋热用脱脂棉或绒布过滤，再证入乳糖，混勾后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min，些存于冷瞻处备用。
5.3.3平板培养基的配制
将上法制备的储备培养基（5，3.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的最，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶，置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于一个灭菌空试管内，期灭黄水少许使其溶解后，置于沸永浴中煮沸10血in以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠辫液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成谈粉红色为正。将此亚硫酸钠与碱性品红的泥合液全部加入已融化的储备培养基内，并充分混勾（防止生气泡），立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平血内，特其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存应小于两星期，如培养基己由淡红色变成深红色，则不能再用。5.4伊红美蓝培养基
5.4.1成份：蛋自陈
YKAoNIKAca
磷酸氢二钾
蒸馏水
2%伊红水浴液
0.5%美蓝水溶液
5.4.2储备培养基的制备
CJ/T3018,15-93
20-30g
1000mL
张将琼脂加至9加mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白陈，混勾使之溶孵，再历蒸馅水补足到1000mL，调整pH为7.27.4，趋热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混勾后定量分装下烧瓶内，置压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20Ⅲin，贮存于冷嘀处备用。
5.4.3平板培卷基的配制
将上法制备的储备培养基（6.4.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液，加入已融化的储备琼脂内，并充分混匀（防正产生气泡），立即将此种培养基适倾入于已灭菌的空平血内，待其玲却凝固后，倒置冰箱内寄用。5.5生理盐水
将8.50～9.50g氯化钠（NaCI）溶于水中，稀释或1000mL，摇勾。pH值应为4,5~7.0.
6仪器、设备
6.1高压蒸汽灭菌器。
6.2下燥箱：最高工作温度300。6.3恒温培养箱：36±1℃。
6.4冰箱。
6.5恒温水浴：46±1℃。
6.6生物显微镜。
6.7稀释瓶t125mL小口玻璃方瓶。6.8玻璃试管：18×180mm。
6.9玻璃倒管：3×30m
6.10刻度吸管，1mL，10mL，分度牵0.1ml..6.11载玻片。
6.12乎Ⅲ：#径90mm
6.13接种环：直径3mm。
6.14滴精灯。
7样品
供总大畅群检测的渗沥水实验室样品量药需100Im工，用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。采样后应尽快检测，在2h内不能处理时，应置了2～5℃冷藏，最长保存时间为6h。56
8步骤
8.1准备工作
CJ/T3018.15—93
8.1.1工作室及操作台经清扫后，用紫外线灭菌10min。8.1.2玻璃器血置于于燥箱中于160℃灭菌2h。8.1.3将装有90mL生理盐水的稀释瓶和9mL生理盐水的试管，前者瓶口橡皮塞讨上滤纸条，后者管口塞上棉花球，置高压蒸汽灭菌器（6.1）内，于121C灭凿20min，玲却待用。
8.2试样稀释
8.2.1以无菌操作，吸取经充分混勾的试样10mL于盛有90mL灭凿生理盐水的稀释瓶（8.1.3）中，充分混后就成1：10的帮释被。8.2.2吸取1：10释液1mL，沿管整徐徐注入盛有9mL灭菌生现盐水的试管中，混勾成1 :100的稀释液。
8.2.3.按上述操作进行10倍递增稀释，每递增稀释1次，随即换用1支1mL灭菌刻度吸管。
8.3发酵试验
以无菌操作，选择适宜的四个连续稀释试样1mL，接种到各装有10mL乳糖蛋白陈培养液（5.1）的试管（内有倒管）中，若其中取10mL原试样，则需注入装有5mL三格浓缩乳糖蛋自陈培养液（5，2）的试管（内有倒管）中，混勾后置于36士1℃的恒温培养箱内培养24±2h。
8.4板分离培养
取出经培养24h后的发酵试管，将产酸产及点产酸的发酵管，分别接补于品红业硫酸钠平板培养基（5.3.3）或伊红美蓝平板培养基（5.4.3）上，再置于36土1°源培养箱内培养18～24h。挑选符合下列特征的菌落，取菌落的-一半进行涂片。革兰染色、镶格（见谢录A）。
品红亚硫酸钠培养基上的菌落：紫红色，具有金属光泽的凿落。深红色，不带或略带金属光萍的凿落。淡红色，中心色较深的菌落。wwW.bzxz.Net
伊红美蓝培养其上的菌落：
深紫黑色，其有金属光萍的菌落。紫喂色，不带惑略带金属光泽的落。淡紫红色，中心色较深的菌落。8.5证实试验
上述徐片、镜检的菌落，如为苹兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另·半再接于装有10mL普通浓度乳糖蛋凹陈培养液（5.1)的试管（内有倒管）中，然后置36土1℃恒温培养箱中培养24土2h。有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。57
YKAoNIKAca
9报告方式
CJ/T301B.15—93
根据证实试验有总火肠菌群存在的阳性管数，查MPN检紫表（表1），MPN值在100以内时，按其实际取值表示，大于100时，用10的指数形式麦示，并以每升渗沥永样品中的总大肠菌群的MPN值报告。
本标准未作规定的按GB5了50和GB4789.3热行70
裴1大肠菌群最可能数(MPN)检索囊接种盘;mL
×10-a
MPN/100omL
2.38×10*
2.38×105
>2.38×105
× 10l... X10-
9×10*
9×105
>2.38×100
A1草兰氏染色
A1.1 染色液配谢
A1.1.1结晶紫染色液
95%乙醇
1%草酸铵水溶液
CJ/T 3018.15—93
附录A
苹兰氏染色和镜检
(补充件)
将蒋结品紫完全落解工乙醇中，然后与芹酸铵溶液混合。结晶紫溶波救置过久产生沉淀，不能再用。A1.1.2碘助樂液
碘化钾
蒸馏水
将碘和化钾先行混合，加少许蒸馏水充分振据，待完全溶解后，再用蒸馏水稀释至300mL.
此溶波二星期内有效。当辫液由棕黄色变成淡黄色时，即应弃去。A1.1.3 乙醇脱色液，95%（V/V）Z醇。A1.1.4沙黄复染液
95%乙醇
蒸馏水
将沙黄溶于乙醇中，待完全游解后，加入90mL蒸增水。A1-2染色黄步骤
A1.2.1 涂片
胆灼烧拎都后的接种环挑·一环2吸生班盐水于清获无脂的载玻片上，再用接种虾从培养18～24h符合菌落特征的平板中取菌辫的半沾于盐水滴的上端，烧去接种环.1.多余的菌落。然后用接种环将菌种在盐水中均句涂开，要涂得薄些（形成可见的搏层），然后将标木向上，在火焰上方加溢固定，干燥、冷却。A1.2.2染色
滴如结晶紫染色液，染色1nin，倾去染色滋，水洗。滴加碘助染液，作用1min后倾去，水洗。滴加乙醇脱色液，摇动载玻片，直至无紫色脱落为止（约90s），水洗。59
YKNKAca
/3018.15-93
滴加沙黄复染液，染色1min后倾去，水洗。炼下，镜检。
滴香柏油，在高倍油下观繁，是深蒙色为革兰氏阳性脂，呈淡红色为革兰氏阴性。
附加说明：
本标准虫建设部标准定额研究所提出。本标雅由建设部城镇环境卫生技术标准妇口单位上海市环境卫生管理局归本标准由上海市环境卫生设计科研所负责起草。本标准主要起草人肩化，章莉娜。本标准委托上海市环境卫生设计科研所负责解释。60
（京）新登字035号
中华人民共和国城镇建设行业标追生活垃圾渗沥水理化分析和组菌学检验方法CJ/T 3018.1-~15--93
中国建筑工业出版社出版，发行（北京西郊百方庄）新华书店经
北京市顺义县無华印刷广制
开本：787×1092毫米1/16印张：4字数：94千字1993年12月第一版
印数：1-T0D册
1993年12月第--次印别
定价：2.75元
ISBN7-112--0215B—8/TU1656
(7178)
YKAoNIKAca=
2691~810
ISBN7-112—02158—8/TU·1656(7178)
定价：2.15元
3018-1-1
-93 cJ/T
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