YY/T 1497-2016
基本信息
标准号： YY/T 1497-2016
中文名称：医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法 Phi-X174噬菌体测试方法
标准类别：医药行业标准(YY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 医用 防护 口罩 材料 病毒 过滤 效率 评价 测试方法 噬菌体
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
YY/T 1497-2016 医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法 Phi-X174噬菌体测试方法
YY/T1497-2016
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标准内容
ICS _11.140
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1497—2016
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法
Phi-X174噬菌体测试方法
Evaluation test method for the viral filtration efficiency(VFE)of medicalprotective face mask materials-Test method using Phi-X174 bacteriophage2016-07-29发布
国家食品药品监督管理总局
2017-06-01实施
本标准按照GB/T1,1一2009给出的规则起草。YY/T1497—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的资任，本标推由国家食品药品监替管理总局提山。本标准由国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心归口。本标准起草单位：化京市医疗器械检验所、青岛众瑞智能仪器有限公司。本标谁主要起草人：刘思敏、金国胜，李成志、潘四春。1
1范围
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法Phi-X174 噬菌体测试方法
YY/T 1497—2016
本标准规定了用Phi-X174噬菌体悬浮液为替代微生物，对医用防护罩或口罩材料进行病毒过滤效率的测试方法。
本标谁适用于有病毒过滤效率评价要求的医用防护口罩或口罩材料2、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。是注日期的用文件，仗注自期的版不适用于本女件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
病毒yirus
无独立的代谢系统，只能在活的宿主细胞内复制的其有感染性的微小生物。3.2
噬菌体bacleriophage
能感染细菌的一种病毒，
注：本试验方法中,噬菌体即指 Phi-X174。Phi-X174 对人类不是致病病毒,但可用于模拟对人类有致病性的病毒。3.3
溶解lysis
整个细菌细胞裂解或破坏。
注：本或验方法中,大肠杆菌作为宿上细胞因 Pli-X174 侵人而引起溶解。3.4
噬菌斑plagne
(病毒学)理论上由单个活病毒感染、溶解宿主细胞而形成的清晰可见区域注：本试验方法中,噬菌斑即指琼脂层上E.co C的菌游中的清晰可见区域,理论上是单个存活的 Phi-X174 感染和溶解细菌的结巢。
空斑形成单位plaque-formingunitPFU
过感染和猝解琼脂上层的细菌面产生噬菌斑的病毒粒子。3.6
surrogate microbe
替代微生物
用于模拟致病性微生物的模式微生物。1
YY/T1497—2016
注：本试验方法中，替代缴生物即指噬菌体Phi-X174。3.7
病毒过滤效率viral filtratinn efficiencyVFE
在规定流量下，测试样品对病毒悬浮粒子滤除的百分数。4测试方法
4.1测试原理
使带有一定病浓度的气溶胶，以一定流連穿过样品，通过测定穿透样品前,后气溶胶中的病毒数量，计算该样品对病毒的过滤效率。4.2仪器和实验试剂
4.2.1采样器
AGI-30 液体冲击式采样器（每通道2个采样器）,能承受最大12.5 L/min流量冲击，4.2.2病毒过滤效率测试设备
病毒过滤效率测试设备（必图1：采用芝加爵式原理的气游胶发生器制备测试用病毒气溶胶。根据喷雾器情况，调试气溶胶产生速率(一般 6 L/min ～8 L/min),便所产生气溶胶的平均颗粒直径（MPS)为（3.0士0.3)μm：气溶胶分布的儿何标准差应不超过1.5。连接管路应保证气溶胶从上至下垂直撞击水平放置的样品，样品采样区为圆形，直径为（8.3士0.1)cm，测试医用龄护口罩用拱形网支撑.测试口罩材料用平面网支撑（见阁2)。气胶过样品后即进人2个AGJ-30体冲击式采样器（4.2.1)。每个采样器用20mL无菌蛋白陈水收集穿过样品的病藓颗粒。液体冲击式来样器的出口通过单独的管道与气体流量表相连接米控制气体流速，经过气泵抽吸，气体以251./min的速度进人整个测试系统，在实验开始前，所有能与病毒气溶胶接触的系统部件均应经121C压力蒸汽灭菌20Tmin。测试设备可采用符合本标准规定的等效设备，采用单通道或双道均可实施检验。2
说明：
(D)——气游胶发生器；
②—样品：
③·被体神击式来样器；
@—流最表；
@——气泵。
图1测试设备原理
其他设备
气源：能提供至少50 kPa的气压。培养箱;能保持温度在(36士1)C。水浴锅：能获得（45土2)它的温度。涡流混匀器。
冰箱：能维持温度在（5士3）℃压力蒸汽灭菌器：能维持温度在(121士1)C。计时器，准确度至少为18。
振荡器。
pH 计,精度率少为 0.1 pH单位。接种环。
分光光度计：能在640ntm处测量吸光度。离心机：能提供10 000r/min的转速。o.45μm过滤膜。
图2拱形、平面形支撑网
4.2.4实验试剂
4,2.4.1噬菌体营养肉汤(Phi-X174)配方如下;胰蛋白陈
氯化钾
氯化钙
加水至1 000 mL
121℃压力蒸汽火菌20min后，pH值为7.3士0.24.2.4.2下层琼脂配方如下，
YY/T1497—2016
单位为毫米
YY/T 1497—2016
营养肉汤
氯化钾
氯化钙
加水至1000 mL
121℃压力蒸汽灭菌20min后，pH值为7.3十0.2。4.2.4.3上层琼脂配方如下：
营养肉汤
氯化钾
氯化钙
加水率1600 mL
121℃压力蒸汽灭荫20min后，pH值为7.3士0.2。0.1%无菌蛋白陈水
4.2.4.5噬菌体Phi-X174(ATCC13706-B1),浓度至少为1.0X10°PFU/mL4.2.4.6大肠杆菌(ATCC13706)。4.2.4.7试验用水，至少符合GB/T6682—2008中规定的3级水。4.3预处理
每一测试样品应在温度为(21=5)℃，相对混度为(60士10）%的环境中放置至少24h。4.4试验步骤
4.4.1噬菌体最浮液的制备程序
噬菌体悬浮液的制备的程序如下：a）将10 mL～25 mL噬菌体营养肉汤(4.2.4.1)加人装有 250 mL兰角瓶中,用接种环将大肠杆菌接种于该营养肉汤中，在温度为（36士1)℃，转速为（225±25)r/min的条件下培养过夜：
b）用100mL新鲜制备的噬菌休营养肉汤将上述培养过夜的细菌培养液1：1(30稀释，置F1.的三角瓶中。在湿度为(36二1)C,转速为(225士25)r/miin 的条件下培养，大约 3 h 后,细菌增殖至浓度为(3土1)×10″CFU/mL，与此对应的培养液吸光度值为0.3~0.5(640nm）；c）取浓度约1.0×10°PFU/mL的噬菌体液1mI.加入到一个无菌的洁净试管中，再向试管加人上述人肠杆菌悬液 4 mL,振荡混匀,再加人 25 mL温度为（45土2)℃的上层琼脂培养基(4.2.4.3），振荡混匀；
将上述混匀后的上层琼脂培养基倒入直径为150mm的无菌洁净平皿中，置于（36土1)℃条件d)
下,培养3 h～4 h
e）培养结束后，收集该上层琼脂培养基丁洁净的无菌离心管巾，在10000r/min下离心20min以去掉细胞碎片将上清羧倒人洁净的无菌试管中；f）将含有噬菌体的上清液用0.45um的膜过滤，以纯化噬菌休溶液；测定噬菌体溶液的浓度，并置于4～8)℃条件下保存，此时测得的噬菌体浓度一般在（2.0十2）g)
×10\PFU/mL的范国内；
用0.1%无菌蛋白陈水将噬菌体培养液稀释至测试所需的浓度以制得噬菌体挑战悬浮液。4
4.4.2试验程序
YY/T 1497—2016
气溶胶发生器的液体容器中加人适量检测用噬菌体挑战悬浮液。噬菌体浓度通过4.4.1所述方法进行控制，使其约为1.0×10°PFU/mL。每次测试前，用净化的空气灌注整个系统约45s使气路平衡后，开启气溶胶发生器，向喷雾器输送菌体悬液的时间设定为1 min，空气压力和采样器运行时问设定为2min，在2个AGI-30液体冲击采样器中分别放人20mL0.1%无菌蛋白陈水收集噬菌体气溶胶，形成样品组试验液和阳性对照组试验。样器阳性对照值按照5.1方法计算，应不小于105PFU,否刚应调整菌液浓度。试验样品组、阳性对照组测试各重复3次。4.4.3试验液的定量测试
将样品组试验液梯度稀释至10-3,阳性对照组试验液梯度稀释至10-1，用下述程序定量测试稀释后的试验液（4.4.2所得)中噬颤体的数目：a）移取2.5ml.融化的无菌上层琼脂培养基到已灭菌的试管中，并保持比层琼脂培养基温度在(45±2)℃;
将盛有上层琼脂培养基的试管从热源上移走，迅速加人0.5mL稀释后的试验液，以制备接种管；
每个接种管中加人100μI.过夜放置的大肠杆菌培养物；d）将试管充分混勾，倒在下层琼脂培养基平板的表面上，每个试验样品和对照样品收集来的试验液，均制备2个平板（平板直径90mm）；e)
让琼脂凝固，并在（36士1)℃培养，直至产生肉眼清晰可见的噬菌斑，通常约3h～~4h；f）
g）培养后,对噬菌斑在 30 PFU～300 PFU 范围内的平而进行计数,若最小稀释俯数的噬菌斑数小于30，则按实际数量记录，若无噬菌斑，则噬菌斑记为1”。5结巢计算
5.1按式（1)计算采样器噬菌体阳性对照计算结果：Y-
式中：
Y—…采样器阳性对照值,PFU;
一阳性对照组试验液2个平板噬菌斑计数平均值×相应释倍数,PFU。分别计算3个采样器阳性对照值。5.2按式(2)计算病毒过滤效率结果：VFE=S-T
×100%
式中：
VFE—病毒过滤效率，%；
一阳性对照组试验液2个平板噬菌斑计数平均值×相应稀释倍数，PFU;C
T-试验样品组试验液2个半板赚菌斑计数平均值×相应稀释俯数，PFU分别计算3个试验样品的病毒过滤效率，报出结果应选取至个平行试样结果的最小值。1
YY/T 1497—2016
试验报告
报告应至少包括下列内容：
引用本标准的说明；
试验材料信息（制造商、供应商、批号、材质及到样口期）；样品的预处理条件（例如，温度、相对湿度）；试验菌种名称、编号及浓度；
单次测试结果；
验人员和试验日期；
任何偏离本标准的情况，
YY0469—2011医用外科口累
[2] YY/T0689
Phi-X174噬菌体试验方法
血液和体液防护装备
YY/T 1497—2016
防护服材料抗血液传播病原体穿透性能测试YY/T 1497-2016
中华人民共和国医药
行业标准
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法Phi-x174噬菌体测试方法
YY/T1497—2016
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）网证 spc.nct,cn
总编室：（010)58533533
发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010）68523946
中国标准出版社泰皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销bzxZ.net
开本880×12301/16
印张0.75
字数 16千字
2017年1月第一版2017年4月第一次印刷*
书号：1550662-31479
吉由本社发行中心调换
如有印装差错
版权专有慢权必究
举报电话：（010）68510107
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中华人民共和国医药行业标准
YY/T1497—2016
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法
Phi-X174噬菌体测试方法
Evaluation test method for the viral filtration efficiency(VFE)of medicalprotective face mask materials-Test method using Phi-X174 bacteriophage2016-07-29发布
国家食品药品监督管理总局
2017-06-01实施
本标准按照GB/T1,1一2009给出的规则起草。YY/T1497—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的资任，本标推由国家食品药品监替管理总局提山。本标准由国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心归口。本标准起草单位：化京市医疗器械检验所、青岛众瑞智能仪器有限公司。本标谁主要起草人：刘思敏、金国胜，李成志、潘四春。1
1范围
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法Phi-X174 噬菌体测试方法
YY/T 1497—2016
本标准规定了用Phi-X174噬菌体悬浮液为替代微生物，对医用防护罩或口罩材料进行病毒过滤效率的测试方法。
本标谁适用于有病毒过滤效率评价要求的医用防护口罩或口罩材料2、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。是注日期的用文件，仗注自期的版不适用于本女件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
病毒yirus
无独立的代谢系统，只能在活的宿主细胞内复制的其有感染性的微小生物。3.2
噬菌体bacleriophage
能感染细菌的一种病毒，
注：本试验方法中,噬菌体即指 Phi-X174。Phi-X174 对人类不是致病病毒,但可用于模拟对人类有致病性的病毒。3.3
溶解lysis
整个细菌细胞裂解或破坏。
注：本或验方法中,大肠杆菌作为宿上细胞因 Pli-X174 侵人而引起溶解。3.4
噬菌斑plagne
(病毒学)理论上由单个活病毒感染、溶解宿主细胞而形成的清晰可见区域注：本试验方法中,噬菌斑即指琼脂层上E.co C的菌游中的清晰可见区域,理论上是单个存活的 Phi-X174 感染和溶解细菌的结巢。
空斑形成单位plaque-formingunitPFU
过感染和猝解琼脂上层的细菌面产生噬菌斑的病毒粒子。3.6
surrogate microbe
替代微生物
用于模拟致病性微生物的模式微生物。1
YY/T1497—2016
注：本试验方法中，替代缴生物即指噬菌体Phi-X174。3.7
病毒过滤效率viral filtratinn efficiencyVFE
在规定流量下，测试样品对病毒悬浮粒子滤除的百分数。4测试方法
4.1测试原理
使带有一定病浓度的气溶胶，以一定流連穿过样品，通过测定穿透样品前,后气溶胶中的病毒数量，计算该样品对病毒的过滤效率。4.2仪器和实验试剂
4.2.1采样器
AGI-30 液体冲击式采样器（每通道2个采样器）,能承受最大12.5 L/min流量冲击，4.2.2病毒过滤效率测试设备
病毒过滤效率测试设备（必图1：采用芝加爵式原理的气游胶发生器制备测试用病毒气溶胶。根据喷雾器情况，调试气溶胶产生速率(一般 6 L/min ～8 L/min),便所产生气溶胶的平均颗粒直径（MPS)为（3.0士0.3)μm：气溶胶分布的儿何标准差应不超过1.5。连接管路应保证气溶胶从上至下垂直撞击水平放置的样品，样品采样区为圆形，直径为（8.3士0.1)cm，测试医用龄护口罩用拱形网支撑.测试口罩材料用平面网支撑（见阁2)。气胶过样品后即进人2个AGJ-30体冲击式采样器（4.2.1)。每个采样器用20mL无菌蛋白陈水收集穿过样品的病藓颗粒。液体冲击式来样器的出口通过单独的管道与气体流量表相连接米控制气体流速，经过气泵抽吸，气体以251./min的速度进人整个测试系统，在实验开始前，所有能与病毒气溶胶接触的系统部件均应经121C压力蒸汽灭菌20Tmin。测试设备可采用符合本标准规定的等效设备，采用单通道或双道均可实施检验。2
说明：
(D)——气游胶发生器；
②—样品：
③·被体神击式来样器；
@—流最表；
@——气泵。
图1测试设备原理
其他设备
气源：能提供至少50 kPa的气压。培养箱;能保持温度在(36士1)C。水浴锅：能获得（45土2)它的温度。涡流混匀器。
冰箱：能维持温度在（5士3）℃压力蒸汽灭菌器：能维持温度在(121士1)C。计时器，准确度至少为18。
振荡器。
pH 计,精度率少为 0.1 pH单位。接种环。
分光光度计：能在640ntm处测量吸光度。离心机：能提供10 000r/min的转速。o.45μm过滤膜。
图2拱形、平面形支撑网
4.2.4实验试剂
4,2.4.1噬菌体营养肉汤(Phi-X174)配方如下;胰蛋白陈
氯化钾
氯化钙
加水至1 000 mL
121℃压力蒸汽火菌20min后，pH值为7.3士0.24.2.4.2下层琼脂配方如下，
YY/T1497—2016
单位为毫米
YY/T 1497—2016
营养肉汤
氯化钾
氯化钙
加水至1000 mL
121℃压力蒸汽灭菌20min后，pH值为7.3十0.2。4.2.4.3上层琼脂配方如下：
营养肉汤
氯化钾
氯化钙
加水率1600 mL
121℃压力蒸汽灭荫20min后，pH值为7.3士0.2。0.1%无菌蛋白陈水
4.2.4.5噬菌体Phi-X174(ATCC13706-B1),浓度至少为1.0X10°PFU/mL4.2.4.6大肠杆菌(ATCC13706)。4.2.4.7试验用水，至少符合GB/T6682—2008中规定的3级水。4.3预处理
每一测试样品应在温度为(21=5)℃，相对混度为(60士10）%的环境中放置至少24h。4.4试验步骤
4.4.1噬菌体最浮液的制备程序
噬菌体悬浮液的制备的程序如下：a）将10 mL～25 mL噬菌体营养肉汤(4.2.4.1)加人装有 250 mL兰角瓶中,用接种环将大肠杆菌接种于该营养肉汤中，在温度为（36士1)℃，转速为（225±25)r/min的条件下培养过夜：
b）用100mL新鲜制备的噬菌休营养肉汤将上述培养过夜的细菌培养液1：1(30稀释，置F1.的三角瓶中。在湿度为(36二1)C,转速为(225士25)r/miin 的条件下培养，大约 3 h 后,细菌增殖至浓度为(3土1)×10″CFU/mL，与此对应的培养液吸光度值为0.3~0.5(640nm）；c）取浓度约1.0×10°PFU/mL的噬菌体液1mI.加入到一个无菌的洁净试管中，再向试管加人上述人肠杆菌悬液 4 mL,振荡混匀,再加人 25 mL温度为（45土2)℃的上层琼脂培养基(4.2.4.3），振荡混匀；
将上述混匀后的上层琼脂培养基倒入直径为150mm的无菌洁净平皿中，置于（36土1)℃条件d)
下,培养3 h～4 h
e）培养结束后，收集该上层琼脂培养基丁洁净的无菌离心管巾，在10000r/min下离心20min以去掉细胞碎片将上清羧倒人洁净的无菌试管中；f）将含有噬菌体的上清液用0.45um的膜过滤，以纯化噬菌休溶液；测定噬菌体溶液的浓度，并置于4～8)℃条件下保存，此时测得的噬菌体浓度一般在（2.0十2）g)
×10\PFU/mL的范国内；
用0.1%无菌蛋白陈水将噬菌体培养液稀释至测试所需的浓度以制得噬菌体挑战悬浮液。4
4.4.2试验程序
YY/T 1497—2016
气溶胶发生器的液体容器中加人适量检测用噬菌体挑战悬浮液。噬菌体浓度通过4.4.1所述方法进行控制，使其约为1.0×10°PFU/mL。每次测试前，用净化的空气灌注整个系统约45s使气路平衡后，开启气溶胶发生器，向喷雾器输送菌体悬液的时间设定为1 min，空气压力和采样器运行时问设定为2min，在2个AGI-30液体冲击采样器中分别放人20mL0.1%无菌蛋白陈水收集噬菌体气溶胶，形成样品组试验液和阳性对照组试验。样器阳性对照值按照5.1方法计算，应不小于105PFU,否刚应调整菌液浓度。试验样品组、阳性对照组测试各重复3次。4.4.3试验液的定量测试
将样品组试验液梯度稀释至10-3,阳性对照组试验液梯度稀释至10-1，用下述程序定量测试稀释后的试验液（4.4.2所得)中噬颤体的数目：a）移取2.5ml.融化的无菌上层琼脂培养基到已灭菌的试管中，并保持比层琼脂培养基温度在(45±2)℃;
将盛有上层琼脂培养基的试管从热源上移走，迅速加人0.5mL稀释后的试验液，以制备接种管；
每个接种管中加人100μI.过夜放置的大肠杆菌培养物；d）将试管充分混勾，倒在下层琼脂培养基平板的表面上，每个试验样品和对照样品收集来的试验液，均制备2个平板（平板直径90mm）；e)
让琼脂凝固，并在（36士1)℃培养，直至产生肉眼清晰可见的噬菌斑，通常约3h～~4h；f）
g）培养后,对噬菌斑在 30 PFU～300 PFU 范围内的平而进行计数,若最小稀释俯数的噬菌斑数小于30，则按实际数量记录，若无噬菌斑，则噬菌斑记为1”。5结巢计算
5.1按式（1)计算采样器噬菌体阳性对照计算结果：Y-
式中：
Y—…采样器阳性对照值,PFU;
一阳性对照组试验液2个平板噬菌斑计数平均值×相应释倍数,PFU。分别计算3个采样器阳性对照值。5.2按式(2)计算病毒过滤效率结果：VFE=S-T
×100%
式中：
VFE—病毒过滤效率，%；
一阳性对照组试验液2个平板噬菌斑计数平均值×相应稀释倍数，PFU;C
T-试验样品组试验液2个半板赚菌斑计数平均值×相应稀释俯数，PFU分别计算3个试验样品的病毒过滤效率，报出结果应选取至个平行试样结果的最小值。1
YY/T 1497—2016
试验报告
报告应至少包括下列内容：
引用本标准的说明；
试验材料信息（制造商、供应商、批号、材质及到样口期）；样品的预处理条件（例如，温度、相对湿度）；试验菌种名称、编号及浓度；
单次测试结果；
验人员和试验日期；
任何偏离本标准的情况，
YY0469—2011医用外科口累
[2] YY/T0689
Phi-X174噬菌体试验方法
血液和体液防护装备
YY/T 1497—2016
防护服材料抗血液传播病原体穿透性能测试YY/T 1497-2016
中华人民共和国医药
行业标准
医用防护口罩材料病毒过滤效率评价测试方法Phi-x174噬菌体测试方法
YY/T1497—2016
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总编室：（010)58533533
发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010）68523946
中国标准出版社泰皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销bzxZ.net
开本880×12301/16
印张0.75
字数 16千字
2017年1月第一版2017年4月第一次印刷*
书号：1550662-31479
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如有印装差错
版权专有慢权必究
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