SY/T 0532-1993 油田注入水细菌分析方法 绝迹稀释法 SY/T0532-1993 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国石油天然气行业标准SY/T 0532—93
油田注入水细菌分析方法
绝迹稀释法
1994-01-06发布
中国石油关然气总公司
1994-06-01实施
1主题内容与适用范围
中华人民共和国石油天然气行业标准油田注入水细菌分析方法
绝迹稀释法
$Y/T 0532 -93
本标准规定了汕田注入水中细菌分所的术语、疗法原理、试剂和材料，仪器和设备、操作步骤，细菌让数方法、精密度和分析结果。本标准适用油田注入水中腐菌、碗酸盘还原菌、铁纠菌的分析。油其地水中菌分析可参照抵行。
2引用标准
SY5329碎屑岩汕磁注小水质推荐搬标及分析方法。3术语
干热灭南：将待灭荫的物品放入烘箱，逐渐升温至110160，维持2～3h，达到灭菌自的。湿热灭菌：将养基和其拖不宜热灭菌的物品入高低灭菌锅内，加热，使锅内蒸汽乐力送0.1MPa，持续20~30min，达到火菌日的。4方法原理
腐生菌、硫龄还原尚和铁细菌的测是均深川绝迎稀释。即将测楚的水样球级注入到测试期或试停中进行接种稀释，直到鼓后，个测试瓶或试管中无菌生长为正，然后根据细菌生炎情况和矫释倍数，计弹出水样中组菌的数口。5试剂和材料
a。学试剂（均为分析纯）：乳酸钠、硫酸钠、氯化钙，硫酸改铁饺、磷胺减铆、氢氧化、氯化钠、氛化铵，硫酸镁、硫酸铵，碴酸销、柠檬酸铁铵、磷酸二钾。E，酒猜济被：涨度为75%
c生物试剂：牛肉臂、强白陈、酵母、葡毒概d、材料：纱布、朕脂棉、牛皮纸、线绝、00号胶寒、6号针头。6仪器和设备
a：电热恒温系养箱：用品夏30601b.电热被风下燥箱：便用溉度30～300（±5（c.高压灭菌锅；下载标准就来标准下载网
d，托酷人平：最大称量100g：感量0.1g#、禄箱
f.股度计：刻度为0.1pl1单位
g电灯：1000~2000W；
h，烧杯：100.500，1000ml
中国石油天然气总公司1994-01-06批准1994-06-01实施
.三角：500，1000m
j.笛：250，500mls
k，试管：150mm×15mm若干个
1.移波管：1ml;
m.酒精灯；
n，注射器：1ml；
o.细-瓶：125m
SY/T 0532--93
P.硫鲛盐还原齿测试瓶、腐生菌测试瓶、铁绑菌测试瓶。7采样
7.1采集的水样具有代表性，防正纽荫污染。7.2将细口瓶刷洗下净后用牛皮纸将瓶口包好。进行干热或湿热灭菌7.3取样前将取样打川使水以5～61/min的流速畅流3mi店，用巴灭菌的细口瓶取样至瓶口，加。
7.4从我择到检测谁品的时间，不得超过24175采祥店遵邱站标签，注明取样期、时间、地点，取样条件及取样人。8分析步骤
8.1测试瓶法
8.1.1根水样腐生菌、梳酸盐还原前、铁细菌的多少，将数个装存相应菌奖培养非的测试瓶排成--组并依次编1序号。
8.1.2用75%的酒精溶液特测试瓶顶蓝及操作件的于进行消恭。8.1.3用无案注射器吸取1m1水详滋入到1号瓶内，摇句。8.1.4另最支无菌注射器，从1号瓶中吸取1m1液体注入到2号瓶中，摇勾。8.15垂1述操作程序，银据含菌量逸少释到最后所范浓度。放入30~～37℃证激箱中培养。腐牛谢培养5～7l，测试瓶中液体红色变为黄色或泥泌，即表示有腐生菌生长。硫酸盐还原菌培养14～21d，测试瓶没体度为黑色，表示有硫盐还原菌生长。铁细菌培养7【4cl，测试瓶中没体产生混或红棕色胶状物，即表示有铁细荫生长。8.2液体试管法
8.2.1无菌水及生理盐求的配制
8.2.1.1满水：瑕经下热或避热灭菌的试停（或三角瓶）潜于个，各加入蒸馅水9小1，猫1：糖用牛皮纸包好，进行湿热灭菌。8.2.1.2生理热水：称最0.85g鼠化销，游解了100ml然谱水中，取告十个试管二角瓶，各训入生理盐水9u，洗行觀热灭循。
8.2.2无菌操作技术及接种方法
轻灭菌的搭养试弹以及稀释水样用的无岗水改无菌止邸盐水放入无菌空，打紫外灯，灭菌30m:rle
关闭紫外，指进水样，用7%酒棉球察手，点燃酒猜灯，萨拿尚种试管，将棉密后有手拧转松动，以利」婆种叫拔开，于拿移液管，在近火焰处将移液竹州入试内，送入水样后，立即塞上梯。
8.2.3水样的稀
8.2.3.1而光菌的移液管吸最1m1水详，放1号光菌水或年现盐水管中，谣，得到稀释度为10\的亦样。
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8.2.3.2取-支无菌的移液管从1号管中吸取1m1水样放到2号管1，得到稀释度为10-的水样，依次类推直到稀释到所需浓度为止。8.2.4培养基的配制
8.2.4.1腐生荫培养号
牛肉膏
氯化钠（SaC1)
将上述试剂放入烧杯中，珈入1000m1蒸馏水，解后册10%氧化钠落液调H值至7.4.～7.6，分装于试管中，管5m1，寒上棉寒，月牛皮纸包好，逃行湿热灭案，待用。8.2.4.2蔬酸盐还原菌培养基
酸氢二销
氯化铵
硫酸镁
硫酸钢
氯化钙
醇丹膏
乳酸钢
(K21PO4)
(NHCI)
(MgSO4 :71120)
(Na2SO)
(CaCi2)
将上述试剂放入烧杯中，加入1000m1蒸馏水，游解后10%氢氧化钠溶波调整pl1值至7.4~7.6，倒人三价瓶中，继上棉继，用牛皮纸包好，逆行湿热火菌，得历。8.2.4.3铁细菌培养盐
硫酸镁
硫酸铵
磷酸二氨钾
飘化钙
竹檬酸铁铵
(MgSOa: 7ll2O)
E(NH):SO)
(CaCle)
(NaNO,)
1述试剂放入烧杯中，如入1000m1蒸馏水，用10%氧化钠游液调整pH值6.6~～6.8，分装了录管，存筐5，上棉塞，用牛皮纸包，逊行热灭菊，待町。8.2.5腐型邀的点
将装有腐生菌培养恐的试管放入试管架［，敢不讨释度的水样1ml，分别接入试管，其中有儿个试不接入水样，做为常自对照。接种后，放入30～37培养箱中，培养5～7l，液体星现混浊或用现白色絮状物或液面1有-厚博，即表示有离生菌生长。如穿自样有菌长，应通做：8.2.6硫酸整还原菌的测定
将胶塞用酒棉擦洗波入瓷盘甲，在紫外灯下火阐30min。称敢疏疫业铁铵粉木1.2摊放在离紫外灯30cri处，灭菌30mm%询入已天菌的硫较还原菌璃养基中，摇何。
将灭随的牵试管放入试管架上，分别剂入不周稀释度的水样1而1。迷将已切硫毁缺铵的硫酸璇还谅菌培养楚翘满衔个试管，随即塞胶寒。在儿个试管不接入水样作为空自样。接种后，放入30~~37相湿箱增养14～21d，凡生成黑色淀并伴有硫化氛米气体，即表示有确酸盐还原菌牛生长。如果尘样有菌生长，应录做。8.2.7钢纲菌的测楚
将装有铁绷菌培养基的试管放入试管架上。敢不同稀释度的水样1ml，分别加入试，其中有3
儿支试管不接入水样作为空白样。SY/T0532-:93
接种盾，效入30-37℃运温箱中培养？11d，凡生成混油或红棕色胶状物，即表示有铁细请牛长。如空白样行荫生长：应理做。细菌计数方法
纠菌计数方法按附录A（补充许）扒行10精密度
同一燥作者，在间-实验按本标准规定的步骤，在连续时间内，对同--样品逃行重复测定，如样最细请舍量高，所得结乘充许误差不得无10，如弹品细菌含量低，所得绕桌充许误差不得大下10。11
分析结果
银据需要给出组菌含量范围或准确的细菌计数，个/ml。SY/T 0532—93
附录A
细纽苗计数方法
(补充件）
A1一个试样填组测试瓶（管）细菌计数法测细菌含量范，宜用一个试样做五个稀释度，按稀释度的大小依次排列。如1号瓶（管）有细菌生长，其余4个瓶（管）无菌生长，表明细菌含量范围为1～10个/ml。若2号瓶（管）有细菌生长，则细菌含量范围为1010°个/m1。以此类推，细菌含量范围让数见表41。表A细菌计数表
出现菌生长的瓶(管）
A2一个试样多组测试瓶（管）细菌计数法菌数，个/ml
10t～102
102~103
10'~1c
为较准确的测出纽菌数量，应采用三管法，四管法或五管法。三管法是指每个水祥，每个稀释倍数做兰个平行试验，四管法是指每个水样，每个稀释倍数做四个平行试验，以此类推，水样应稀释到最高稀释度不长菌为宜。
A2.1细菌计数方法举例1：用三管法分析某水样腐生菌含量，见表A2。表A2
稀释倍数
有菌生长管数
选:相邻三个稀释倍数中有菌生长的管数，得指数为“332”，查表A5细菌数为110个/ml，再乘以第一位上的稀释倍数10°，即得水样中腐生菌含量为110×10个/ml。A2.2细菌计数方法举例2：用四管法分析某水样腐生菌食量，见表A3。表A3
稀释倍数
有菌生长管数
选相邻三个稀释倍数中菌生长的管数，得指数为321”，查表A6细荫数为30个/m1，再乘以第-位数.上的稀倍数10，即得水样中腐牛菌合量3×103个/rl。A2.3细菌计数方法举例3月五管法分析某水样腐生菌含量，见表A4。5
稀释倍数
有菌生长管数
SY/T0532—93
选相邻三个稀释倍数中有菌生长的管数，得指数为“531”，查表A7细菌数为11.0个/ml，再乘以第一位数上的稀释倍数10°，即得水样中腐生菌含量11×103个/ml。计算方法用公式表示：
1ml水样中的菌数=菌数个/ml×指数第一位数上的稀释借数A2.4稀释法测数统计表见表A5，A6，A7，表A5
菌数，个/m1
三个平行管最大可能的菌数
菌数，个/ml
菌数，个/mi
菌数，个/ml
SY/T 0532—93
四个平行管最大可能的菌数
留数，个/ml
菌数，个/ml
菌数，个/m1
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五个平行管最天可能的菌数
菌数，个/ml
遥数，个/ml
附加说明：
SY/T0532—93
本标准中国在油天然总公司技术醒督局提。本标准地中国有汕天然总公司现划设计总院。本标雅t快田建设设计研究院负质起革。本标淮起草人淑珍，激琴。
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