YY/T 1455-2016
基本信息
标准号： YY/T 1455-2016
中文名称：应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南
标准类别：医药行业标准(YY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
YY/T 1455-2016.Guidelines for values assignment of catalytic activity concentrations of enzymes using reference measurement procedures and evaluation of uncertainty.
质验证程序的精密度,即测量结果的SD或CV和偏倚应落在实验室预定的限度内,该限度通常有多种来源。
4.3.1.2
使用正确度验证物质进行测量过程的评定时,其测量结果的平均值应落在正确度验证物质规定的限度内,精密度(重复性)应落在实验室预定的限度内.正确度验证物质宜选用国家或国际相关权威机构提供用于正确度验证的物质、IFCC提供的用于参考测量实验室室间质量评价的物质等。
4.3.1.3关于预定 的限度的确认通常考虑以下几点:
a)认可方案的限度,如从CRM定值报告中获得;
b)程序使用者或组织者给出的限度,如从正确度验证物质提供者获得;
c)经验的限度,程序使用者根据先前测量过程中获得的值制定预定的限度或依据多家实验室测量结果的中位值制定预定的限度;
d)采用标准文件给定的限度,如CNAS-CL33文件规定:IFCC参考方法对酶学参考物质的测量结果应在统计学达到无差异。
4.3.2
CRM的选择
使用者在选择CRM时,应考虑参考测量程序和CRM的特性,同时应考虑CRM定值方法、预期用途及CRM证书上关于该CRM的详细使用说明.
a) 溯源性:CRM的特性值应有计量溯源性,并附有合理有效的测量不确定度;
b)水平:CRM的标示值应在参考测量程序的测量范围内;
c)基质:CRM的基质尽可能接近人血清基质;
d)分析物:CRM的分析物应与参考测量程序相同或是参考测量程序分析物的同工酶;
e)最小取样量 :CRM规定的最小取样量应小于参考测量程序规定用量;
f)数量:CRM 的量应满足整个实验用量;
g)稳定性:CRM 的稳定性应满足参考测量程序相关要求。
4.3.3参考测程序测上精密度评定
4.3.3.1概述
精密度的评定,是将重复性条件或其他规定条件下实验室内SD(或CV)与预定的限度进行比较。
4.3.3.2 1 复测次数n的选择
重复测量的次数n主要取决于a和β的值以及评定精密度所选择的假设条件.通常假设在自由度v=n-1时a=0.05.β=0.01的临界值与o.和om比率的关系作为判定标准,表1给出了不同自由度下a=0.05 .β=0.01时,测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的判定临界值.
质验证程序的精密度,即测量结果的SD或CV和偏倚应落在实验室预定的限度内,该限度通常有多种来源。
4.3.1.2
使用正确度验证物质进行测量过程的评定时,其测量结果的平均值应落在正确度验证物质规定的限度内,精密度(重复性)应落在实验室预定的限度内.正确度验证物质宜选用国家或国际相关权威机构提供用于正确度验证的物质、IFCC提供的用于参考测量实验室室间质量评价的物质等。
4.3.1.3关于预定 的限度的确认通常考虑以下几点:
a)认可方案的限度,如从CRM定值报告中获得;
b)程序使用者或组织者给出的限度,如从正确度验证物质提供者获得;
c)经验的限度,程序使用者根据先前测量过程中获得的值制定预定的限度或依据多家实验室测量结果的中位值制定预定的限度;
d)采用标准文件给定的限度,如CNAS-CL33文件规定:IFCC参考方法对酶学参考物质的测量结果应在统计学达到无差异。
4.3.2
CRM的选择
使用者在选择CRM时,应考虑参考测量程序和CRM的特性,同时应考虑CRM定值方法、预期用途及CRM证书上关于该CRM的详细使用说明.
a) 溯源性:CRM的特性值应有计量溯源性,并附有合理有效的测量不确定度;
b)水平:CRM的标示值应在参考测量程序的测量范围内;
c)基质:CRM的基质尽可能接近人血清基质;
d)分析物:CRM的分析物应与参考测量程序相同或是参考测量程序分析物的同工酶;
e)最小取样量 :CRM规定的最小取样量应小于参考测量程序规定用量;
f)数量:CRM 的量应满足整个实验用量;
g)稳定性:CRM 的稳定性应满足参考测量程序相关要求。
4.3.3参考测程序测上精密度评定
4.3.3.1概述
精密度的评定,是将重复性条件或其他规定条件下实验室内SD(或CV)与预定的限度进行比较。
4.3.3.2 1 复测次数n的选择
重复测量的次数n主要取决于a和β的值以及评定精密度所选择的假设条件.通常假设在自由度v=n-1时a=0.05.β=0.01的临界值与o.和om比率的关系作为判定标准,表1给出了不同自由度下a=0.05 .β=0.01时,测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的判定临界值.
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标准内容
ICS11.100
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1455—2016
应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南
Guidelines for values assignment of catalytic activity concentrations of enzymesusing reference measurement procedures and evaluation of uncertainty2016-01-26发布
国家食品药品监督管理总局
2017-01-01实施
YY/T1455—2016
1范围
2规范性引用文件
符号和缩略语
参考测量程序的选择
建立潮源性
4.3参考测量程序的评定
4.4实验室内部质量控制
4.5样本测量
5测量不确定度评定
5.1不确定度的来源分析
5.2测量模型的建立
5.3标准不确定度的评定
5.4合成标准不确定度的计算
5.5扩展不确定度的确定
6测量结果及其不确定度评定结果的报告目
附录A（资料性附录）
酶学参考测量程序信息表
附录B（资料性附录）
限值在其他文献或活动中给出的信息附录C（资料性附录）LDH赋值过程及不确定度评定方法举例附录D（资料性附录）使用灵敏系数进行LDH测量不确定评定举例参考文献
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。YY/T1455—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家食品药品监督管理总局提出。本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。本标准起草单位：北京市医疗器械检验所、四川迈克科技生物股份有限公司、上海复星长征医学科学有限公司、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、宁波美康生物科技股份有限公司。本标准主要起草人：杨宗兵、吕磊、吴杰、王英国、邹继华。I
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1范围
应用参考测量程序对催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南
YY/T1455—2016
本标准规定了应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定的方法。本标准适用于体外诊断系统的参考测量实验室应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定工作。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T15000.3标准样品工作则（3）标准样品定值的一般原则和统计方法YY/T0638体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学潮源性
WS/T403—2012
临床生物化学检验常规项目分析质量指标3符号和缩略语
3.1符号
下列符号适用于本文件。
U.扩展不确定度。
Urel：相对扩展不确定度。
\uerel：合成不确定度。
a11a2：预先选择的调整值。
3.2缩略语此内容来自标准下载网
下列缩略语适用于本文件。
ALP：碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase）ALT：丙氨酸氨基转移酶（AlanineAminotransferase）AMY：淀粉酶（a-amylase)
AST：天门冬氨酸氨基转移酶（AspartateAminotransferase）BIPM：国际计量局（BureauInternationaldesPoidsetMesures）CK：肌酸激酶（CreatineKinase)CNAS：中国合格评定国家认可委员会（China National Accreditation Service for ConformityAssessment)
CRM：有证参考物质(CertifiedReferenceMaterial)CV.变异系数(Coefficientof Variance）1
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YY/T14552016
GGT：y-谷氨酰基转移酶（y-Glutamyltransferase）IFCC：国际临床化学和检验医学联合会（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratory Medicine)
ILAC.国际实验室认可合作组织（InternationalLaboratoryAccreditationCooperation）JCTLM：国际检验医学潮源联合会JointCommitteeforTraceabilityinLaboratoryMedicine)LDH：乳酸脱氢酶（LactateDehydrogenase）RELA：检验医学参考实验室室间质量评价（ExternalQualityAssessment forReferenceLaboratories in Laboratory Medicine
SD：标准（偏）差（StandardDeviation）4赋值
4.1参考测量程序的选择
4.1.1概述
人血清中酶催化活性浓度测定是临床诊断，治疗，监测的重要医学指标。酶学测量是临床化学中测量频率很高的项目，其标准化工作尤为重要。目前IFCC颁布的37C时酶学测量的参考方法主要有ALT、AST、ALP、AMY,GGT，CK，LDH七个项目。2002年JCTLM(由BIPM，IFCC.ILAC组成）开始运行参考测量程序实验室之间的质量评价（RELA）活动，为酶学测量的标准化起到了重要的推动作用。
4.1.2参考测量程序的选择
酶催化活性浓度测量的参考测量程序主要包括：JCTLM网站列表的参考测量程序（见附录A）、相关国家标准、行业标准中规定的参考测量程序。4.2建立潮源性
酶学测量中，IFCC出版了系列的一级参考测量程序。使用这一系列参考测量程序时，SI单位定义为“摩尔每秒立方米（mols-m-\）”，国际计量局将其命名为“卡特每立方米（katalm-\）”，是溯源等级的最高级，通常以μkat/L或U/L表示，1katalm-3=10μkat/L=6×10*U/L。作为酶学测量的测量标准，其催化活性浓度的测量按照37C时IFCC参考测量程序进行。运行参考测量程序时，试剂配制及每一步骤的测量均应严格按照IFCC程序详细规定进行，其中涉及的温度、质量、体积均溯源至我国法定计量单位。
为了建立，证明活性浓度测量的溯源性，对参考测量程序中规定的以下步骤应进行严格控制：a）称量：使用计量合格的万分之一天平（或十万分之一）进行所有称量；b）溶液配制过程中所涉及化学试剂的称量，全部按照试剂纯度换算后称进行称量；c）测量过程中的温度控制使用计量合格的高精度温度测量仪进行监测；所使用的分光光度计应定期检定和期间核查：a)
溶液配制用容量瓶和量简应使用称重法进行确认：e
结果处理使用合理有效的统计学方法。具体溯源性建立过程参见YY/T0638的规定。4.3参考测量程序的评定
4.3.1概述
4.3.1.1实验室运行参考测量程序时应使用CRM验证程序的正确度，使用特性值稳定的质量控制物2
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YY/T1455--2016
质验证程序的精密度，即测量结果的SD或CV和偏倚应落在实验室预定的限度内，该限度通常有多种来源。
4.3.1.2使用正确度验证物质进行测量过程的评定时，其测量结果的平均值应落在正确度验证物质规定的限度内，精密度（重复性）应落在实验室预定的限度内正确度验证物质宜选用国家或国际相关权威机构提供用于正确度验证的物质，IFCC提供的用于参考测量实验室室间质量评价的物质等。4.3.1.3关于预定的限度的确认通常考虑以下几点：a）认可方案的限度，如从CRM定值报告中获得；b）程序使用者或组织者给出的限度，如从正确度验证物质提供者获得；经验的限度，程序使用者根据先前测量过程中获得的值制定预定的限度或依据多家实验室测c）
量结果的中位值制定预定的限度d）采用标准文件给定的限度，如CNAS-CL33文件规定：IFCC参考方法对酶学参考物质的测量结果应在统计学达到无差异。
4.3.2CRM的选择
使用者在选择CRM时，应考虑参考测量程序和CRM的特性，同时应考虑CRM定值方法，预期用途及CRM证书上关于该CRM的详细使用说明。a）溯源性：CRM的特性值应有计量溯源性，并附有合理有效的测量不确定度；b）水平：CRM的标示值应在参考测量程序的测量范围内；c）基质：CRM的基质尽可能接近人血清基质d）分析物：CRM的分析物应与参考测量程序相同或是参考测量程序分析物的同工酶：e）最小取样量：CRM规定的最小取样量应小于参考测量程序规定用量；数量：CRM的量应满足整个实验用量；f
g）稳定性：CRM的稳定性应满足参考测量程序相关要求。4.3.3
参考测量程序测量精密度评定
4.3.3.1概述
精密度的评定，是将重复性条件或其他规定条件下实验室内SD（或CV)与预定的限度进行比较。4.3.3.2重复测量次数n的选择
重复测量的次数主要取决于和β的值以及评定精密度所选择的假设条件。通常假设在自由度v=n一1时α=0.05、β=0.01的临界值与和。比率的关系作为判定标准，表1给出了不同自由度下α=0.05、β=0.01时，测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的判定临界值。推荐的测量次数不少于10次。
表1不同自由度下α=0.05、β=0.01时，测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比1
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4.3.3.3评定方法
在重复性条件或其他规定的条件下，重复测量至少10次，用Grubbs法或其他适用统计方法进行异常值取舍后分别按式(1)、式（2)计算平均值工和标准偏差估计值s：台n
式中：
3：单个测量结果；
剔除离群值之后测量结果的数目。按式(3)计算比值：
式中：
测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的平方；Owa
实验室内标准偏差预定的限值：（1）
中e中中（2)
.（3）
注：Grubbs法或其他适用统计方法检查时，最多只能删除一个离群值，如取舍过多则表明测量过程存在间题。此时，应重新进行相关测量。
4.3.3.4结果判定
xable-
一表明测量过程达不到所要求的精密度。注：当实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值是实验室通过有限的测量次数获得时，通常情况下，将测量过程标准偏差（变异系数）和所要求标准偏差（变异系数）直接进行比较，判定结果。表2给出的推荐实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值为有限的测量次数获得的限值，因此，当使用表2的限值进行结果判定时，应将测量过程标准偏差（变异系数）和所要求标准偏差（变异系数）直接进行比较。表2实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值分析物
浓度区间/(U/L）
SD/(U/L)
浓度区间/(U/L)
≤120
参考测量程序测量正确度评定
4.3.4.1概述
≤125
≤100
≤100
正确度的评定，是将测量结果的平均值与CRM标示值或正确度验证物质允许的限度进行比较。测量结果的平均值与CRM标示值进行比较时，应考虑测量程序精密度的各实验室之间的分量，不应把CRM的不确定度简单的当做偏倚的允许限值使用。参考测量程序的测量结果不应使用修正因子进行修正。
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4.3.4.2评定方法
YY/T1455—2016
通常情况下，对所选用物质进行至少3次测量，计算平均值元和正确度评定物质标示值的差值或比较平均值元和正确度评定物质标示范围的关系。4.3.4.3结果判定
测量结果的SD（或CV)应符合表2的要求，测量结果平均值和正确度评定物质标示值的偏差应符合表3的要求或应在正确度评定物质的标示范围范围内。使用CRM进行评定时，有两个因素直接影响测量结果的判定，分别为：a）CRM标示值的不确定度；
b）待评定测量过程的测量不确定度，表示为D。对于严格按照GB/T15000.3制备的CRM，标示值的不确定度与测量过程的标准偏差@p相比应是很小的，这种情况下用式（4)作为可接受的准则。2--2p
式中α和α2是根据实际情况或技术的限制或规定由实验室事先选择的调整值，为保证测量结果的可靠性，通常情况下选择α，=α2=0。表3给出了运行参考测量程序时几种酶测量结果可接受的限值。如果和有特殊要求，应有充分的证据证明。在测量过程中不可能完全控制影响测量结果的因素，因此在每次测量中都存在随机误差，在正确度评定时应予以考虑。测量结果的随机波动分为两个部分：a）实验室内或短期波动，标准偏差为αw，5.是α的估计值。b）实验室间波动，标准偏差为aLM。如果实验仅在一个实验室内进行时，LM不能直接被确定。在大多数情况下，可以用在中间精密度条件下得到的标准偏差1代替aLM或使用CRM证书或其他来源，如适当的国际标准提供的aL代替LM。因此，%值的计算见式（5）：
（5）
在实际测量中，S与aLM相比很小，因此当重复次数（≥10）时，在式（5）中可以等于αLM或aL于是，式（4）可简化为式（6）：22
表3运行参考测量程序时几种酶测量结果偏倚可接受的限值分析物
浓度区间/(U/L)
绝对偏差/(U/L)
浓度区间/(U/L）
相对偏差
≤120
≤125
≤100
注1：所使用标准物质的不确定度小于该限值时，以该限值作为判定依据，所使用标准物质的不确定度大于该限值时，以不确定度作为判定依据。注2：关于限值在其他文献或活动中给出的信息见附录B。5
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4.4实验室内部质量控制
4.4.1概述
实验室应使用稳定、均勾的高低水平的质量控制物质，进行参考测量程序的质量控制。在每次实验时均应进行质量控制物质的测量，如有必要应建立相应的质量控制图。4.4.2质量控制物质的选择
由于参考测量程序的特殊性，对质量控制物质有一定的特殊要求，实验室应选择适宜的质量控制物质，可以选择以下几种来源的物质：a）RELA样品；
b）商品质量控制物质；
c）混合人血清等。
质量控制物质的均勾性、特性值浓度水平和稳定性应能满足预期要求。4.4.3质量控制物质的复溶/融化实验室应制定样本复落/融化的标准操作规程，保证每次试验样本处理的一致性。4.4.4质量控制物质范围
实验室应建立本实验室的质控合格范围。4.4.5质量控制物质结果
实验室应预先制定预期的SD（或CV)限值，当质量控制物质测量精密度满足规定要求时，计算测量结果的平均值并与质量控制物质范围进行比较。当其落在质量控制物质范围内时，可以运行参考测量程序，进行样本测量当其未落在质量控制物质范围内时，应重复试验进行确认并查找原因。适当时，应重新配制试剂。
4.5样本测量
4.5.1方案
在运行参考测量程序之前，实验室应对主要测量设备关键参数进行验证或内部校准，性能应符合参考测量程序要求。当参考测量程序的正确度满足要求后方可进行样本的赋值。赋值应至少进行两个实验批次，每个批次应至少进行3次测量。赋值结果的处理应使用统计学方法进行，适当时应对结果进行异常值（离群值）的取舍后再进行统计学处理。4.5.2数据处理
对所有测量结果使用Grubbs或其他适用统计方法进行异常值检查，别除离群值后计算所有结果的平均值和SD（或CV)，当SD(或CV)落在预定的限值内时，可报告结果；如SD(或CV)未落在预定的限值内时，应分析原因，适当时重新进行赋值。5测量不确定度评定
5.1不确定度的来源分析
5.1.1概述
测量不确定度是根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数。国家认可机构发布的6
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相关文件中规定，参考测量实验室（校准实验室）出具的测量结果应附有测不确定度，因此，使用参考测量程序赋值时应进行测量不确定度的评定。使用参考测量程序进行酶催化活性浓度测量，不确定度来源于多方面的因索。因此评定不确定度时，应考虑所有可能产生不确定度的因素，比如定义的不完整或测量方法的局限性、样本基质不同、试剂、测量条件、仪器设备、所涉及常数引起的不确定度、统计学处理以及实验室测量精密度等方面。但对于酶学参考测量程序赋值的不确定度来说，还应进行参考测量程序规定限值的不确定度的评定，本文评定方法中不包括该类不确定度的评定。5.1.2不确定度来源
5.1.2.1定义的不完整或测量方法的局限性对于酶学测量，由于定义的不完整或测量方法的局限性引起的不确定度主要是分析物的结构不一，绝大多数的酶存在同工酶，不同的同工酶和反应液具有不同的反应性。5.1.2.2样本基质不同
当评定不同于人血清基质样本的不确定度时，应考虑样本的基质效应。5.1.2.3试剂
试剂来源主要有两个方面：
a配制反应液，启动液所需的原料试剂。如试剂纯度不足或杂质超限，试剂中含有酶的抑制剂或激活剂、不同批次试剂之间的差异、显色物质最大吸收波长等：b）酶学反应所需的反应液、启动液。如已配制好的溶液具有不稳定性、底物浓度或缓冲液。5.1.2.4测量条件
影响结果的测量条件主要有：
测量时的环境温度、湿度；
反应过程中试剂的蒸发；
反应过程中混合液的温度；
d）反应时间；
延迟时间：
反应过程中的混匀：
反应混合液的pH。
仪器设备
下列仪器设备会影响测量结果：a）容量瓶：使用容量瓶定容时的温度、容量瓶体积；b）酸度计：调节pH时，酸度计的温度补偿；c）分光光度计：波长准确度、半波宽、透射比的准确度、稳定性、读数重复性；d）秒表：时间的准确性；
比色血：光径：
f）加样设备：加样准确度、重复性、试剂样本加样的体积比：g）天平：准确度、重复性、偏载误差；h）温度计：温度测量的准确度。7
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5.1.2.6所涉及常数引起的不确定度最终显色物质的摩尔消光系数（e）的不确定度影响测量结果。5.1.2.7统计学处理
测量数据统计处理中的数值修约、异常值（离群值）取舍影响测量结果。5.1.2.8实验室测量精密度
牌学测量其测量条件比较产格，反应过程中的温度控制，浴液PH值的下降或上升，样本中分析物特性值的不稳定性直接影响测量结果，因此，测量精密度是影响测量结果可靠程度的主要因素。5.1.3可忽略的不确定度来源
下列不确定度来源在此文件中予以忽略：a）在酶学测量中，考虑到底物浓度过量，同时称量使用万分之一天平进行，定容使用至少10mL的容量瓶进行，质量和体积引起的不确定度非常小，因此，浴液配制过程中引起的不确定度在此予以忽略；
b）测量过程中，由于试剂提前加热到37C且反应在密闭的环境中进行，试剂蒸发引起的不确定度在此予以忽略；
c）每次实验前配制试剂，因此试剂不稳定引起的不确定度在此予以忽略：d）时间的不确定度对于测量结果的不确定度贡献及其微小，在此予以忽略：e
光径的不确定度引起吸光度的测量不确定度，光径的相对标准不确定度为0.05%，酶学测量中精密度引起的测量不确定度约为1%，因此，光径的不确定度在此予以忽略；f）本文件是赋值的不确定度评定指南，其评定过程中不包括样本复溶因素引起的不确定度来源。5.1.4不确定度主要来源
不确定度主要来源有：
a）摩尔消光系数（e）；
吸光度变化率（会
反应液体积（Vreaction）；
启动液体积（Vstant）：
样本体积（Vsample）：
波长(A)；
温度（T);
PH值：
测量精密度。
测量模型的建立
酶催化活性浓度（U/L)测量结果的计算见式(7)：C =AX10 × Ymn +Ymcon + Vm
Vesample
o··（7）
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中华人民共和国医药行业标准
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2017-01-01实施
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1范围
2规范性引用文件
符号和缩略语
参考测量程序的选择
建立潮源性
4.3参考测量程序的评定
4.4实验室内部质量控制
4.5样本测量
5测量不确定度评定
5.1不确定度的来源分析
5.2测量模型的建立
5.3标准不确定度的评定
5.4合成标准不确定度的计算
5.5扩展不确定度的确定
6测量结果及其不确定度评定结果的报告目
附录A（资料性附录）
酶学参考测量程序信息表
附录B（资料性附录）
限值在其他文献或活动中给出的信息附录C（资料性附录）LDH赋值过程及不确定度评定方法举例附录D（资料性附录）使用灵敏系数进行LDH测量不确定评定举例参考文献
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。YY/T1455—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家食品药品监督管理总局提出。本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。本标准起草单位：北京市医疗器械检验所、四川迈克科技生物股份有限公司、上海复星长征医学科学有限公司、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、宁波美康生物科技股份有限公司。本标准主要起草人：杨宗兵、吕磊、吴杰、王英国、邹继华。I
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1范围
应用参考测量程序对催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南
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本标准规定了应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定的方法。本标准适用于体外诊断系统的参考测量实验室应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定工作。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T15000.3标准样品工作则（3）标准样品定值的一般原则和统计方法YY/T0638体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学潮源性
WS/T403—2012
临床生物化学检验常规项目分析质量指标3符号和缩略语
3.1符号
下列符号适用于本文件。
U.扩展不确定度。
Urel：相对扩展不确定度。
\uerel：合成不确定度。
a11a2：预先选择的调整值。
3.2缩略语此内容来自标准下载网
下列缩略语适用于本文件。
ALP：碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase）ALT：丙氨酸氨基转移酶（AlanineAminotransferase）AMY：淀粉酶（a-amylase)
AST：天门冬氨酸氨基转移酶（AspartateAminotransferase）BIPM：国际计量局（BureauInternationaldesPoidsetMesures）CK：肌酸激酶（CreatineKinase)CNAS：中国合格评定国家认可委员会（China National Accreditation Service for ConformityAssessment)
CRM：有证参考物质(CertifiedReferenceMaterial)CV.变异系数(Coefficientof Variance）1
HTiKAoNi KAca
YY/T14552016
GGT：y-谷氨酰基转移酶（y-Glutamyltransferase）IFCC：国际临床化学和检验医学联合会（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratory Medicine)
ILAC.国际实验室认可合作组织（InternationalLaboratoryAccreditationCooperation）JCTLM：国际检验医学潮源联合会JointCommitteeforTraceabilityinLaboratoryMedicine)LDH：乳酸脱氢酶（LactateDehydrogenase）RELA：检验医学参考实验室室间质量评价（ExternalQualityAssessment forReferenceLaboratories in Laboratory Medicine
SD：标准（偏）差（StandardDeviation）4赋值
4.1参考测量程序的选择
4.1.1概述
人血清中酶催化活性浓度测定是临床诊断，治疗，监测的重要医学指标。酶学测量是临床化学中测量频率很高的项目，其标准化工作尤为重要。目前IFCC颁布的37C时酶学测量的参考方法主要有ALT、AST、ALP、AMY,GGT，CK，LDH七个项目。2002年JCTLM(由BIPM，IFCC.ILAC组成）开始运行参考测量程序实验室之间的质量评价（RELA）活动，为酶学测量的标准化起到了重要的推动作用。
4.1.2参考测量程序的选择
酶催化活性浓度测量的参考测量程序主要包括：JCTLM网站列表的参考测量程序（见附录A）、相关国家标准、行业标准中规定的参考测量程序。4.2建立潮源性
酶学测量中，IFCC出版了系列的一级参考测量程序。使用这一系列参考测量程序时，SI单位定义为“摩尔每秒立方米（mols-m-\）”，国际计量局将其命名为“卡特每立方米（katalm-\）”，是溯源等级的最高级，通常以μkat/L或U/L表示，1katalm-3=10μkat/L=6×10*U/L。作为酶学测量的测量标准，其催化活性浓度的测量按照37C时IFCC参考测量程序进行。运行参考测量程序时，试剂配制及每一步骤的测量均应严格按照IFCC程序详细规定进行，其中涉及的温度、质量、体积均溯源至我国法定计量单位。
为了建立，证明活性浓度测量的溯源性，对参考测量程序中规定的以下步骤应进行严格控制：a）称量：使用计量合格的万分之一天平（或十万分之一）进行所有称量；b）溶液配制过程中所涉及化学试剂的称量，全部按照试剂纯度换算后称进行称量；c）测量过程中的温度控制使用计量合格的高精度温度测量仪进行监测；所使用的分光光度计应定期检定和期间核查：a)
溶液配制用容量瓶和量简应使用称重法进行确认：e
结果处理使用合理有效的统计学方法。具体溯源性建立过程参见YY/T0638的规定。4.3参考测量程序的评定
4.3.1概述
4.3.1.1实验室运行参考测量程序时应使用CRM验证程序的正确度，使用特性值稳定的质量控制物2
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质验证程序的精密度，即测量结果的SD或CV和偏倚应落在实验室预定的限度内，该限度通常有多种来源。
4.3.1.2使用正确度验证物质进行测量过程的评定时，其测量结果的平均值应落在正确度验证物质规定的限度内，精密度（重复性）应落在实验室预定的限度内正确度验证物质宜选用国家或国际相关权威机构提供用于正确度验证的物质，IFCC提供的用于参考测量实验室室间质量评价的物质等。4.3.1.3关于预定的限度的确认通常考虑以下几点：a）认可方案的限度，如从CRM定值报告中获得；b）程序使用者或组织者给出的限度，如从正确度验证物质提供者获得；经验的限度，程序使用者根据先前测量过程中获得的值制定预定的限度或依据多家实验室测c）
量结果的中位值制定预定的限度d）采用标准文件给定的限度，如CNAS-CL33文件规定：IFCC参考方法对酶学参考物质的测量结果应在统计学达到无差异。
4.3.2CRM的选择
使用者在选择CRM时，应考虑参考测量程序和CRM的特性，同时应考虑CRM定值方法，预期用途及CRM证书上关于该CRM的详细使用说明。a）溯源性：CRM的特性值应有计量溯源性，并附有合理有效的测量不确定度；b）水平：CRM的标示值应在参考测量程序的测量范围内；c）基质：CRM的基质尽可能接近人血清基质d）分析物：CRM的分析物应与参考测量程序相同或是参考测量程序分析物的同工酶：e）最小取样量：CRM规定的最小取样量应小于参考测量程序规定用量；数量：CRM的量应满足整个实验用量；f
g）稳定性：CRM的稳定性应满足参考测量程序相关要求。4.3.3
参考测量程序测量精密度评定
4.3.3.1概述
精密度的评定，是将重复性条件或其他规定条件下实验室内SD（或CV)与预定的限度进行比较。4.3.3.2重复测量次数n的选择
重复测量的次数主要取决于和β的值以及评定精密度所选择的假设条件。通常假设在自由度v=n一1时α=0.05、β=0.01的临界值与和。比率的关系作为判定标准，表1给出了不同自由度下α=0.05、β=0.01时，测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的判定临界值。推荐的测量次数不少于10次。
表1不同自由度下α=0.05、β=0.01时，测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比1
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4.3.3.3评定方法
在重复性条件或其他规定的条件下，重复测量至少10次，用Grubbs法或其他适用统计方法进行异常值取舍后分别按式(1)、式（2)计算平均值工和标准偏差估计值s：台n
式中：
3：单个测量结果；
剔除离群值之后测量结果的数目。按式(3)计算比值：
式中：
测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的平方；Owa
实验室内标准偏差预定的限值：（1）
中e中中（2)
.（3）
注：Grubbs法或其他适用统计方法检查时，最多只能删除一个离群值，如取舍过多则表明测量过程存在间题。此时，应重新进行相关测量。
4.3.3.4结果判定
x
一表明测量过程达不到所要求的精密度。注：当实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值是实验室通过有限的测量次数获得时，通常情况下，将测量过程标准偏差（变异系数）和所要求标准偏差（变异系数）直接进行比较，判定结果。表2给出的推荐实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值为有限的测量次数获得的限值，因此，当使用表2的限值进行结果判定时，应将测量过程标准偏差（变异系数）和所要求标准偏差（变异系数）直接进行比较。表2实验室内标准偏差（变异系数）预定的限值分析物
浓度区间/(U/L）
SD/(U/L)
浓度区间/(U/L)
≤120
参考测量程序测量正确度评定
4.3.4.1概述
≤125
≤100
≤100
正确度的评定，是将测量结果的平均值与CRM标示值或正确度验证物质允许的限度进行比较。测量结果的平均值与CRM标示值进行比较时，应考虑测量程序精密度的各实验室之间的分量，不应把CRM的不确定度简单的当做偏倚的允许限值使用。参考测量程序的测量结果不应使用修正因子进行修正。
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4.3.4.2评定方法
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通常情况下，对所选用物质进行至少3次测量，计算平均值元和正确度评定物质标示值的差值或比较平均值元和正确度评定物质标示范围的关系。4.3.4.3结果判定
测量结果的SD（或CV)应符合表2的要求，测量结果平均值和正确度评定物质标示值的偏差应符合表3的要求或应在正确度评定物质的标示范围范围内。使用CRM进行评定时，有两个因素直接影响测量结果的判定，分别为：a）CRM标示值的不确定度；
b）待评定测量过程的测量不确定度，表示为D。对于严格按照GB/T15000.3制备的CRM，标示值的不确定度与测量过程的标准偏差@p相比应是很小的，这种情况下用式（4)作为可接受的准则。2--2p
式中α和α2是根据实际情况或技术的限制或规定由实验室事先选择的调整值，为保证测量结果的可靠性，通常情况下选择α，=α2=0。表3给出了运行参考测量程序时几种酶测量结果可接受的限值。如果和有特殊要求，应有充分的证据证明。在测量过程中不可能完全控制影响测量结果的因素，因此在每次测量中都存在随机误差，在正确度评定时应予以考虑。测量结果的随机波动分为两个部分：a）实验室内或短期波动，标准偏差为αw，5.是α的估计值。b）实验室间波动，标准偏差为aLM。如果实验仅在一个实验室内进行时，LM不能直接被确定。在大多数情况下，可以用在中间精密度条件下得到的标准偏差1代替aLM或使用CRM证书或其他来源，如适当的国际标准提供的aL代替LM。因此，%值的计算见式（5）：
（5）
在实际测量中，S与aLM相比很小，因此当重复次数（≥10）时，在式（5）中可以等于αLM或aL于是，式（4）可简化为式（6）：22
表3运行参考测量程序时几种酶测量结果偏倚可接受的限值分析物
浓度区间/(U/L)
绝对偏差/(U/L)
浓度区间/(U/L）
相对偏差
≤120
≤125
≤100
注1：所使用标准物质的不确定度小于该限值时，以该限值作为判定依据，所使用标准物质的不确定度大于该限值时，以不确定度作为判定依据。注2：关于限值在其他文献或活动中给出的信息见附录B。5
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4.4实验室内部质量控制
4.4.1概述
实验室应使用稳定、均勾的高低水平的质量控制物质，进行参考测量程序的质量控制。在每次实验时均应进行质量控制物质的测量，如有必要应建立相应的质量控制图。4.4.2质量控制物质的选择
由于参考测量程序的特殊性，对质量控制物质有一定的特殊要求，实验室应选择适宜的质量控制物质，可以选择以下几种来源的物质：a）RELA样品；
b）商品质量控制物质；
c）混合人血清等。
质量控制物质的均勾性、特性值浓度水平和稳定性应能满足预期要求。4.4.3质量控制物质的复溶/融化实验室应制定样本复落/融化的标准操作规程，保证每次试验样本处理的一致性。4.4.4质量控制物质范围
实验室应建立本实验室的质控合格范围。4.4.5质量控制物质结果
实验室应预先制定预期的SD（或CV)限值，当质量控制物质测量精密度满足规定要求时，计算测量结果的平均值并与质量控制物质范围进行比较。当其落在质量控制物质范围内时，可以运行参考测量程序，进行样本测量当其未落在质量控制物质范围内时，应重复试验进行确认并查找原因。适当时，应重新配制试剂。
4.5样本测量
4.5.1方案
在运行参考测量程序之前，实验室应对主要测量设备关键参数进行验证或内部校准，性能应符合参考测量程序要求。当参考测量程序的正确度满足要求后方可进行样本的赋值。赋值应至少进行两个实验批次，每个批次应至少进行3次测量。赋值结果的处理应使用统计学方法进行，适当时应对结果进行异常值（离群值）的取舍后再进行统计学处理。4.5.2数据处理
对所有测量结果使用Grubbs或其他适用统计方法进行异常值检查，别除离群值后计算所有结果的平均值和SD（或CV)，当SD(或CV)落在预定的限值内时，可报告结果；如SD(或CV)未落在预定的限值内时，应分析原因，适当时重新进行赋值。5测量不确定度评定
5.1不确定度的来源分析
5.1.1概述
测量不确定度是根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数。国家认可机构发布的6
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相关文件中规定，参考测量实验室（校准实验室）出具的测量结果应附有测不确定度，因此，使用参考测量程序赋值时应进行测量不确定度的评定。使用参考测量程序进行酶催化活性浓度测量，不确定度来源于多方面的因索。因此评定不确定度时，应考虑所有可能产生不确定度的因素，比如定义的不完整或测量方法的局限性、样本基质不同、试剂、测量条件、仪器设备、所涉及常数引起的不确定度、统计学处理以及实验室测量精密度等方面。但对于酶学参考测量程序赋值的不确定度来说，还应进行参考测量程序规定限值的不确定度的评定，本文评定方法中不包括该类不确定度的评定。5.1.2不确定度来源
5.1.2.1定义的不完整或测量方法的局限性对于酶学测量，由于定义的不完整或测量方法的局限性引起的不确定度主要是分析物的结构不一，绝大多数的酶存在同工酶，不同的同工酶和反应液具有不同的反应性。5.1.2.2样本基质不同
当评定不同于人血清基质样本的不确定度时，应考虑样本的基质效应。5.1.2.3试剂
试剂来源主要有两个方面：
a配制反应液，启动液所需的原料试剂。如试剂纯度不足或杂质超限，试剂中含有酶的抑制剂或激活剂、不同批次试剂之间的差异、显色物质最大吸收波长等：b）酶学反应所需的反应液、启动液。如已配制好的溶液具有不稳定性、底物浓度或缓冲液。5.1.2.4测量条件
影响结果的测量条件主要有：
测量时的环境温度、湿度；
反应过程中试剂的蒸发；
反应过程中混合液的温度；
d）反应时间；
延迟时间：
反应过程中的混匀：
反应混合液的pH。
仪器设备
下列仪器设备会影响测量结果：a）容量瓶：使用容量瓶定容时的温度、容量瓶体积；b）酸度计：调节pH时，酸度计的温度补偿；c）分光光度计：波长准确度、半波宽、透射比的准确度、稳定性、读数重复性；d）秒表：时间的准确性；
比色血：光径：
f）加样设备：加样准确度、重复性、试剂样本加样的体积比：g）天平：准确度、重复性、偏载误差；h）温度计：温度测量的准确度。7
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5.1.2.6所涉及常数引起的不确定度最终显色物质的摩尔消光系数（e）的不确定度影响测量结果。5.1.2.7统计学处理
测量数据统计处理中的数值修约、异常值（离群值）取舍影响测量结果。5.1.2.8实验室测量精密度
牌学测量其测量条件比较产格，反应过程中的温度控制，浴液PH值的下降或上升，样本中分析物特性值的不稳定性直接影响测量结果，因此，测量精密度是影响测量结果可靠程度的主要因素。5.1.3可忽略的不确定度来源
下列不确定度来源在此文件中予以忽略：a）在酶学测量中，考虑到底物浓度过量，同时称量使用万分之一天平进行，定容使用至少10mL的容量瓶进行，质量和体积引起的不确定度非常小，因此，浴液配制过程中引起的不确定度在此予以忽略；
b）测量过程中，由于试剂提前加热到37C且反应在密闭的环境中进行，试剂蒸发引起的不确定度在此予以忽略；
c）每次实验前配制试剂，因此试剂不稳定引起的不确定度在此予以忽略：d）时间的不确定度对于测量结果的不确定度贡献及其微小，在此予以忽略：e
光径的不确定度引起吸光度的测量不确定度，光径的相对标准不确定度为0.05%，酶学测量中精密度引起的测量不确定度约为1%，因此，光径的不确定度在此予以忽略；f）本文件是赋值的不确定度评定指南，其评定过程中不包括样本复溶因素引起的不确定度来源。5.1.4不确定度主要来源
不确定度主要来源有：
a）摩尔消光系数（e）；
吸光度变化率（会
反应液体积（Vreaction）；
启动液体积（Vstant）：
样本体积（Vsample）：
波长(A)；
温度（T);
PH值：
测量精密度。
测量模型的建立
酶催化活性浓度（U/L)测量结果的计算见式(7)：C =AX10 × Ymn +Ymcon + Vm
Vesample
o··（7）
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