YY/T 0606.9-2007.
YY/T0606本部分规定了用于外科植入物和组织工程医疗产品透明质酸钠的要求.试验方法、检验规则.标志、包装、运输和贮存等要求
YY/T 0606.9适用于透明质酸钠，添切质酸钠可以用于制备外科植物和组织工程医疗产品。
2规范性引用文件
下列文件中的条款逾r0606的本部分的引用而成为本视分的系款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改工包括勘误的由容)或修订版均干适用于本司分.然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是可使角这些本的引月文件其最新版本适用于本.部分。
GB 191- -20901装储运图
GB/T 1451 - 194胶粘旁定(neq Np972)
GB/T 16882001 医疗物学评价第1部与 试验(id ISO 0993-1:1997)
GB/T 1681997 医专毒性、致瓶性和生殖毒性试验(idt
ISO 10993-3;1 IGB/T 168 C-2003医疗
1液相互作用试验选择(ISO 10993-4:2002,IDT)
GB/T 16886. 5-2003医疗物学评价第5 细胞毒性验(]5O10993-5:1999，IDT)
GB/T 16886997 医疗t后局部反应试(idt ISO 10993-6:1994)
GB/T 16886.医售刺激与迟发型超敏反应试验(ISO10993- 10:2002 ,IDT)
GB/T 16886. 11医疗器械生物学评价 第11部分:全身毒性试检(idt ISO 10993-11:1993)
GB/T 16886. 12- -2065X限器械生物学评价 第 12部分作品制备与参照样品(ISO 10993-12:2002,IDT)
YY/T 0313- -1998医 用高分子制品包装、标志、运输和贮存
YY 0466- 2003 医疗 器械用于医疗器械标签 标记和提供信息的符号( ISO 15233 :2000,IDT)
中华人民共和国药典(2005年版,二部)
3术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T 0606的本部分。
3.1透明质酸hyaluronic acid

YY/T0606.9—2007
规范性引用文件
术语和定义
试验方法
检验规则
包装、运输和帖存..
附录A(规范性附录）
附录 B(现范性附录)
录C(规范性附录）
附录D(资料性附录）
蔡考文献
透明质酸钠葡萄糖醛酸含量测定透明质酸钠皆白质含量测定
透质酸钠中乙醇残留量测定（质空气相色谱法）背景资料
rKAONrKAca-
YY060F组织工程医疗产品》分为：第「部分:迪用要求；
：第艺部分：术语学；
一第3部分：通同分类：
第4部分：皮肤告代品（物)的术活和分类：第5部分：基质及支架的性能和测试：--第5部分：「型胶原袭：
.一第7部分·壳聚糖：
第8部分：海酸钠：
第9部分：透明质酸钠：
第10部分：修复或再关节软骨的人物体为评价；一第12部分：细胞、组织、器方的加工处理指南：第13部分：产品保行
第16部分：活纵胞或组织的海藻酸盐凝胶固定或微囊化指南。本部分为￥Y/T0606的篇9部分
本部分的附录A、附录3和际录（显规范性附录-附录）是资料性附录：，个部分山国家食品药品监督管理局提息。本部分由中国药品生物制品检定所归「rKAoNrKAca=
YY/T 0606.9—2007
宏部分起学中：上海共胜生物材料技术研究所、户国药品牛物制品检定所医疗械检验中心本部分正要起革人：顾其性、黄治本、冕廷斐。范围
组织工程医疗产品
第9部分：透明质酸钠
rKAONrKAca-
YY/T 0606.9-—2007
YY/TC696本部分规定了用于外科植人物利组织工程医疗产品透明质酸钠的要求、试验方法，检验规则、标志、包装、运输和贮存等要求本部分适用于透明质酸钠，透质酸钠可以用于制备外科梢头物和组织工程医疗产品。2规范性引用文件
下0506的本部分的引用而成为在部分的系款。儿尼注日期的引用文
下列文件中的条款
件，其随后所有的修难括勘误的战修
协议的各方研究是
部分。
GB 191—204
G3/T 1151
GB/T 168
G1/T 168
IS0 10993-3: 1
GB/T158
4 :2002.1Dt3
CB/T 1688
用这些
装储运图
胶粘希
GB/T 16886
GB/T 16886.
10993 10.2002,1T
GB/T 16886. 11
G13/T 16886.12
2002,DT)
则（gN
物学评
初学评值
第1首
分，然预，鼓励根据本部分达成用于本部
朝的引的文
具最新版本适用于本
与试验(id1S00993-1：1997)
专毒性、致症性和生殖毒性试验(ictt液相立作用试驶选择(1S0)10993-细胞毒性读验（0）10993-3：1999后局部反应试金（idtIS0）10993-6：刺激与迟发型超敏反应试验(ISO)第11部分：全号每性试
疗器械尘物学评价
(irdt 10 19993-11: 1993)
《醒械生物学评价
第12部分样品制名，
与参照样品（IS()1099312：
YY/T 0313—1998医用高了制品包装、标志、运输和存YY0466：2003医疗器械用手医症器撼标签标记和提供信息的符号（1S0）15233;2000,II)T)中华人民共和国药典（2005版.二部）3术语和定义
下列术语和定义用于YY/T0606的本部分。3.1
透明质酸hyaluronic:acid
透明质酸是一种由D-葡菊糖醛酸和N-乙酰基D葡萄糖胺通过3（1 3)皆键连接而成的双糖重复结构单元组成的线性多糖。每个双糖单通过3-(1-4)糖节键与刃个连接起来。YY/TD606.9—2007
透明质酸钠
odiumhyaluronate
透明质酸钠是透明成酸的钠盐形式-其结构单儿分于量为4,分子结构式如下[图所示洗：其他关于透明质酸的介绍请参见距求”，COONa
4分类
透明质酸钠的分了式（结构单元）NHCOCH,
透明质酸纳按照原料来源利制备方法不同，可以分为纠织提取型利细菌发磷型5要求
5.1外观
色或淡黄色粉木状丝状固体行何肉眼可现异物傅甲变换红外光谱（ITIR）
rKAONrKAca-
透听质峻钠典型的FT-IR频率(cm-) 3 275~330(b）、1615(s)、！103(m）, 377(m）1 150、1 077,1 045(s).916(+n),893(w).洋：s,强的;:中等的;w:弱的;h:觉的，5.3茄糖性酸含量
40%（质量分数），
0. 5兴浓度溶液的 pH 直为 6. 0-~7. :5.5特性梳数（分广量）
不同产品的特性桔数（分了量）应不低1其自立规定的标示值。5.6动力粘度
不同产品的动力粘度应不低」其白身规是的标示值。5.7
歪质含量
0.1%（质量分数）
重经属含型
10μg/8（质分数）
乙醇残余量
400 g/mg（质量分数），
注：如在一过程中硬同了等醇之死的其他气机泽判，建立相声的检验托标和检验法5.101物质含量
290%（质量分数）
5.11灰分
10%（质量分数）
许：透即税钠分（上的钠盐占落个分一总或的7，2
5.12紫外吸收
28cntm处00值1.0:230nm处0D值1.05.13尤菌试验
府龙菌，
注；如暴透明质酸钠以非无谢的方式提供,则最终用户志进行灭函处理以达到无常要求。5.14细菌内素限量
.0. 5 Et/mg.
rKAONrKAca-
YY/T 0606.9—2007
让：如果透明顶酸钠以非无函的方式提供，则最终用广需进行去除细出内再烹的处理以达到细菌内声案限呈要求。5.15原材料安全
5.15.1牛物发酵法制备的透明质酸钠应进行血性链球阅血素试验，结果应无溶血不5.15.2组织提取法制备的透明质酸钠应逊行相关的检验检疫.结贝应台格，5.16生物学性能
5.16.1总则
透明质酸钠成按照GB/T1688！：「的装求进行物学评价：破不释放出讨人体有不良作用的物质5. 16.2细胞毒性试验
细胞性反成不大工1级，
5.16.3度内反应试验
原发州刺激指数(PⅡ)不人于0.：5.16.4急性全身带性
光急性全身毒性。
5.16.5济血试验
无溶血度应，
5.16.6致墩试验
应无皮肤敛敏反应，
5.16.7支下植人试验
值人14 d后组织反应与附性对照尤显著差异5.16.8遗传性试验
先运传荐性：
6试验方法
6.1外观
使用肉眼直接观测，应衍合5.」规定6.2傅里叶变换红外光谱（FT-IR）祥品制备采用溴化评压片法.按照《中华人无共和国药典》21年版，二部)附录（规定的方法测定-应符合 5.2规定
6.3葡萄糖醛酸含量测定
按照附录A规定的方法测定，成符台5.3规定，6.4pH值测定
透明质酸钠币蒸馏水配制成5mg/ml.浓度溶液，按照（13/111518规定的力法测定，成符介5.1规定。
6.5特性粘数测定
透明质酸的溶液浓度以流出时间为滩.应控制在[2)3S05范内，-般用牛理盐水溶解至1mg/ml.按照中华人民共和国药典》2005年版：二部）附录VG第三法测定，应符合5.5规定。YY/T 0606.9—2007
特性料数用以表征透明质酸钠的分子量，两者的关系见下式。7 - 0.036M 0.78
式中：
特性黏数.单位为立.方庵米每克（ctn/g)；M一分子量。
6. 6 动力粘度测定
-rKAONrKAca-
透明质酸钠用蒸馏水配制成10mg/ml..采用旋转式粘度计：按照《中华人民共和国药典》（20)05年版，二部)附录研 G第二法测定,应符合 5.6 规定6. 7蛋白质含量测定
按照附录B现定的方法(可任邀一种方法)测定,应符介5.7规定注：库冯斯充蓝法为仲裁方法，6.8重金属含量测定
透明质酸钠用蒸馏水
人民共和国药典》（2005
6. 9 乙醇残余量测定
接照附录C 规定
6. 10 干物质含量
mg/ml.作样品管,标准铅溶液 1.0L于称准对照管中·按照《中华
部)附暴
测定：
按照中华人国共和国药典》2
量应符合5.10规
6.11灰分测定
精密称取透明
测定，800℃灼烧6
6.12紫外吸收测
钠1.0g·按
符合J1
透明质酸钠用主
水配制成
录NA规定的方然
应符合 5.
6. 13无菌试验
按无出操作要求美
5. 13 规定。
女华人民
6. 14细菌内毒素限量试验
三然测
部)附录殖
5.8规放
燥失重法翘定新得的下物质含
华大民共和国药兴》公
的溶被，按照
版，二部)录研N规是的方汰
共和国药典（2005年版，一部)附录X H规定的方沃测定,应符合
透明质酸钠用组卤内毒素测水配制成：mg/nl.按照“中华人民共加国药典》2005年版、二部)附录X E规定的方决测定A 规定。6. 15原材料安全性试验
6.15.1溶血性链球菌溶血素试验透明质酸钠用生理盐水配制成1mg/ml.后取于mr，百接接种于血液琼脂平板培养基上，在37℃培养24h,应符合.5.15.1规定。
6.15.2检验检疫
针对不同的原材料成逃行不同的项目的检验检疫试验或状得相关的检验检疫证明。6.16生物学性能
6. 16. 1生物学性能
按照（13/T16886.12规定的方法制备实验样品，供下述实验使用，6. 16.2细胞毒性试验
按照（B/T16886.5规定的方法测定.应箱合5.16.2规定，4
6.16.3皮内反应试验
按照GB/I 16886.10 规定的方法测定,应符合 5.16.3 规定。6.16.4急性全身毒性
按照 GB/T 16886.11规定的腹腔注射方法测定,应符合 5.16.4 规定。6.16. 5溶血试验
按照GB/T 16886,4 规定的溶血试验方法测定.应符合 5.16.5规定。6.16.6致敏试验
按照B/T 16886. 10 规定的最大剂量方法测定,应符合 5.16.6规定。6.16.7皮下植入试验
-rKAONrKAca-
YY/T 0606.9--2007
按使用说明制备透明质酸溶。
，采用新西兰兔3只，兔脊柱两侧各选2个植人点，每点皮下注入透明质鞍(.5 InL、14 d后取样观察,其他试验步骤按照（B7-16886. 6 规定的方法测定,应符 5.16. 7规定。
6.16.8遗传毒性试验
按照GBT16889
测定，应符合5.16
7检验规则
7.1总则
美的An
投料，同
透胡质酸钠
出厂检验项目：
7.2型式检验
型式检驱
型式检
8标志
大包装成有
性能检验。
所有检验马
生产厂名和
产品名称；
产品注加号和
规格和数量；
生产批号或日期：
尖效口期；
忙行条件。
小包装应有下列标志：
产品名称：
生产厂名和地址；
规格和数量：
尘产批号或1期：
原料来源：
失效川期：
忙存条件。
编号：
琦变试翁（或小鼠精子试验)方法进行根据白已的生逆红艺，制定相应的到定为不合暂。
YY/T 0506.9—2007
8.3运标志应符合（3T194的观定。9包装,运输和贮存
包装成采用适宜的包装，确保透期质酸纳产品的安全性和有效性。产品的色装、忙存、运输应符合YY/T03.5的规定。9.2
rKAoNrKAca=
A.1原理
附录A
（规范性附录）
透明质酸钠葡萄糖醛酸含量测定rKAoNrKAca-
YY/T 0606.9—2007
透明质酸钠水解后，葡蕊糖醛酸与叶唑试剂作用牛红紫色，生成的颈色深浅与葡萄糖醛酸含量成正。
A.2设备
分析天平
紫外分光光度计或相当设备。
旋涡式混合器或相当设备：
A.3溶液制备
注：试验所用减剂均为分祈缅。A.3.10.1%的咔唑乙醇液
取C.1g唑，加无水乙醇100mT.溶解。移至深棕色瓶中，4℃下贮存，有效期为12个月。A, 3. 2葡萄糖醛酸(GA)标准溶液精确称取10 IIg葡萄糖醛酸于100InL容量瓶中，稀释至刻度，探匀.在4℃下贮存A.3.30.025mol/.的四硼酸钠硫酸溶液称娘9.54g的四硼酸钠（NizB,0.：10H,0),加人11浓硫酸中,加盖。不定时的振摇，直至四硼龄钠完全榕解。室识下贮存、有效期为12个H。A.4样品准备
透明质酸钠约 0.06 g 置于 50 ml. 容瓶巾,精称重,圳蒸馏水稀释至刻度，充分振荡混匀,使其究全溶解.从中吸出1.ml.置试管中。按式（A.1)计算样品管中透明质酸含量（ug/g）。C -m/m
武中．
m-透明质酸钠质量，单位为微克（ug），322
透明质酸钠和蒸馏水质量，单位为克（g）A.5测定步骤
按表A.1 制备葡萄糖酵酸标准波系列。表 A. 1葡萄糖醛酸(GA)标准液系列浓度试管号
GA 标准游液/mL
蒸馆水/m
GA 含量/(μg/ml.)
A.5.2标准被系列各试管和样品试管一起置于冰水浴中，用酸式定管缓慢地向每管中加人0.025mol/l.四硼酸钠硫酸（使用之前在4%℃冰箱内忙存至少2h)5mL，达加边搭勺。加毕后泥勾并置7
YY/T 0606.9—2007
rKAONrKAca-
沸水浴中煮沸20min后取出，冷却至室温。各试管内均加入咔唑乙醇溶液0.？mL，充分句后，置于室温（20%-10℃）2h，用0号管作对照，用分光光度计测定550nm处各标准管和样品管的吸光度A.5.3用标准管绘制吸光按-浓度曲线，根据样品管的吸光度值从标准曲线上查样品管相应葡葡糖醛酸含量。
A.6结果表示
按式（A.2)计算透明质酸钠葡葡糖醛酸含量(（%） -p:/ 100%
pi——样晶管中透明质酸钠含量，单格为微克每克（g/g）n一一样品管中葡萄糖醛酸食，单位为微点每克(ug/g)，CHIN
B.1福林酚法
B.1.1、原理
附录B
（规范性附录）
透明质酸钠蛋自质含量测定
-rKAONrKAca-
YY/T 0606.9—2007
福林酚试液能够与溶液中的蛋门或发生有色反应，且其颜也深浅与蛋白质的浓度成正比B. 1.2设备
分析天平、紫外分光光度齐或相当设备、旋涡式混合器或粮当设备。B.1. 3溶液制备
战剂A：称取
试剂B:称取
试剂C称
试剂D:临
试剂E：
试剂F:
注：实验所消讯
B, 1. 4标准溶液
B. 1. 4. 1
(约 200 μg/mL:
B. 1. 4. 2
精密毯
/硫酸（.uS0,·5H,O),加水溶解开释至No0 m..
家合酒。
g碳酸
等是所
将1份读。
,取福林酸
中分析纯。
五氧化二磷
逆标溶液
(浓度约为 1 μg/
B.1.5测定步骤S
B.1.5. 1精密移最
酸钠0.01g。
g/nL、4 h
各标准溶
B.1.5.2于上述各骨试剂
F.经旋涡振荡器混合后
B.1.6结果表示
用直线回归法计算结果
式中,
m酚试液)进行
平燥的牛血清蛋白对照距
g/nL,10 μg.
，加水
解并帮粹至100ml。
稀释笔
0 ng，加水解孝稀释至250 mL
5.0ml、10ml.稀释至100ml
1.0ml11样品管精密称取透明质
温散置10 r。
加人3. 0 mL试剂
水落放置 l0 nin,于 75 nm处测定吸端度。计算质酸钠蛋白质含量
--样品管巾透明质酸钠含量，单位为微克每克（ug/g)；p一一样品管中蛋白质含量，单位为微克每克（g/g）。B.2库马斯亮蓝法
B.2.1原理
人质量分素
..( B. 1)
库马斯充蓝（-250其有两种色调.在游离状态下呈红色与蛋白质结合后转为青色·且其色深浅与蛋白质的浓度成正比。
B.2.2设备
B. 2. 2. 1 分析天平。
YY/T 0606.9—2007
B.2.2.2紫外分光光度计或相当设备B,2.2.3旋涡式混合器或相当设备：B.2.3溶液制备
注：实验所用试剂均为分析
FrKAONrKAca-
B.2.3.1库马斯亮些G250试液：称取库马斯亮蓝（-250 100 mI.溶解丁50 ml.的 9%乙醇中,再人85%的磷酸00)ml.,并用蒸馏水稀释至1000 mL，置于棕色瓶内.案温贮存B.2.3.2岱l质标准液:精确吸段 5※人血清白蛋白标雅液0.2 ml 于 1 000 mL 穿量瓶中,用蒸溜水稀释允刻度,4℃下贮存，Www.bzxZ.net
B.2.4样品准备
取透明质酸纳约0.1，精确称重·加蒸僧水10TFL使其完溶解：充分振荡混句，使其完全溶解，从中吸串1n:I.置试管巾，按式(13.2)计算样品管中透明质酸含量P1（μg/g）-/
式中：
透听质酸钠质量：单位为微克（g）：一透明质酸钠和蒸馏水的质最.单位为克()；透明质酸测定浓值，%；
B.2.5 测定步骤
B.2.5.1按表13.1制备蛋白质标雅液系列，表B.1
蛋白质标准管溶液系列浓度
蛋H质标准济液/ml,
蒸馏水/ml.
蛋白质浓度/(g/uL)
---(13. 2)
B.2.5.2在标准液系列的各战管及样品试管4分别加人 5 ml.的压斯完蓝(G-250 溶液。用旋涡式混个器使试管中溶波充分混合-并在室温20C三i10℃下效置15i1，用0号管作对照.用分光光度计测定395 ntm处各标准管和样品管的吸光度B.2.5.3用标准管绘制吸光度-浓度前线，根据样品的吸光度从标准线上查得样品管的蛋门质含B, 2. 6结果表示
按式（B.)计算透明质酸钠蛋出质含员（（%）：=/p×100
式中：
-样品管中透明质酸钠含量，单位为微克克(以/)；栏品管中蛋门质含量，单位为微克每克（u/g）：10
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