YY/T 0606. 8-2008.Tissue engineered medical products- Part 8:Alginate.
YY/T0606的本部分适用于制备组织工程医疗产品及外科植人物的海濼酸钠。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过YY/T0606的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分.
GB/T 191包装储运 图示标志
GB/T 2828. 1- -2003技术抽样检验程序 第1部分:按接受质量限(AQL)检索的逐批检验抽样计划
GB/T 16886.1-2001医疗器 械生物学评价第 1部分:评价与试验(idt ISO 10993 1:1997)
GB/T 16886.3- -1997医疗器 械生物学评价第 3部分:遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验(idt ISO 10993-3:1992)
GB/T 16886.4 -2003医疗 器械生物学评价笫4部分:与血液相互作用试验选擇(ISO10993-4: 2002,IDT)
GB/T 16886.5-2003医疗 器械生物学评价第 5部分:体外细胞毒性试验(ISO 10993-5:1999,IDT)
GB/T 16886. 6-1997医疗器 械生物学评价第6部分:植入后局部反应试验(idt ISO 10993-4:1994)
GB/T 16886. 10- -2005医疗器械生物学评价第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验(ISO 10993-10:2002 ,IDT)
GB/T 16886.11- -1997医疗器械生 物学评价第11部分:全身毒性试验(idt ISO 10993-11:1993)
GB/T 16886. 12-2005医疗 器械生物学评价第12部分:样品制备与参照样品(ISO 10993-12:2002,IDT)
YY/T 0313-1998医 用高分子制品包装、标志、运输和贮存
中华入民共和国药典(2005版)关国药典USP26/NF21海藻酸钠
ASTMF2064-00作为用于生物医学和组织工程医用产品初始材料的海藁酸盐的表征和试验标准指南
ASTMF2259-03用于检测海藁酸盐的化学成分和序列结构的H-核磁共振({HNMR)标准实验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T 0606的本部分。

ICS11.040.40
中华人民共和国医药行业标准
YY/T 0606.8-2008
组织工程医疗产品
第8部分：海藻酸钠
Tissue engineered medical productsPart 8 :Alginate2008-04-25发布
数码纺
国家食品药品监督管理局
2009-06-01实施
YY/0606《组织工程医疗产品》分为：第1部分：通用要求；
第3部分：通用分类：
第4部分：皮肤产品的分类；
第5部分：基质及支架的性能和测试：第6部分：I型胶原蛋白；
第7部分：壳聚糖；
—第8部分：海藻酸钠：
第9部分透明质酸；
第10部分：修复或再生关节软骨的植人物体内评价；第12部分：细驱、组织器官的加工处理。本部分为YY/0606的第8部分
本部分的附录A、附录 B、附录C是规范性附录，附录D是资料性附录。本部分由国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心归口。本部分由国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心起草。本部分主要起草人：孙雪、美廷斐、陈亮YY/T 0606. 8—2008
1范围
组织工程医疗产品
第8部分：海藻酸钠
YY/T 0606.8--2008
YY/T0606的本部分适用于制备组织工程医疗产品及外科植人物的海萍酸钠。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过YY/T0606的本部分的引用而成为本部分的条款，凡是注日期的引用文件，衰随片所有的修改单（不包括谢误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T191包装储运图示标志
GB/T2828.1一2003技术抽样检验程序第1部分：按接受质量限（AQL)检紧的逐批检验抽样计划GB/T16886.1—2001医疗器械生：物学评价第1部分：评价与试验（idtISO10993-1:1997）GB/T16886.31997医疗器械生物学评价第3部分：遗传毒性.致癌性和生殖毒性试验(idt ISO 10993-3:1992)
GB/T16886.4--2003
医疗器械生物学评价第4部分：与血液相互作用试验选择（ISO10993-4.2002.IDT
GB/T 16886.5—2003
医疗器械生物学评价第5部分：体外细跑毒性试验（ISO10993-51999GB/T 16886.6—1997E
医疗器械生物学评价第6部分：植人后局部反应试验（idtISO10993-4：1994)
GB/T 18886. 102005
（JSO10993-10.2002,IDT)
医疗器械生物学评价第10部分：制激与这发型超敏反应试验GB/T16886.111997
医疗器械生物学评价第11部分：全身性试验（idtISO10993-111993)
GB/T16886.12—2005医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品（JSO10993-12：2002,D)
YY/T0313—1998医用高分子制品包装、标志，运输和贮存中华人民共和国药典（2005版）美国药典USP28/NF21海藻酸钠www.bzxz.net
ASTMF2064-00作为用于生物医学和组织工程医用产品初始材料的海亲酸盐的表征和试验标雁指南
ASTMF2259-03用于检测海酸盐的化学成分和序列结构的-H-核磁共振(HNMR)标准实验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于YY/T0606的本部分。3.1
分解decomposition
由于暴露在环境中，化学的或热的因素导致游酸钠结构的改变，例如温度高于180℃，分解作用YY/T 0606.8200B
可导致海藻酸钠产生毒变化
降解degradalion
降解是指材料的化学结构，物理性质或外观发生改变。案合物的降解通活依靠酸催化水解，断裂髓营键来实现，在受热时也常会发牛降解。降解不是分解。，对聚合韧而再，降近常是指解聚。3.3
解聚depolymerization
解璨是指聚合物链的长度缩小成为较短的链段。解素可以将聚合物变为寡糖和/或单精单元。对海酸钠而言，糖苷键的水解是解的首要因素。3.4
水合胶体hydrucolloid
当水合时水溶性聚合整形能体。3、5
平均分子盘mol@y
gassave
平均分子量最常期的表达方式
数的究
式中：
N—具有特
在一个多分营
3.0之间。
4要求
4. 1 性状
子量M的
子量M的
中,M>M
应为白色或巅
来状固情
4.2鉴别
通过傅里叶变换
(s),1 320(w),1 050~
4.3结构组成
碧（FI
ta/M，即分子量分布数证
（M），基计算公式如下：
藻酸钠的通常在1.0一
~3 370(b),1 613(s),1 416
A,903(m),600~710(的)。其中，s：强带m中缎带：弱带;b：宽带，测典型?H-NMR谱如图1系.
采用H-核磁共振光谱V
5.3+5.25.15.0*
4.0 4.74.64. 5
4.4平均分子量及其分子置分布
YY/T 0606.8—2008
平均分子量应符合产品标示值并注期检测方法。海酸钠的分子量分布数值在1.0~3.0之间。4.5干燥失重
应不大于15.0%（质量分数）。
4.6灰分
应为18.0%～27.0%（质量分数）。4.7金属含量
以铅计重金属总量应不大于0.004%（质量分数），其中碑含量应不大于0.00015%（质量分数），铅含量应不大于0.001%（质量分数）。4.8蛋白质含量
应不大于0.3%（质量分数）。
4.9细菌内毒素
应不大于0. 5EU/mL。
4.10微生物限度
细菌总量应不大于200CFU。
4.11生物学评价
4.11,1细胞毒性试验：细胞藓性反应应不大于1级。4.11.2皮内刺激试验：原发性刺激指数(PⅡ)应不大于0.4。4.11.3致敏试验：应无皮肤致敏反应。4.11.4意性全身毒性试验：应无急性全身事性反应。4.11.5溶血验：溶血率应不大于5%。4.11.6植入试验：皮下植人14d、30d和90d，组织反应与阴性对照无显著差异。4.11.7避传毒性试验：应无遗传毒性。5试验方法
5.1性状
肉眼观察，应符台4.1规定。
5.2鉴别
通过里叶变换红外光谱（FI-IR）测定（漠化钾压片法），应符合4.2规定。5.3结构组成
采用1H-核磁共振光谱(NMR)检测，试验方法详见附录A,应符合4.3规定。5.4平均分子量及其分子量分布
平均分子量可通过以下两种方法来确定：待性黏数法，以及凝胶渗透色谱联合多角度激光敬射测定仪(SEC-MALLS)测定分子量。试验方法详见附录 B,应符合4,4规定。5.5干燥失重
采用《中华人民共和国药典》（2005版二部附录L规定的方法测定。应符合4.5规定。5.6灰分
按照中华人民共和国药典（2005版）一部附录XK的方法测定，推荐应在800℃下灼烧至少6h。应符合4.6规定。
5.7重金离含量
按照中华人民共和国药典》（2005版）一部附录IXB第一法原子吸收分光光度法测定，应符合4.7规定。
YY/T 0606. 8-2008
5.8蛋白质含量
按照附录 C 规定的方法测定,应符合 4. 8 规定。5.9细菌内毒素
按照中华人民共和国药典（2005版）二部附录加E规定的方法进行测定。应符合4.9规定。5. 10微生物限度
按照中华人民共和国药典》（2005版）一部附录」规定的方法测定，应符合4，10规定。5.11生物学评价
5.11.1细胞毒性试验
按照CB/T16886.12规定的方法制备实验样品，然后按照GL%T16886.5规定的方法测定，应符合 4. 11. 1 规定。
5.11.2皮内刺激试验
按照 GB/T 16886. 1
合4. 11. 2规定。
5.11.3致敏试验
发-方法制备实验样品，然后按照GB/N6886.0规定的方法测定，应符按照GB/T16812规定的才
合 4. 11. 3 规定。
5.11.4急性全身每性试验
按照GB/T
合4.11.4规定。
5.11.5溶血试
按照 GB/T
含4.11.5规定。
5.11.6核入试验
12规定的才佳
12规定的了
实验样品，然后技
齿制备实验样品，然后接照
按照GB/T1492规定的方出制备
合 4. 11. 6 规定,
5. 11.7避传毒性试
按照GB/T1688
试验和染色体睛变试验
6检验规则
6.1批验
定的方
验样品·然后
16886.10规室的方法测定，应符16886.11规定方法测定，应符
16886.4表定的方法测定，应符
期GB/16886.6规定的方法测定，应符16886/3规定的Ames试验、微核
行测，应符合4.1规定。
6.1. 1产品以同日投料，同一工生产的产品为间一批号。6. 1. 2 批检验应进行 4. 1,4. 5,4. 6,4. 74 8,4. 9,4. 10 的检测6.2型式检验
6.2.1型式检验为全性能检验。
6.2.2式检验时，若所有检验项目全部合格，则判定为合格.否则判定为不合格。6.3抽样检验
抽样方案按照GB/T2828.1进行。7标志
7.1大包装应有下列标志：
a）生产厂名和地址：
b）产品名称；
产品注册号和执行标准编号：
分类和规格：
生产批号或日期；
尖效日期，
此存条件。
小包装应有下列标志：
产品名称：
生产厂名和地址：
分类和规格；
生产批号或日期，
原料来源：
失效日期；
必存条件。
储运标志应符合GB/T19I中的规定。7. 3
8包装、运输和贮存
包装应采用适宜的包装，确保游顔酸钠产品的安全性和有效性。产品的包装、览存，运输应符合YY/T0313的规定。YY/T0606.8—2008
YY/T 0606. 8—2008
A.1范围
时录A
（规范性附录）
海藻酸钠的结构组成和序列结构的\H-核磁测试方法A.1.1本检测方法用于制备组织工程医疗产品及外科植人物的海显酸销。A.1.2描述游藻龄钠的参数，包括F(G含量）,FM(M含量）M/G、Nc>1（连续G单元的平均数量大于 1的数值，即不包括-MGM-在内的 G单元的平均长度)等。A.2使用和有效性
采用1H-NMR的方法进行测定时，海藻酸钠落液的黏性有可能导致NMR谱线加宽，从而影响测定结果。色此在测定前，需要先通过条件温和的部分水解降低海薄酸钠样品溶液的黏性：把海藻酸钠溶解于99%Ds0中之后冻干，再将其溶解于99.9%D20再陈干从而制备低1H20含量的样品。三乙烯四胺六乙酸（TTHA)被用作整合剂以防止二价阳离子与海酸钠反应，这种反应可以导致谱线加宽以及信号强度的选择性丢失。
A.3材料
A.3.1化学物质
A.3.1.1海藻酸钠样品。
A. 3. 1. 2 去离子水，
A. 3. 1. 3HCI 裕液(1 mol/L,0. 1 mol/1)。A. 3. 1. 4NaOH 溶液(1 mol/L,0. 1 mol/L) 。A. 3. 1. 5D2 0(99%~99. 9%,99. 9%)A. 3. 1. 6 三乙烯四胺六Z酸(TTHA,D2O 中 0. 3 rno1/L,DC1 或 NaOD 调 pH值至-~5. 5)。A.3.2仪器
A.3.2.1分析天平(0.1mg)。
A.3.2.2振荡器。
A. 3.2. 3 pH计。
A. 3. 2. 4 水裕(100 C)。
A.3.2.5冻干装翼。
A,3.2.6NMR仪（推荐300MHz区城强度或更高）。A.4步骤
A.4.1样品制备
A 4.1.1制备 100mL 1mg/mL游染酸钠水溶液。A. 4. 1.2HCl溶被(1 mol/L,0. 1 mol/1.)调 pH值为 5. 6,格其置于100 ℃水浴中 1 hA, 4. 1. 3HCI溶液(1 maL/L.,0. 1 mol/L)调 pH值为 3, 8,将其置于 100 C水裕中 30 min。A.4.1.4NaOH浴液(1mol/L.,0.1mol/L)调pH值为7~8，冻于样品过夜。A. 4. 1. 5 在 99%~~99. 9% Ds0 5 mL 中溶解海酸钠样品,再次冻-F。A.4.1.6在99.9%Dz01mL中溶解海酸钠样品10mg~12mgA.4.1.7在NMR样品管中如人0.7mL游酸钠样品，再加人20μL.0.3mol/LTTHA。6
A,4. 2 技术参数
A.4.2.1酸钠'H-NMR零数
1H-NMR应在80，20Hz的标准一图脉冲中获得。原子核
质子谱带宽度()
扫描淡数
弛豫时间
质子脉冲角度
扫描时间
0. 5+9. 5
YY/T0606.8—2008
取得样品数据点的数量取决于谱带宽度（H2）和扫描时间：32768（400Hz时）推荐使用数字式滤器以及适合的数信号处理器以获得良好的整线。A. 4.2.2参考谱图
见图1。
A.4.3计算
A.4.3.11H-NMR数据由一系列方程式或影响因素进行计算。这些因素包括（i)数据的最高平均数：（i)保证度（例如,FM=FMM十FMG）。在图1中显示了信号A,B1,B2,B，B,和C的积分强度。HNMR中这些信号的意义如下：
Ted-a:
red-b:
alpha reducing-ends
beta reducing-ends
海藻酸钠的化学成分和序列结构取决于信号的强度，它反映了各个成分的量。A.4.3.2
相关公式如下：
G - 0. 5'A +C +0. 5(B + B + B,) -M = B +0. 5(BI + B2 + B)
GG = 0. 5[A + C - 0. 5(B1 + B2 + B)]MG = GM = 0. 5(B1 + B + B)
MM BA
GGM = MGG=(B)0. 5(B+ B2 + B3)/(B: + B2)MGM = (Ba)0. 5(B) + B2 + B:)/(B1 +-B2)GGG = GG -GGM
FG = G/(M+G)
FM = M/(M+G)
FGG = GG/(M+ G)
FMM = MM/(M+G)
FcM = FMG = MG/(M+G)
Fcue = GGG/(M +G)
FMEMMCM/(M+G)
FcCM = FMeG = GGM/(M +G)
--{ A. 4)
.-(A.6)
.(A.7)
.-(A.8)
.(A.9)
..(A. 15 )
YY/T 06Q6. 8-2008
Nc=Fc/FcM
NgG21 = (F - Fmgm)/FccM
NM FM/FMG
...(A.19 )
如果reducingendsignals也被积分（\red-a\和\red-b\），则平均聚合度的评估公式如下：DP。 = (M+G+ red-a + red-h)/(red-a+ red-h)中：
G—α-L-古罗糖醛酸！
9D-甘露糖醛酸：
GG,GGG
MM,MMM
MG.GGM,MGM
FCG、FaCG
Fcm.FmeM.FcgM
-Q-L-古罗糖醛酸聚合嵌段：
β-D-甘露糖醛酸体合嵌段：
α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘露糖醛崴聚合嵌段;-α-L-古罗糖醛酸含最；
3-D甘露醛酸含量：
-L-古罗糖醛酸聚合嵌段含量：
P-D-甘露糖醛酸聚合嵌段含量：α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘体糖醛酸聚合嵌段含量：连续的α-L-古罗糖醛酸单体的平均数量；--(A. 20 )
连续的α-L-古罗糖醛酸单体的平均数量大于1的数值,即不包括-MGM-在内的G单元的平均长度；
违续的β-D-甘露糖醛酸单体的平均数量；平均聚合度。
A.5标准偏差和结果
A.5. 1Fc及其标准偏差(SD)应精确到 0. 01。A.5.2G含量高的海酸钠应给出G含量，例如，Fc为0.68（标准偏差=士0.01)。M含量高的海酸钠应给出M含量，例如，FM为0.66（标准偏差=土0.01)8
B.1概述
附录B
（规范性附录）
海藻酸钠平均分子意及其分子意分布的测试方法YY/T 0606.8—2008
海藻酸钠的分子量决定着它的某些特批如黏度翻或胶体拉伸率等。由于上述原因以及这些特性的不同对最终用途的影响，采用直或间接的方法测定海藻酸钟的分子量是十分必要的。海藻酸钠是一个确定分子量范围的多分散本系。分子量可用数均分子量（M，）和重均分子量（M.）来表示。可以通过下述方式来测定：
B.2依据特性黏数测定
#钠分子量
特性黏数是描谨质量聚合
的一种特性，与浓更无关与聚会的
Sakurada方程L
f,其中
0. 5~1, 当a=
对海藻酸馆
定待性黏数，并节
在离子强
样品的K和
维应确保在温
测定。整个测
等条件下进行
其具体操如下。精带
NaCI溶液中（含005%乙二腔
药典》(2005版万村录VG第
10-$,a=1,代人Houwin!
寸（例妞0.1m
表征聚给物在特定浴剂和温度条件下站数的青算公式为：Mark-Houwink-者述聚合物组成的经验常数，通常为溶液），其借数接近于1。通过测eo
的需购全
量。特性数可以通过乌氏黏度计NaCl溶液和足够低的海藻酸钠浓度的海
0.2g,置于约50mL的0. 1rol/L
量c4h后格群元播释至100mL
安中华人民共和国
特性黏数（n）（高质控制在20℃主.05）其中K-2.0x供面尊氮酸钠的平均分子量，
心与多有
B.3用凝胶渗透
青光点
仪(SEXMAIIS测定海藻酸纳平均分子量及其分子盘分布多角度激光散感衣作为體分子量用的障最检测器，不需精准品最准，克服了样品与标准品的化学组成、分子结构及人水带来的误差。由于通常无法获得海酸钠的标准品，GPC 结合 SEC-MALLS 方法为测定其量提供了新的途径。色谱条件如下：采用1400%PWx色谱柱；多角度激究检测及示差折光检测器；流动相为0. 1 mol/L NaNOa 溶液:流速0. 5 mL/mm.采用 GPC 结合 SEC-MALLS,塞690. 0 nm 的波长和 25 下测定撤射光强。海藻酸钠溶液的溶剂为超纯水。将样品按上述色谐条件进样，测定力了量及其分子量分布。由Zmm图用外推法计算M.，M以及分子量分布指数M/M.。
YY/T 0606. 8--2008
c.1原理
附录C
(规范性附录）
海藻酸钠蛋白质含量测定
库马斯亮藍G-250其有两种色调，在游离状态下呈红色，与蛋白质结合后转为青色，口其色深浅与蛋白质的浓度成正比。
C.2设备
C.2. 1分析天平。
C. 2. 2分光光度计。
C.2.3旋满式混合器。
C.3 溶液制备
注：实验所用试剂均为分析纯。C.3.1库马斯亮蓝G-250试液：称取库马斯亮蓝G-250100mg溶解于50mL的95%乙醇中，再加人85%（体积分数）的磷酸100mL，并用蒸留水稀释至1000mL，置于棕色瓶内，室温贮存C.3.2蛋白质标准液：精确吸取5%人血清白蛋白标准液0.2mL于1000mL容量瓶中，用蒸馅水稀释至刻度,4℃下览存。
C.4样品准备
取海藻酸钠药5mg，精确称重，置于试管中，加1000nL蒸馅水后精确称重。充分振荡混匀，使其完全溶解。按式（C.1）计算样品管中海藻酸钠含量（μg/g）。p =mXc/mXd
式中：
海藻酸钠质量，单位为微克（rg）：m
海藻酸钠和蒸馏水的质量，单位为克(g)：海藻酸钠测定浓度值，%，
该浓度下测得的海藻酸钠密度，单位为克每毫升（/mL）。C.5别定步骤
按表C.1制备蛋白质标准液系列。表C.1蛋白质标准管溶液系列浓度战号
蛋白所标准溶液/mL
燕增水/mL
蛋白质浓度/(μg/mL)
C.5.2在标难液系列的各试管及样品试管中分别加入5mL的库马斯亮蓝G-250落液。用旋涡式混合器使试管中溶液充分混合，并在温度（20士10)C下放置15min：用0号管作对照，用分光光胶计测定595nm处各标准管和样品管的吸光度。10
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