QB/T 5601-2021
基本信息
标准号： QB/T 5601-2021
中文名称：口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
标准类别：轻工行业标准(QB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 口腔 清洁 护理 用品 牙膏 溶菌酶 抗菌 活性 测定
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
QB/T 5601-2021.Oral care and cleansing products- Determination of the antibacterial activity of enzymes in toothpastes and oral rinses.
QB/T 5601描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。
QB/T 5601适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。
注:本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸酯钠为发泡剂的产品。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
GB/T 35919口腔清洁护理 用品分类和术语
3术语和定义
GB/T 35919界定的术语和定义适用于本文件。
4方法要点
利用溶菌酶专一性水解敏感菌(溶壁微球菌)细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。
5试剂与标准物质
5.1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682规定的三级水。
5.2 !溶菌酶标准品:蛋清lysozyme,酶活力≥20000 U/mg, CAS号12650-88-3.
5.3冻干色源底物: 按照附录A规定的方法制备。
5.4琼脂粉: BR级生物试剂。
5.5氢氧化钠。 .
5.6磷酸二氢钠( NaH2PO4:2H2O) 。
5.7磷酸氢二钠(NazHPO4. 12H2O)。
5.80.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.5) ;
QB/T 5601描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。
QB/T 5601适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。
注:本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸酯钠为发泡剂的产品。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法
GB/T 35919口腔清洁护理 用品分类和术语
3术语和定义
GB/T 35919界定的术语和定义适用于本文件。
4方法要点
利用溶菌酶专一性水解敏感菌(溶壁微球菌)细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。
5试剂与标准物质
5.1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682规定的三级水。
5.2 !溶菌酶标准品:蛋清lysozyme,酶活力≥20000 U/mg, CAS号12650-88-3.
5.3冻干色源底物: 按照附录A规定的方法制备。
5.4琼脂粉: BR级生物试剂。
5.5氢氧化钠。 .
5.6磷酸二氢钠( NaH2PO4:2H2O) 。
5.7磷酸氢二钠(NazHPO4. 12H2O)。
5.80.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.5) ;
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标准内容
ICS71.100.40
CCSY43
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5601-2021
口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
Oral care and cleansing products Determination of the antibacterial activityof enzymes in toothpastes and oral rinses2021-05-17发布
中华人民共和国工业和信息化部2021-10-01实施
QB/T5601-2021
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。本文件起草单位：江苏雪豹日化有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。本文件主要起草人：陈新宇、徐志良、李鑫宇、刘文玉、谈红、税钿、张劲松、夏泽敏、杨铭本文件为首次发布。
1范围
口腔清洁护理用品
QB/T5601-2021
牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定本文件描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。本文件适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。注：本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸酯钠为发泡剂的产品。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语3术语和定义
GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。4方法要点
利用溶菌酶专一性水解敏感菌（溶壁微球菌）细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。5试剂与标准物质
5.1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的三级水。5.2溶菌酶标准品：蛋清lysozyme，酶活力≥20000U/mg，CAS号12650-88-3。5.3冻干色源底物：按照附录A规定的方法制备。5.4琼脂粉：BR级生物试剂。
氢氧化钠。
磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。5.7
5.80.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：QB/T5601-2021
溶液A（0.2mol/L磷酸氢二钠）：称取71.46g磷酸氢二钠（5.7），用水溶解并定容至1000mL
溶液B（0.2mol/L磷酸二氢钠）：称取31.21g磷酸二氢钠（5.6），用水溶解并定容至1000mL；
将32mL溶液A与68mL溶液B混合，使用时用去离子水稀释1倍，即为0.1mol/LpH6.5磷酸盐缓冲液。
5.91%冻干色源底物溶液：称取0.1g冻干色源底物，加入10mL磷酸盐缓冲液（5.8）中，充分混匀后备用。
5.102%琼脂溶液：称取2g琼脂粉于250mL三角烧瓶中，加入100mL水，备用。6仪器与设备
6.1高速离心机：转速不小于8000r/min。6.2电子天平：精度0.001g。
6.3恒温培养箱。
6.4灭菌锅。
6.5电炉。
6.6冰箱。
6.7超净工作台。
6.8微量移液器两支：20uL~200uL、100μL~1000μL。6.9移液枪头：20μL~200L移液器配套枪头、100uL~1000μL移液器配套枪头。6.10打孔器：@10mm。
6.11培养Ⅲ：@90mm。
6.12离心管：5mL、50mL。
6.13三角烧瓶：250mL。
6.14容量瓶：1000mL。
6.15精密试纸：pH6.4~8.0。
7测定步骤
7.1灭菌
将培养皿、打孔器、离心管、移液枪头分别用牛皮纸包好放入灭菌锅；将配制好的2%琼脂溶液、0.1mol/LpH6.5磷酸盐缓冲液放入灭菌锅，121℃C，灭菌20min。7.2色源底物琼脂平板的制备
取2%的琼脂溶液100mL，灭菌处理后室温放置，冷却至约65℃C，加入1%冻干色源底物溶液10mL，混匀后小心倒入培养皿内（@90mm，每块平板约25mL～30mL），水平放置。待凝固后，置于洁净工作台内约2h，或置于4C冰箱存放至次日使用。使用前用无菌打孔器在平板上打出所需的孔洞（孔洞的间距不小于10mm），弃去孔中琼脂块，形成完整空穴备用。2
7.3样品的前处理
QB/T5601—2021
7.3.1称取含酶产品1g于5mL离心管中，加入3mL磷酸盐缓冲液（58），室温下放置过夜，期间需轻缓摇晃至完全溶解。再以12000/min，离心10min，取上清液备用。7.3.2水剂样品用移液枪吸取1mL于5mL离心管中，加入3mL磷酸盐缓冲液（5.8），混匀后备用。7.3.3根据试样中酶含量的多少，选择适当的稀释倍数。7.4加样
用移液器向平板中的琼脂孔内加入（7.3）样品溶液（100uL/孔）进行测定。同时用标准酶溶液作为阳性对照，用不含酶的相同基质产品的上清液作为阴性对照，磷酸盐缓冲液（58）作为空白对照。7.5恒温培养
将（7.4）中经加样后的平板水平移入37C的恒温培养箱中，恒温培养24h结果表示
色源底物琼脂平板中出现透明圈（如图B.1所示表明样品中的菌酶具有活性。
QB/T5601-2021
A.1试剂
附录A
（规范性）
冻干色源底物的制备
藤黄微球菌（Micrococcus lysodeikticusATCC4698）A.1.1
A.1.2活性染料艳红K-2BP
A1.3磷酸盐缓冲液：配同（58）A.1.4牛肉膏：BR级生物试剂
A.1.5胰蛋白陈：
BR级生物试剂
A.1.6氯化钠。
氢氧化钠。
试验步骤
肉汤培养基的制备
牛肉膏0.5%，蛋白陈1.0%，氯化钠0.5%，用0.1N氢氧化钠调节至pH7.5。温度121C，灭菌20min。
A.2.2菌体的培养与收集
将活化后的藤黄微球菌MicrococcuslysodeikticusATCC4698）接种于灭菌的肉汤培养基中，37℃振荡培养12h~14h后取出灭菌，通过离心（8000r/min）收集菌体，经冷冻干燥，制得干燥菌体。A.2.3活性染色底物的共价标记
5g，加入125moL/V氢氧化钠50mL，再加2.5g活性染料艳红K-2BP搅半均匀，于25℃取干燥菌体5
水浴放置24h进行染色反应。完成后经8000r/min离心10min收集红色菌体。染色菌体反复用去离子水洗涤并离心，以除去未参加反应的游离染料，反复处理直至上清液无色，由此得到净化的染色菌体。将染色菌体冷冻干燥保存，使用时用述磷酸盐缓冲液配制即可。
标引序号说明：
附录B
（资料性）
标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈图例-0.02%标准溶菌酶溶液；
2—0.01%标准溶菌酶溶液：
—0.005%标准溶菌酶溶液；
0.001%标准溶菌酶溶液；
0.0001%标准溶菌酶溶液；
PBS（0.1mol/L磷酸盐缓冲液）。图B.1标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈QB/T5601-2021
中华人民共和国
轻工行业标准
口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
QB/T5601-2021
中国轻工业出版社出版发行
地址：北京东长安街6号
邮政编码：100740
发行电话：（010)65241695
网址：http：//chlip.com.cnEmail:[email protected]
轻工业标准化编辑出版委员会编辑地址：北京西城区月坛北小街6号院邮政编码：100037
电话：(010)68049923免费标准bzxz.net
版权所有侵权必究
书号：155019·5682
印数：1-200册
定价：22.00元
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CCSY43
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5601-2021
口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
Oral care and cleansing products Determination of the antibacterial activityof enzymes in toothpastes and oral rinses2021-05-17发布
中华人民共和国工业和信息化部2021-10-01实施
QB/T5601-2021
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。本文件起草单位：江苏雪豹日化有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。本文件主要起草人：陈新宇、徐志良、李鑫宇、刘文玉、谈红、税钿、张劲松、夏泽敏、杨铭本文件为首次发布。
1范围
口腔清洁护理用品
QB/T5601-2021
牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定本文件描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。本文件适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。注：本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸酯钠为发泡剂的产品。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语3术语和定义
GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。4方法要点
利用溶菌酶专一性水解敏感菌（溶壁微球菌）细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。5试剂与标准物质
5.1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的三级水。5.2溶菌酶标准品：蛋清lysozyme，酶活力≥20000U/mg，CAS号12650-88-3。5.3冻干色源底物：按照附录A规定的方法制备。5.4琼脂粉：BR级生物试剂。
氢氧化钠。
磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。5.7
5.80.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：QB/T5601-2021
溶液A（0.2mol/L磷酸氢二钠）：称取71.46g磷酸氢二钠（5.7），用水溶解并定容至1000mL
溶液B（0.2mol/L磷酸二氢钠）：称取31.21g磷酸二氢钠（5.6），用水溶解并定容至1000mL；
将32mL溶液A与68mL溶液B混合，使用时用去离子水稀释1倍，即为0.1mol/LpH6.5磷酸盐缓冲液。
5.91%冻干色源底物溶液：称取0.1g冻干色源底物，加入10mL磷酸盐缓冲液（5.8）中，充分混匀后备用。
5.102%琼脂溶液：称取2g琼脂粉于250mL三角烧瓶中，加入100mL水，备用。6仪器与设备
6.1高速离心机：转速不小于8000r/min。6.2电子天平：精度0.001g。
6.3恒温培养箱。
6.4灭菌锅。
6.5电炉。
6.6冰箱。
6.7超净工作台。
6.8微量移液器两支：20uL~200uL、100μL~1000μL。6.9移液枪头：20μL~200L移液器配套枪头、100uL~1000μL移液器配套枪头。6.10打孔器：@10mm。
6.11培养Ⅲ：@90mm。
6.12离心管：5mL、50mL。
6.13三角烧瓶：250mL。
6.14容量瓶：1000mL。
6.15精密试纸：pH6.4~8.0。
7测定步骤
7.1灭菌
将培养皿、打孔器、离心管、移液枪头分别用牛皮纸包好放入灭菌锅；将配制好的2%琼脂溶液、0.1mol/LpH6.5磷酸盐缓冲液放入灭菌锅，121℃C，灭菌20min。7.2色源底物琼脂平板的制备
取2%的琼脂溶液100mL，灭菌处理后室温放置，冷却至约65℃C，加入1%冻干色源底物溶液10mL，混匀后小心倒入培养皿内（@90mm，每块平板约25mL～30mL），水平放置。待凝固后，置于洁净工作台内约2h，或置于4C冰箱存放至次日使用。使用前用无菌打孔器在平板上打出所需的孔洞（孔洞的间距不小于10mm），弃去孔中琼脂块，形成完整空穴备用。2
7.3样品的前处理
QB/T5601—2021
7.3.1称取含酶产品1g于5mL离心管中，加入3mL磷酸盐缓冲液（58），室温下放置过夜，期间需轻缓摇晃至完全溶解。再以12000/min，离心10min，取上清液备用。7.3.2水剂样品用移液枪吸取1mL于5mL离心管中，加入3mL磷酸盐缓冲液（5.8），混匀后备用。7.3.3根据试样中酶含量的多少，选择适当的稀释倍数。7.4加样
用移液器向平板中的琼脂孔内加入（7.3）样品溶液（100uL/孔）进行测定。同时用标准酶溶液作为阳性对照，用不含酶的相同基质产品的上清液作为阴性对照，磷酸盐缓冲液（58）作为空白对照。7.5恒温培养
将（7.4）中经加样后的平板水平移入37C的恒温培养箱中，恒温培养24h结果表示
色源底物琼脂平板中出现透明圈（如图B.1所示表明样品中的菌酶具有活性。
QB/T5601-2021
A.1试剂
附录A
（规范性）
冻干色源底物的制备
藤黄微球菌（Micrococcus lysodeikticusATCC4698）A.1.1
A.1.2活性染料艳红K-2BP
A1.3磷酸盐缓冲液：配同（58）A.1.4牛肉膏：BR级生物试剂
A.1.5胰蛋白陈：
BR级生物试剂
A.1.6氯化钠。
氢氧化钠。
试验步骤
肉汤培养基的制备
牛肉膏0.5%，蛋白陈1.0%，氯化钠0.5%，用0.1N氢氧化钠调节至pH7.5。温度121C，灭菌20min。
A.2.2菌体的培养与收集
将活化后的藤黄微球菌MicrococcuslysodeikticusATCC4698）接种于灭菌的肉汤培养基中，37℃振荡培养12h~14h后取出灭菌，通过离心（8000r/min）收集菌体，经冷冻干燥，制得干燥菌体。A.2.3活性染色底物的共价标记
5g，加入125moL/V氢氧化钠50mL，再加2.5g活性染料艳红K-2BP搅半均匀，于25℃取干燥菌体5
水浴放置24h进行染色反应。完成后经8000r/min离心10min收集红色菌体。染色菌体反复用去离子水洗涤并离心，以除去未参加反应的游离染料，反复处理直至上清液无色，由此得到净化的染色菌体。将染色菌体冷冻干燥保存，使用时用述磷酸盐缓冲液配制即可。
标引序号说明：
附录B
（资料性）
标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈图例-0.02%标准溶菌酶溶液；
2—0.01%标准溶菌酶溶液：
—0.005%标准溶菌酶溶液；
0.001%标准溶菌酶溶液；
0.0001%标准溶菌酶溶液；
PBS（0.1mol/L磷酸盐缓冲液）。图B.1标准酶溶液色源底物琼脂平板中的透明圈QB/T5601-2021
中华人民共和国
轻工行业标准
口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
QB/T5601-2021
中国轻工业出版社出版发行
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邮政编码：100740
发行电话：（010)65241695
网址：http：//chlip.com.cnEmail:[email protected]
轻工业标准化编辑出版委员会编辑地址：北京西城区月坛北小街6号院邮政编码：100037
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版权所有侵权必究
书号：155019·5682
印数：1-200册
定价：22.00元
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