QB/T 5602-2021
基本信息
标准号： QB/T 5602-2021
中文名称：口腔清洁护理用品牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的测定高效液相色谱法
标准类别：轻工行业标准(QB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 口腔 清洁 护理 用品 牙膏 没食子酸 测定 高效 色谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
QB/T 5602-2021.Oral care and cleansing products- Determination of epigallocatechin gallate in toothpastes- High performance liquid chromatography.
QB/T 5602描述了采用高效液相色谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯( Eiallcatechingallate, EGCG)的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出限和定量限、回收率和精密度、允许差。
QB/T 5602适用于样品采用高效液相色谱仪分离,运用色谱法和质谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量。当样品溶液浓度低于0.5 ug/mL或者有干扰存在时，需用质谱法进一步判定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验 室用水规格和试验方法
GB/T 35919口腔清洁护理用 品分类和术语
3术语和定义
GB/T 35919界定的术语和定义适用于本文件。
4色谱法
4.1 原理
试样经含乙二胺四乙酸二钠及抗坏血酸的20%甲醇水溶液提取，过滤后,用高效液相色谱仪测定表没食子儿茶素没食子酸酯，以紫外检测器检测，外标法定量。
4.2试剂和材料
4.2.1除另有规定外， 本试验用水均为GB/T 6682中规定的-级水，所有试剂均为分析纯。
4.2.2表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对照品(CAS号: 989-51-5) :纯度≥92%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，信息如下。
化学名称: (2R,3R) -5,7-二羟基-2- (3,4,5-三羟基苯基) 苯并吡喃-3-基3,4,5-三经基苯甲酸酯。
分子式: C22HgO11. .
相对分子质量: 459.37 (按2013年国际相对原子质量) .
结构式见图1。
QB/T 5602描述了采用高效液相色谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯( Eiallcatechingallate, EGCG)的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出限和定量限、回收率和精密度、允许差。
QB/T 5602适用于样品采用高效液相色谱仪分离,运用色谱法和质谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量。当样品溶液浓度低于0.5 ug/mL或者有干扰存在时，需用质谱法进一步判定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验 室用水规格和试验方法
GB/T 35919口腔清洁护理用 品分类和术语
3术语和定义
GB/T 35919界定的术语和定义适用于本文件。
4色谱法
4.1 原理
试样经含乙二胺四乙酸二钠及抗坏血酸的20%甲醇水溶液提取，过滤后,用高效液相色谱仪测定表没食子儿茶素没食子酸酯，以紫外检测器检测，外标法定量。
4.2试剂和材料
4.2.1除另有规定外， 本试验用水均为GB/T 6682中规定的-级水，所有试剂均为分析纯。
4.2.2表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对照品(CAS号: 989-51-5) :纯度≥92%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，信息如下。
化学名称: (2R,3R) -5,7-二羟基-2- (3,4,5-三羟基苯基) 苯并吡喃-3-基3,4,5-三经基苯甲酸酯。
分子式: C22HgO11. .
相对分子质量: 459.37 (按2013年国际相对原子质量) .
结构式见图1。
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标准内容
ICS71.100.40
CCSY43
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5602-2021
口腔清洁护理用品
牙膏中表没食子儿茶
素没食子酸酯的测定
高效液相色谱法
Oral care and cleansing products Determination of epigallocatechin gallatein toothpastes - High performance liquid chromatography2021-05-17发布
2021-10-01实施
中华人民共和国工业和信息化部发布
QB/T5602-2021
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。本文件起草单位：广州薇美姿实业有限公司、好来化工（中山）有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。本文件主要起草人：陈敏珊、何琪莹、李鑫宇、陶丽、周康、李平、黄焕贤、路崴、柳华春、税钿、夏泽敏、杨铭。
本文件为首次发布。
口腔清洁护理用品
1范围
QB/T5602—2021
牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的测定高效液相色谱法
本文件描述了采用高效液相色谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechingallate，EGCG）的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出限和定量限、回收率和精密度、允许差。本文件适用于样品采用高效液相色谱仪分离，运用色谱法和质谱法测定牙育中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量。当样品溶液浓度低于0.5μg/mL或者有干扰存在时，需用质谱法进一步判定。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语3术语和定义
GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。4色谱法www.bzxz.net
4.1原理
试样经含乙二胺四乙酸二钠及抗坏血酸的20%甲醇水溶液提取，过滤后，用高效液相色谱仪测定表没食子儿茶素没食子酸酯，以紫外检测器检测，外标法定量。4.2试剂和材料
4.2.1除另有规定外，本试验用水均为GB/T6682中规定的一级水，所有试剂均为分析纯。4.2.2表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对照品（CAS号：989-51-5）：纯度≥92%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，信息如下。化学名称：（2R,3R）-5,7-二羟基-2-（3,4,5-三羟基苯基）苯并吡喃-3-基-3,4,5-三羟基苯甲酸酯。分子式：C22H18O11。
相对分子质量：459.37（按2013年国际相对原子质量）。结构式见图1。
QB/T5602—2021
4.2.3乙腈：色谱纯。
4.2.4甲醇：色谱纯。
图1结构式
4.2.5乙酸。
4.2.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）溶液：10mg/mL（现配）。4.2.7
抗坏血酸溶液：10mg/mL（现配）。稳定溶液：分别将25mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）、25mL抗坏血酸溶液（4.2.7）、50mL乙4.2.8
睛（4.2.3）加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。4.2.9液相色谱流动相：
流动相A：分别将90mL乙腈（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45um滤膜。流动相B：分别将800mL乙腈（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45um滤膜。4.2.10表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准储备液：准确称取EGCG标准品（4.2.2）10mg（精确至0.0001g）于10mL容量瓶中，用稳定溶液（4.2.8）定容至刻度，混匀。4.2.11表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准工作溶液：用稳定溶液（4.2.8）将标准储备溶液（4.2.10）分别配成浓度为0.5μg/mL、2.5μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL的标准工作溶液。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器（DAD）。分析天平：精度为0.0001g。
涡旋振荡器。
4.3.4超声波清洗器。
离心机：转速5000r/min。
滤膜：孔径为0.45um的聚四氟乙烯过滤膜。4.4分析步骤
试样处理
将牙膏试样先挤去大约20mm后，称取约2g试样（精确至0.001g）置于25mL容量瓶中，加入20mL稳定溶液（4.2.8），涡旋震荡至分散均匀，再用甲醇（4.2.4）定容，涡旋混匀后超声提取15min，取摇2
QB/T5602—2021
匀后适量溶液在离心机转速5000r/min条件下离心10min，取适量上清液经0.45um聚四氟乙烯滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
参考色谱条件
4.4.2.1、色谱柱：ck色谱柱
（5μm，250mmx4.6mm）
检测波长
流量：1mL/min。
4.4.2.4柱温：35℃。
进样量：20μL
梯度洗脱程序见表1
表1洗脱程序
4.4.3测定
标准曲线绘制
流动相A
或等效色谱柱
流动相B
分别将标准工作溶液（4.2.11）注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下测定标准溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。EGCG标样的高效液相色谱图见附录A中图A.1。4.4.3.2
样品测定
将按（4.4.1）处理好的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下进行测定，采用外标法定量。含EGCG穿膏样品的高效液相色谱图见附录A中图A.2试样溶液中EGCG的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。4.5结果计算
试样中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量x接公式（1）计算c×V×N×K1000
式中：
X试样中EGCG含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：c
由标准曲线查出试样溶液中EGCG的浓度，单位微克每毫升（μg/mL）；样品最终定容体积，单位为毫升（mL）；N稀释倍数；
QB/T5602—2021
-EGCG对照品的纯度：
试样质量，单位为克（。
4.6回收率和精密度
在添加浓度6.25mg/kg~125.00mg/kg的浓度范围内，EGCG的方法回收率在93.1%~102.5%之内，相对标准偏差小于4/8%
4.7允许差
在重复性条件下获得的两次独之测定结果的绝又对差值不应超过算术平均值的10%。4.8检出限和定量限
本色谱法中表没食子儿茶素没食子酸酯检出浓度为0.2ug/mL，定量浓度为0.5ug/mL；当取样量为2.0g时，本方法的检测限为3.0mg/kg，定量下限为6.3mg/kg。5质谱法
5.1原理
用稳定剂和稀释液分散溶解牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），用高效液相色谱-质谱质谱仪检测样品溶液中游离表没食子儿茶素没食子酸酯，外标法定量5.2试剂和材料
5.2.1表没食子儿茶素没食子酸酯（C2H18OCAS号：989-51-5）对照品：纯度98%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.2.2乙腈：色谱纯。
5.2.3冰乙酸。
5.2.4乙二胺四乙
5.2.5抗坏血酸
钠（EDTA-2Na）
5.2.6稀释液（2%乙酸）：量取20mL乙酸，980mL超纯水于/L烧杯中，混匀。5.2.7稳定剂：
到100mL。
精确到0.01g加水溶解，定容
称取EDTA-2Na（5.2.4），抗坏血酸（5.2.5）各25.2.8EGCG标准储备液（1000mg/L）：称取EGCG对照品（52.1）25mg，精确到0.0001g，加2.5mL稳定剂（5.27），加入称释液（5.2.6）溶解，定容到25mL。5.2.9EGCG标准工作溶液：精确量取一量的EGCG标准储备液（5.2.8），用稳定剂（5.2.7）和稀释液（5.2.6）的混合溶液（稳定剂和稀释液的体积比为1：9）稀释成EGCG浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0ug/mL的标准工作溶液。5.2.10除另有说明外，所用试剂应为分析纯，试验用水应符合GB/T6682规定的一级水。5.3仪器和设备
高效液相色谱-质谱/质谱仪：配置电喷雾离子源（ESI）。5.3.2分析天平，精度为0.0001g。5.3.3超声仪。
5.3.4离心机：转速≥6000r/min。4
5.3.5滤膜：孔径为0.45μm的聚四氟乙烯过滤膜。5.3.625mL具塞试管。
5.4分析步骤
5.4.1试样的处理
QB/T5602—2021
称取牙膏（牙膏样品先挤去大约20mm）2.5g（精确到0.0001g）置于25mL具塞试管中，加入2.5mL稳定剂（5.2.7）和15mL稀释液（5.2.6）超声10min使其充分分散，冷却，加稀释液（5.2.6）定容至刻度，摇匀。取摇匀后适量溶液于转速6000r/min离心10min，取上清液用滤膜过滤，取续滤液待用。5.4.2参考色谱条件
5.4.2.1色谱柱：C18.（2.7um，3.0mm×100mm）或相当性能色谱柱。5.4.2.2柱温：35°℃C。
5.4.2.3流动相：32%乙睛水溶液。5.4.2.4流量：0.3mL/min。
5.4.2.5进样量：2μL。
5.4.3参考质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
5.4.3.2扫描方式：负离子扫描。雾化气：氮气，275.8kPa。
5.4.3.4干燥气：氮气，流量10L/min。5.4.3.5毛细管温度：350℃。
毛细管电压：3000V。
采集模式：多反应监测（MRM），多反应监测条件见表2。表2EGCG多反应监测条件
5.4.4定性和定量
定量离子对
457/169
定性离子对
457/305
碎裂电压/ev
在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和试样溶液的测定，如果试样溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中目标物质色谱峰的保留时间一致（变化范围在土2.5%之内），所选的监测离子对的质荷比也一致，且监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在对应的目标成分。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
>20~50
>10~20
QB/T5602—2021
5.4.5测定
5.4.5.1标准曲线的绘制
待仪器稳定后，参照（5.4.2）和（5.4.3）的仪器工作条件，按浓度由低至高依次测定标准系列工作溶液（5.2.9），以定量离子峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，线性相关系数不应小于0.99。5.4.5.2试样的测定
在相同的仪器条件下测定试样溶液，以保留时间和定性离子定性，记录定量离子峰面积，质谱图见附录B，根据标准曲线查得试样溶液中EGCG的浓度。如果试样溶液中EGCG浓度超出标准曲线的线性范围，则可将试样溶液再进行适当稀释。5.4.6结果计算
试样中EGCG的含量按照公式（1）计算。5.4.7允许差
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%5.4.8检出限和定量限
质谱法检测表没食子儿茶素没食子酸酯检出浓度为0.05μug/mL，定量浓度为0.1μg/mL；当取样量为2.5g时，本方法表没食子儿茶素没食子酸酯的定量下限为1.0mg/kg。1200
(nvw）
附录A
（资料性）
EGCG液相色谱图
时间（min）
EGCG对照品色谱图
时间（min）
2含EGCG牙膏样品色谱图
QB/T5602-2021
QB/T5602-2021
号强度
BSIMRM(457.0-)169.0)
BSIMRM(457.0)305.0)
附录B
(资料性）
EGCG质谱谱图
采集时间（min)
采集时间（min）
对照品溶液MRM谱图
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CCSY43
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5602-2021
口腔清洁护理用品
牙膏中表没食子儿茶
素没食子酸酯的测定
高效液相色谱法
Oral care and cleansing products Determination of epigallocatechin gallatein toothpastes - High performance liquid chromatography2021-05-17发布
2021-10-01实施
中华人民共和国工业和信息化部发布
QB/T5602-2021
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。本文件起草单位：广州薇美姿实业有限公司、好来化工（中山）有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。本文件主要起草人：陈敏珊、何琪莹、李鑫宇、陶丽、周康、李平、黄焕贤、路崴、柳华春、税钿、夏泽敏、杨铭。
本文件为首次发布。
口腔清洁护理用品
1范围
QB/T5602—2021
牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯的测定高效液相色谱法
本文件描述了采用高效液相色谱法测定牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechingallate，EGCG）的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出限和定量限、回收率和精密度、允许差。本文件适用于样品采用高效液相色谱仪分离，运用色谱法和质谱法测定牙育中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量。当样品溶液浓度低于0.5μg/mL或者有干扰存在时，需用质谱法进一步判定。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语3术语和定义
GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。4色谱法www.bzxz.net
4.1原理
试样经含乙二胺四乙酸二钠及抗坏血酸的20%甲醇水溶液提取，过滤后，用高效液相色谱仪测定表没食子儿茶素没食子酸酯，以紫外检测器检测，外标法定量。4.2试剂和材料
4.2.1除另有规定外，本试验用水均为GB/T6682中规定的一级水，所有试剂均为分析纯。4.2.2表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对照品（CAS号：989-51-5）：纯度≥92%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，信息如下。化学名称：（2R,3R）-5,7-二羟基-2-（3,4,5-三羟基苯基）苯并吡喃-3-基-3,4,5-三羟基苯甲酸酯。分子式：C22H18O11。
相对分子质量：459.37（按2013年国际相对原子质量）。结构式见图1。
QB/T5602—2021
4.2.3乙腈：色谱纯。
4.2.4甲醇：色谱纯。
图1结构式
4.2.5乙酸。
4.2.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）溶液：10mg/mL（现配）。4.2.7
抗坏血酸溶液：10mg/mL（现配）。稳定溶液：分别将25mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）、25mL抗坏血酸溶液（4.2.7）、50mL乙4.2.8
睛（4.2.3）加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。4.2.9液相色谱流动相：
流动相A：分别将90mL乙腈（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45um滤膜。流动相B：分别将800mL乙腈（4.2.3）、20mL乙酸（4.2.5）、2mLEDTA-2Na溶液（4.2.6）加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液应过0.45um滤膜。4.2.10表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准储备液：准确称取EGCG标准品（4.2.2）10mg（精确至0.0001g）于10mL容量瓶中，用稳定溶液（4.2.8）定容至刻度，混匀。4.2.11表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）标准工作溶液：用稳定溶液（4.2.8）将标准储备溶液（4.2.10）分别配成浓度为0.5μg/mL、2.5μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL的标准工作溶液。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器（DAD）。分析天平：精度为0.0001g。
涡旋振荡器。
4.3.4超声波清洗器。
离心机：转速5000r/min。
滤膜：孔径为0.45um的聚四氟乙烯过滤膜。4.4分析步骤
试样处理
将牙膏试样先挤去大约20mm后，称取约2g试样（精确至0.001g）置于25mL容量瓶中，加入20mL稳定溶液（4.2.8），涡旋震荡至分散均匀，再用甲醇（4.2.4）定容，涡旋混匀后超声提取15min，取摇2
QB/T5602—2021
匀后适量溶液在离心机转速5000r/min条件下离心10min，取适量上清液经0.45um聚四氟乙烯滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
参考色谱条件
4.4.2.1、色谱柱：ck色谱柱
（5μm，250mmx4.6mm）
检测波长
流量：1mL/min。
4.4.2.4柱温：35℃。
进样量：20μL
梯度洗脱程序见表1
表1洗脱程序
4.4.3测定
标准曲线绘制
流动相A
或等效色谱柱
流动相B
分别将标准工作溶液（4.2.11）注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下测定标准溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。EGCG标样的高效液相色谱图见附录A中图A.1。4.4.3.2
样品测定
将按（4.4.1）处理好的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，在（4.4.2）的色谱条件下进行测定，采用外标法定量。含EGCG穿膏样品的高效液相色谱图见附录A中图A.2试样溶液中EGCG的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。4.5结果计算
试样中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量x接公式（1）计算c×V×N×K1000
式中：
X试样中EGCG含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：c
由标准曲线查出试样溶液中EGCG的浓度，单位微克每毫升（μg/mL）；样品最终定容体积，单位为毫升（mL）；N稀释倍数；
QB/T5602—2021
-EGCG对照品的纯度：
试样质量，单位为克（。
4.6回收率和精密度
在添加浓度6.25mg/kg~125.00mg/kg的浓度范围内，EGCG的方法回收率在93.1%~102.5%之内，相对标准偏差小于4/8%
4.7允许差
在重复性条件下获得的两次独之测定结果的绝又对差值不应超过算术平均值的10%。4.8检出限和定量限
本色谱法中表没食子儿茶素没食子酸酯检出浓度为0.2ug/mL，定量浓度为0.5ug/mL；当取样量为2.0g时，本方法的检测限为3.0mg/kg，定量下限为6.3mg/kg。5质谱法
5.1原理
用稳定剂和稀释液分散溶解牙膏中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），用高效液相色谱-质谱质谱仪检测样品溶液中游离表没食子儿茶素没食子酸酯，外标法定量5.2试剂和材料
5.2.1表没食子儿茶素没食子酸酯（C2H18OCAS号：989-51-5）对照品：纯度98%，或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.2.2乙腈：色谱纯。
5.2.3冰乙酸。
5.2.4乙二胺四乙
5.2.5抗坏血酸
钠（EDTA-2Na）
5.2.6稀释液（2%乙酸）：量取20mL乙酸，980mL超纯水于/L烧杯中，混匀。5.2.7稳定剂：
到100mL。
精确到0.01g加水溶解，定容
称取EDTA-2Na（5.2.4），抗坏血酸（5.2.5）各25.2.8EGCG标准储备液（1000mg/L）：称取EGCG对照品（52.1）25mg，精确到0.0001g，加2.5mL稳定剂（5.27），加入称释液（5.2.6）溶解，定容到25mL。5.2.9EGCG标准工作溶液：精确量取一量的EGCG标准储备液（5.2.8），用稳定剂（5.2.7）和稀释液（5.2.6）的混合溶液（稳定剂和稀释液的体积比为1：9）稀释成EGCG浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0ug/mL的标准工作溶液。5.2.10除另有说明外，所用试剂应为分析纯，试验用水应符合GB/T6682规定的一级水。5.3仪器和设备
高效液相色谱-质谱/质谱仪：配置电喷雾离子源（ESI）。5.3.2分析天平，精度为0.0001g。5.3.3超声仪。
5.3.4离心机：转速≥6000r/min。4
5.3.5滤膜：孔径为0.45μm的聚四氟乙烯过滤膜。5.3.625mL具塞试管。
5.4分析步骤
5.4.1试样的处理
QB/T5602—2021
称取牙膏（牙膏样品先挤去大约20mm）2.5g（精确到0.0001g）置于25mL具塞试管中，加入2.5mL稳定剂（5.2.7）和15mL稀释液（5.2.6）超声10min使其充分分散，冷却，加稀释液（5.2.6）定容至刻度，摇匀。取摇匀后适量溶液于转速6000r/min离心10min，取上清液用滤膜过滤，取续滤液待用。5.4.2参考色谱条件
5.4.2.1色谱柱：C18.（2.7um，3.0mm×100mm）或相当性能色谱柱。5.4.2.2柱温：35°℃C。
5.4.2.3流动相：32%乙睛水溶液。5.4.2.4流量：0.3mL/min。
5.4.2.5进样量：2μL。
5.4.3参考质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
5.4.3.2扫描方式：负离子扫描。雾化气：氮气，275.8kPa。
5.4.3.4干燥气：氮气，流量10L/min。5.4.3.5毛细管温度：350℃。
毛细管电压：3000V。
采集模式：多反应监测（MRM），多反应监测条件见表2。表2EGCG多反应监测条件
5.4.4定性和定量
定量离子对
457/169
定性离子对
457/305
碎裂电压/ev
在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和试样溶液的测定，如果试样溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中目标物质色谱峰的保留时间一致（变化范围在土2.5%之内），所选的监测离子对的质荷比也一致，且监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在对应的目标成分。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
>20~50
>10~20
QB/T5602—2021
5.4.5测定
5.4.5.1标准曲线的绘制
待仪器稳定后，参照（5.4.2）和（5.4.3）的仪器工作条件，按浓度由低至高依次测定标准系列工作溶液（5.2.9），以定量离子峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，线性相关系数不应小于0.99。5.4.5.2试样的测定
在相同的仪器条件下测定试样溶液，以保留时间和定性离子定性，记录定量离子峰面积，质谱图见附录B，根据标准曲线查得试样溶液中EGCG的浓度。如果试样溶液中EGCG浓度超出标准曲线的线性范围，则可将试样溶液再进行适当稀释。5.4.6结果计算
试样中EGCG的含量按照公式（1）计算。5.4.7允许差
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%5.4.8检出限和定量限
质谱法检测表没食子儿茶素没食子酸酯检出浓度为0.05μug/mL，定量浓度为0.1μg/mL；当取样量为2.5g时，本方法表没食子儿茶素没食子酸酯的定量下限为1.0mg/kg。1200
(nvw）
附录A
（资料性）
EGCG液相色谱图
时间（min）
EGCG对照品色谱图
时间（min）
2含EGCG牙膏样品色谱图
QB/T5602-2021
QB/T5602-2021
号强度
BSIMRM(457.0-)169.0)
BSIMRM(457.0)305.0)
附录B
(资料性）
EGCG质谱谱图
采集时间（min)
采集时间（min）
对照品溶液MRM谱图
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