DB13/T5189.8—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定 发布单位：河北省市场监督管理局 发布日期：2020-06-28 实施日期：2020-07-28 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009规定起草。DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分，本部分为第8部分，规范辣椒提取物中苏丹红的测定方法。标准由河北省市场监督管理局提出并归口，起草单位包括晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、石家庄海关技术中心、清河食品药品检验所。主要起草人：连运河、张玉芬、史国华、杨清山、钱建瑞、艾连峰、郭焕君。 1 范围 本部分规定了辣椒提取物中苏丹红I、II、III和IV的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定方法，适用于辣椒提取物中苏丹红I、II、III和IV的定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅注日期的版本适用；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 辣椒提取物中的苏丹红经环己烷-乙酸乙酯溶解，凝胶色谱净化后浓缩至干，用乙腈复溶，通过C18色谱柱，以乙腈+0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱，经三重四极杆质谱仪检测，采用外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，水为GB/T 6682规定的一级水，试剂均为分析纯。 4.1 试剂 4.1.1 甲酸（CH2O2）：级纯 4.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯 4.1.3 环己烷（C6H12）：色谱纯 4.1.4 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯 4.1.5 三氯甲烷（CHCl3）：色谱纯 4.2 试剂配制 环己烷-乙酸乙酯混合液（1:1，体积比）：量取500 mL环己烷与500 mL乙酸乙酯混合均匀。 4.3 标准品 4.3.1 苏丹红I标准品（C16H12N2O，CAS号：842-07-9），纯度>99.0%，或具有标准物质证书，常温20℃储存。 4.3.2 苏丹红II标准品（C16H12N2O，CAS号：3118-97-6），纯度>99.0%，常温储存。 4.3.3 苏丹红III标准品（C16H12N2O，CAS号：85-86-9），纯度>99.0%，常温储存。 4.3.4 苏丹红IV标准品（C16H12N2O，CAS号：85-83-6），纯度>99.0%，常温储存。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 混合标准储备液（100 mg/L）：称取各10 mg苏丹红I、II、III、IV标准品，加入5 mL三氯甲烷溶解，用乙腈定容至100 mL，4℃冰箱保存。 4.4.2 混合标准中间液（1 mg/L）：量取储备液1 mL至100 mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀，得到1 mg/L中间溶液。 4.4.3 混合标准使用液：从1 mg/L中间液量取0.1、0.5、1、2、5、10 mL至100 mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀，得到浓度分别为1、5、10、20、50、100 μg/L的标准使用液。 5 仪器和设备 5.1 超高效液相质谱仪（UPLC-MS/MS）：配电喷雾离子源（ESI） 5.2 电子天平：感量0.1 mg和0.01 mg 5.3 漩涡混匀器 5.4 凝胶净化色谱仪（CPC） 6 试验步骤 6.1 试样提取 称取0.1 g样品于25 mL容量瓶中，加入环己烷-乙酸乙酯混合液（1:1，体积比）定容，超声溶解后待测。