ICS01.040.67 DB34/T2562-2015 大曲酯酶活力的检测方法——酶联免疫法（ELISA） 前言 本标准按照GB/T1.1-2009规则起草，由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位包括安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司和安徽农业大学。本标准主要起草人为周庆伍、李安军、蒋军、汤有宏、江昌俊、梁绍勋、李晓欢、何宏魁、吴文睿、刘国英、汪君、李红歌及马侠。 1 范围 本标准规定了大曲酯酶活力的检测方法——酶联免疫法（ELISA），适用于大曲酯酶活力的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡注明日期的引用文件，其所注日期的版本适用于本标准；凡未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本标准。 - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 酯酶活力单位（esterase activity unit） 在37℃、pH6.0条件下，15分钟水解α-乙酸茶酯转化为α-茶酚，每产生1 nmol α-茶酚为1个酯酶活力单位（U）。 4 原理 试样中的酯酶与微孔中包被的羧酸酯酶抗体结合，在酶标记物作用下形成酶标抗体-抗原复合物，再与显色剂反应，通过酶标仪测定吸光度，根据吸光度计算试样中酯酶活力。 5 试剂和材料 5.1 除非另有说明，本实验所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级水标准。 5.2 酯酶试剂盒：在2~8℃冰箱保存。不同品牌试剂盒的操作步骤可能有所差异，溶液配制及测试程序可根据试剂盒说明书适当调整。 5.2.1 包被羧酸酯酶抗体的聚苯乙烯微量反应板 5.2.2 羧酸酯酶标准品：450 U/L 5.2.3 羧酸酯酶标记物 5.2.4 羧酸酯酶标准品稀释液 5.2.5 试样稀释液 5.2.6 洗板母液